【課件】2.2.2動物細胞融合技術(shù)與單克隆抗體課件高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修3

植物體細胞雜交植物細胞融合植物組織培養(yǎng)溫故而知新

運用植物體細胞雜交技術(shù)，可以跨越不同種植物之間生殖隔離的屏障，實現(xiàn)遠緣雜交育種，培育出新的作物類型。

那么，有沒有技術(shù)能讓不同種動物的體細胞進行雜交，培育出集不同細胞優(yōu)勢于一身的動物細胞呢？動物細胞融合技術(shù)二、動物細胞融合技術(shù)與單克隆抗體（一）動物細胞融合技術(shù)1.概念：2.原理：3.融合方法：4.意義：使兩個或多個動物細胞結(jié)合形成一個細胞的技術(shù)。細胞膜的流動性PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導(dǎo)法等。（化學(xué)法、

物理法、

生物法

）突破了有性雜交的局限，使遠緣雜交成為可能。已成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段，特別是雜交瘤技術(shù)，為制造單克隆抗體開辟了新途徑。與誘導(dǎo)植物原生質(zhì)體融合的方法一樣：P37動物細胞融合特有雜交細胞：具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息相關(guān)信息：P48

滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細菌失去感染能力，并不破壞它們的抗原結(jié)構(gòu)。滅活病毒誘導(dǎo)細胞融合的原理是：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細胞互相凝聚，細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合。動物細胞融合實質(zhì)及完成的標(biāo)志：細胞核的融合二、動物細胞融合技術(shù)與單克隆抗體（二）單克隆抗體及其應(yīng)用1.早期獲得抗體的方法：

向動物體內(nèi)反復(fù)注射某種抗原，使動物產(chǎn)生抗體，然后從動物血清中分離所需抗體。選擇性必修1P68抗原不純抗體不純?nèi)秉c：產(chǎn)量低、純度低，特異性差。為解決這一難題，科學(xué)家進行了多年的研究和探索。2.科學(xué)家發(fā)現(xiàn)哺乳動物感染病原體后，體內(nèi)會形成相應(yīng)的B淋巴細胞，這些細胞能分泌抗體，抗體識別并特異性結(jié)合病原體，從而抑制病原體的增殖等。動物體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類超過百萬種，但每一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體。因此，要想獲得大量單一抗體，必須克隆單一的B淋巴細胞，形成細胞群。

遺憾的是，在體外培養(yǎng)條件下，一個B淋巴細胞是不可能無限增殖的。如何解決這一難題？1975年，英國科學(xué)家米爾斯坦和德國科學(xué)家科勒在前人工作的基礎(chǔ)上，充分發(fā)揮想象力，設(shè)計了一個極富創(chuàng)造性的實驗方案：一種B淋巴細胞（只產(chǎn)生一種特定抗體）能在體外大量增殖的骨髓瘤細胞融合雜交瘤細胞產(chǎn)生足夠數(shù)量的特定抗體米爾斯坦科勒由于發(fā)明了單克隆抗體的制備技術(shù)，米爾斯坦和科勒于1984年獲得了諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎大量增殖單克隆抗體單克隆抗體：由單個B淋巴細胞經(jīng)過克?。o限增殖），形成基因型相同的細胞群，這一細胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體。注射特定的抗原多種B淋巴細胞骨髓瘤細胞誘導(dǎo)融合（1）未融合的細胞（2）多種雜交細胞：①B-B細胞、②瘤-瘤細胞、③雜交瘤細胞動物細胞融合（二）單克隆抗體及其應(yīng)用3.制備單克隆抗體的過程：P48~49圖2-16*不是為了得到抗體！第一次篩選：獲得雜交瘤細胞原理細胞膜的流動性（1）未融合的細胞（2）多種雜交細胞（3種）雜交瘤細胞抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞（能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞）用特定的選擇培養(yǎng)基第一次篩選克隆化培養(yǎng)、抗體檢測第二次篩選（可進行多次）注射到小鼠腹腔內(nèi)體外培養(yǎng)獲取單克隆抗體從小鼠腹水中從細胞培養(yǎng)液中動物細胞培養(yǎng)?雜交瘤細胞的特點:第二次篩選：獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的雜交瘤細胞優(yōu)點：能準(zhǔn)確地識別抗原的細微差異，與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，并且可以大量制備原理細胞增殖（二）單克隆抗體及其應(yīng)用3.制備單克隆抗體的過程：動物細胞融合（原理：細胞膜的流動性）

