凝膠色譜校正曲線制作

凝膠色譜概論

——GPC曲線研制作者：李炳源一.分析一批樣品配制每瓶為單一組份窄標(biāo)樣，或各組份分子量差10陪以上混合窄標(biāo)樣建立樣品表，分子量最大的為1號(hào)瓶，依次減小一.分析一批樣品—標(biāo)樣配制警告：高分子化合物分子量越大，溶解度越小，樣品配制時(shí)不可攪拌或超聲，以防降解，只能放置自然溶解。水溶性樣，Mp≤2k，可配置濃度2mg/ml溶解要2h;≤800k，最大可配置濃度1mg/ml；>800k0.3mg/ml放1-3d。標(biāo)樣密閉冷藏，冷藏不超過(guò)1月。進(jìn)樣量：三根水性凝膠柱串聯(lián)，大分子量柱在前，小分子在后。可進(jìn)樣100ul.（柱>3可進(jìn)量200ul，<2，進(jìn)量50ul）建議定量環(huán)200ul，2414放大倍數(shù)=16.油溶性樣：聚苯乙烯≤20k，四氫呋喃為溶劑，配置0.5mg/ml(0.05%WV),進(jìn)樣20ul，2414放大倍數(shù)=8.一.分析一批一般樣品建立樣品表，標(biāo)明瓶號(hào)，分子量最大放在前面，依次排列2mg/ml二.填入分子量在通道中按瓶號(hào)依次選中各標(biāo)樣右擊—改變樣品—量（工具鈕）進(jìn)入組份編輯器—當(dāng)前（工具標(biāo)）填入各峰分子量保存修改1.選所有標(biāo)樣—改變樣品2.“修改樣品”—“量”3.進(jìn)入組份編輯器—當(dāng)前4.填入各峰分子量—第一瓶輸入1號(hào)瓶每個(gè)峰分子量Mp點(diǎn)擊當(dāng)前4.填入各峰分子量—第二瓶輸入2號(hào)瓶每個(gè)峰分子量Mp點(diǎn)擊下一個(gè)4.填入各峰分子量—第三瓶輸入3號(hào)瓶每個(gè)峰分子量點(diǎn)擊確定5.保存剛才的修改三.建立數(shù)據(jù)處理方法選分子量最大窄標(biāo)再現(xiàn)圖譜向?qū)А狦PC—峰寬參數(shù)—閾值—積分區(qū)域—最小峰面積、峰寬（可不選）GPC特殊參數(shù)：相關(guān)或普適校正，多階校正。GPC特殊參數(shù)：Vo（色譜柱：300mm×7.8mm）為5.5-6.0ml。Vt為2Vo保存方法1.再現(xiàn)分子量最大圖譜分子量最大疊加2.用向?qū)Ы⑻幚矸椒ㄌ幚矸椒ㄏ驅(qū)?.用向?qū)Ы⑻幚矸椒ā狦PC2.用向?qū)Ы⑻幚矸椒āe分參數(shù)2.用向?qū)Ы⑻幚矸椒āe分參數(shù)3.GPC特殊參數(shù)—校正與多階擬合相關(guān)與普適多階4.GPC特殊參數(shù)—Vo與VtVo（三柱串聯(lián)：300×7.8mm）為5.5-6.0ml三倍

Vt為2Vo

5.保存方法四.產(chǎn)生校正曲線在通道中按瓶號(hào)次序選中全部標(biāo)樣、再現(xiàn)圖譜打開(kāi)處理方法積分、校正計(jì)算、觀察校正曲線存儲(chǔ)校正曲線隨時(shí)修正積分錯(cuò)誤1.再現(xiàn)圖譜2.打開(kāi)處理方法3.積分、校正計(jì)算、觀察校正曲線3.1第一瓶計(jì)算后的糾正曲線注意只算了第一瓶3.2第二瓶計(jì)算后的校正正曲線只算了第一、二瓶3.3第三瓶計(jì)算后的校正曲線算了第一、二、三瓶有了足夠采樣點(diǎn)后，糾正曲線為有效曲線4.存儲(chǔ)校正曲線5.糾正無(wú)效曲線糾正積分定性錯(cuò)誤：在組份編輯器填入分子量時(shí)，按峰位填入，如定性錯(cuò)誤將導(dǎo)致分子量錯(cuò)誤。增加采樣點(diǎn)，將擬合階數(shù)由5階降為低階檢查處理方法參數(shù)是否正確，如（V05.5X3）5.1糾正無(wú)效曲線—查看積分

定性錯(cuò)誤5.1糾正無(wú)效曲線—查看積分定性正確5.1糾正無(wú)效曲線—查看方法參數(shù)5.1糾正無(wú)效曲線—降低擬合階數(shù)點(diǎn)擊處理方法5.1糾正無(wú)效曲線—降低擬合階數(shù)只算了第一瓶曲線有效第一瓶計(jì)算五.寬峰計(jì)算再現(xiàn)寬樣譜圖,打開(kāi)處理方法編輯現(xiàn)有處理方法，產(chǎn)生寬峰積分參數(shù)積分、計(jì)算觀看結(jié)果、分布曲線，保存處理方法。保存寬樣分布曲線—需要重新打開(kāi)譜圖、方法、計(jì)算后—選項(xiàng)—另存為。1.寬峰計(jì)算—再現(xiàn)譜圖打開(kāi)處理方法2.寬峰計(jì)算—編輯現(xiàn)有處理方法2.寬峰計(jì)算—產(chǎn)生寬峰積分參數(shù)3.寬峰計(jì)算—積分、計(jì)算積分、計(jì)算、結(jié)果4.1寬峰計(jì)算—結(jié)果4.2寬峰計(jì)算—分子量分布圖5.1保存寬樣分布曲線—正確

結(jié)果、選項(xiàng)、儲(chǔ)存分布曲線5.2保存寬樣分布曲線—錯(cuò)誤保存方法后要重新打開(kāi)圖譜方法再計(jì)算否則無(wú)法保存六.用寛樣產(chǎn)生校正曲線

寬樣分析后其結(jié)果（分布曲線或各分子量）可用于標(biāo)化系統(tǒng)重新標(biāo)化系統(tǒng)，把寬樣改為寬標(biāo)—用分布曲線，獲得擬合更好的新的校正曲線標(biāo)化新系統(tǒng)——用原分布曲線，獲得新的校正曲線標(biāo)化新系統(tǒng)——用統(tǒng)計(jì)值（各分子量），獲得新的校正曲線。