副溶血性弧菌

副溶血性弧菌制作人：劉明路furongxuexinghujun目錄CONTENTS生物學(xué)特性shengwuxuetexing01檢驗(yàn)結(jié)果jianyanjieguo05注意事項(xiàng)zhuyishixiang06實(shí)驗(yàn)材料shiyancailiao03操作步驟caozuobuzhou04PARTONE生物學(xué)特性生物學(xué)特性PARTONEPARTTWOPARTTHREE生物學(xué)特性本菌為G-，可兩端濃染，多形態(tài)，無芽孢，單端單鞭毛，有嗜鹽特性，在30-37℃最適溫度時(shí)增長較快，一般冬季不易檢出。多形態(tài)：弧狀、逗點(diǎn)狀球狀、絲狀桿狀、棒狀等。一、形態(tài)與染色

二、培養(yǎng)特性嗜鹽：VP在含3%～6%鹽的培養(yǎng)基繁殖迅速，低于0.5%或高于8%鹽水中停止生長。生長溫度：最適為37℃，4℃不生長。pH:最適pH為7.4-8.0。需氧性:需氧性很強(qiáng)，厭氧條件下生長緩慢三、抵抗力敏感：淡水等無鹽環(huán)境不耐熱對(duì)酸敏感，在2％冰醋酸或食醋中立即死亡，對(duì)氯、碳酸、來蘇水等一般化學(xué)消毒劑敏感：對(duì)磺胺噻唑、氯霉素、合霉素敏感。耐受：耐高濃度NaCl－海水，鹽漬醬菜中存活時(shí)間較長；耐低溫的抵抗力較強(qiáng)耐青霉素、磺胺嘧啶。四、致病性抗原類型：12種O抗原及59種K抗原致病物質(zhì)：致熱性溶血素(TDH)，TDH類似溶血毒(TRH)具有溶血活性、腸毒素和致死作用臨床上以急性起病、腹痛、嘔吐、腹瀉及水樣便為主要癥狀。主要病理變化為空腸及回腸有輕度糜爛，胃粘膜炎、內(nèi)臟(肝、脾、肺)淤血等。各種副溶血性弧菌菌落TCBS上的副溶血性弧菌菌落科瑪嘉上的副溶血性弧菌菌落分離出的副溶血性弧菌菌落PARTTWO檢驗(yàn)原理檢驗(yàn)原理01定量檢測檢驗(yàn)原理特點(diǎn)：樣品用3%氯化鈉蛋白胨水10倍連續(xù)稀釋后取三個(gè)稀釋度各接3支含有該培養(yǎng)基的平皿，培養(yǎng)計(jì)數(shù)。研究對(duì)象：樣品中是否檢出副溶血性弧菌。02定性檢測檢驗(yàn)原理特點(diǎn)：首先將樣品接種到氯化鈉瓊脂平板和ss瓊脂平板各一個(gè)，培養(yǎng)18-24h觀察研究對(duì)象：根據(jù)證實(shí)為副溶血性弧菌陽性的試管管數(shù)，查MPN檢索表，報(bào)告每克（毫升）副溶血性弧菌的MPN值。檢驗(yàn)流程樣品25g(ml)+3%氯化鈉堿性蛋白胨水TCBS平板定性檢測科瑪嘉弧菌平板1、鏡檢3、三糖鐵實(shí)驗(yàn)2、氧化酶實(shí)驗(yàn)4、嗜鹽實(shí)驗(yàn)報(bào)告結(jié)果

生化實(shí)驗(yàn)

API20E36±1℃18h36±1℃6h36±1℃24h36±1℃24hPARTTHREE實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料013％氯化鈉堿性蛋白陳水〔APW)、3％氯化鈉胰蛋白胨大豆〔TSA）瓊脂、硫代硫酸鹽-檸檬酸鹽-膽鹽-蔗糖（TCBS）瓊脂、3％氯化鈉三糖鐵（TSI