*不是為了得到抗體！第一次篩選：獲得雜交瘤細胞

動物細胞培養(yǎng)（原理：細胞增殖）第二次篩選：獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細胞雜交瘤細胞的特點:優(yōu)點：能準(zhǔn)確地識別抗原的細微差異，與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，并且可以大量制備未融合的親本細胞兩兩融合的細胞融合的具有同種核的細胞融合的雜交瘤細胞B-B細胞瘤-瘤細胞只考慮兩兩融合，誘導(dǎo)融合之后，一定會得到所需雜交瘤細胞嗎？思考1（二）單克隆抗體及其應(yīng)用3.制備單克隆抗體的過程不一定第二次篩選的目的是獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的雜交瘤細胞,那么如何篩選？思考2用96孔板培養(yǎng)和篩選雜交瘤細胞，（每一個孔中盡量只接種一個雜交瘤細胞），進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選就可獲得。思考3選擇抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞，抗體檢測原理是什么？抗原和抗體能夠特異性結(jié)合(分子水平的鑒定）陽性孔在單克隆抗體制備過程中，兩次篩選的目的和方法是不相同的。將雜交瘤細胞群稀釋，約每孔1個細胞進行培養(yǎng)（克隆化培養(yǎng)）一段時間后，檢測各孔上清液中細胞分泌的抗體上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔多孔細胞培養(yǎng)板抗體檢測板分泌抗體能跟特定抗原結(jié)合的細胞即為所需雜交瘤細胞補充內(nèi)容：抗體檢測方法（抗原-抗體雜交法）單克隆抗體篩選二雜交細胞雜交瘤細胞體外或體內(nèi)培養(yǎng)篩選一骨髓瘤細胞

誘導(dǎo)融合分泌特異抗體的雜交瘤細胞雜交瘤細胞群提取已免疫的B淋巴細胞動物細胞融合技術(shù)動物細胞培養(yǎng)技術(shù)小結(jié)：單克隆抗體的制備既能大量繁殖又能產(chǎn)生專一抗體特異性強靈敏度高可大量制備注射抗原現(xiàn)學(xué)現(xiàn)用：請用箭頭把以下部分步驟的字母按正確順序連接起來BAECGDHF4.單克隆抗體的應(yīng)用抗體主要發(fā)揮靶向運輸作用，即通過特異性結(jié)合靶細胞表面的抗原，將連接的藥物輸送到靶細胞；藥物發(fā)揮治療效應(yīng)，如殺傷靶細胞。ADC的抗體和藥物各具有什么作用？討論14.單克隆抗體的應(yīng)用可以用放射性同位素標(biāo)記單克隆抗體進行靶向放療。一些作用于細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的藥物可以通過阻斷腫瘤細胞的信號通路來抑制其生長，理論上也可以將這些藥物與單克隆抗體結(jié)合進行治療。除了細胞毒素，還有哪些物質(zhì)理論上可以作為ADC偶聯(lián)的藥物？討論24.單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體診斷試劑盒中的單克隆抗體只與特定的抗原反應(yīng)，因此檢測的特異性和靈敏度大大提高；生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細胞可以傳代培養(yǎng)、冷凍保存和復(fù)蘇利用，有利于控制產(chǎn)品的質(zhì)量和標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)診斷試劑盒。ADC能夠協(xié)同發(fā)揮抗體特異性識別的靶向作用和細胞毒素對腫瘤細胞的殺傷作用，因此它在臨床上具有靶點清楚、毒副作用小等優(yōu)點。單克隆抗體診斷試劑盒和ADC在臨床應(yīng)用上各具有什么優(yōu)勢？討論34.單克隆抗體的應(yīng)用（1）、廣泛用作診斷試劑抗人絨毛促性腺激素單克隆抗體4.