）瓊脂培養(yǎng)基023％氯化鈉甘露醇試驗(yàn)培養(yǎng)基、3％氯化鈉賴氨酸脫狡酶試驗(yàn)培養(yǎng)基、3％氯化鈉MR-VP

培養(yǎng)基氯化鈉結(jié)晶紫增菌液嗜鹽性試驗(yàn)培養(yǎng)基

03氧化酶試劑、革蘭氏染色液、革蘭氏染色液、3%氯化鈉溶液、

V-P試劑、甲基紅試劑、靛基質(zhì)試劑等。試劑PARTFOUR操作步驟試驗(yàn)方法樣品用3%氯化鈉蛋白胨水10倍連續(xù)稀釋后取三個(gè)稀釋度各接3支含有該培養(yǎng)基的平皿，培養(yǎng)計(jì)數(shù)。樣品處理及培養(yǎng)第一步第二步第三步第四步首先將樣品接種到氯化鈉瓊脂平板和ss瓊脂平板各一個(gè)，培養(yǎng)18-24h觀察。也可增菌液直接分離。分離培養(yǎng)將上述培養(yǎng)物接種無鹽胨水、7%、11%氯化鈉胨水。嗜鹽性試驗(yàn)挑取可疑培養(yǎng)物鏡檢。涂片鏡檢第五步挑取上述可疑菌落，轉(zhuǎn)種3.5%氯化鈉三糖鐵斜面，觀察結(jié)果（下部變黃，有動(dòng)力，不產(chǎn)H2S）可以菌落培養(yǎng)第六步V-P、靛基質(zhì)、甲基紅試驗(yàn)等生化試驗(yàn)PARTFIVE檢驗(yàn)結(jié)果檢驗(yàn)結(jié)果初步鑒定結(jié)果副溶血性弧菌：氧化酶試驗(yàn)：陽性。涂片鏡檢：G-，棒狀、弧狀、卵圓狀等多形態(tài)，無芽胞，有鞭毛。3％氯化鈉三糖鐵斜面：底層變黃不變黑，無氣泡，斜面顏色不變或紅色加深，有動(dòng)力。嗜鹽性試驗(yàn)：分別接種于不同氯化鈉濃度的胰胨水中培養(yǎng)，在無氯化鈉和10％氯化鈉的胰胨水中不生長或微弱生長，在7％氯化鈉的胰胨水中生長旺盛。確定鑒定結(jié)果生化試驗(yàn)：分別接種各類生化培養(yǎng)基，培養(yǎng)后觀察結(jié)果。或API

20E

生化鑒定試劑盒或VITEK全自動(dòng)微生物檢測系統(tǒng)鑒定。生化性狀符合要求時(shí)，為副溶血性弧菌。PARTSIX注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)溶血性試驗(yàn)我妻氏用高鹽血瓊脂培養(yǎng)基，在限定的條件下培養(yǎng)副溶血性弧菌時(shí)出現(xiàn)的溶血反應(yīng)，稱此溶血性能為“神奈川現(xiàn)象”。此試驗(yàn)要求是用人或兔的新鮮紅血球制備高鹽血平板，經(jīng)37℃、24h培養(yǎng)，如在單個(gè)菌落周圍呈現(xiàn)透明溶血環(huán)或在菌落下面有明顯溶血者，為“神奈川現(xiàn)象”陽性，若不出現(xiàn)透明溶血環(huán)或無明顯溶血者，為“神奈川現(xiàn)象”陰性。有致病性的副溶血性弧菌，多數(shù)為神奈川現(xiàn)象陽性，但亦有少數(shù)為陰性。動(dòng)物試驗(yàn)經(jīng)上述檢驗(yàn)的可疑菌株，用小鼠測定毒力，將16~18h的蛋白胨水或肉湯培養(yǎng)物，注射小鼠腹腔0.3~0.5mL，有毒力者可在5~10h發(fā)病死亡，長者有24h左右發(fā)病死亡。發(fā)病時(shí)有豎毛、運(yùn)動(dòng)不活潑，腹部緊貼罐底，呼吸困難，四肢抽