GB/T 34757-2017豬流行性腹瀉病毒RT-PCR檢測(cè)方法

ICS11220

B41.

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T34757—2017

豬流行性腹瀉病毒RT-PCR檢測(cè)方法

Porcineepidemicdiarrhea—RT-PCRfordetectingvirusacid

2017-11-01發(fā)布2018-05-01實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T34757—2017

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口

(SAC/TC181)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位東北農(nóng)業(yè)大學(xué)中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院河南農(nóng)業(yè)

:、、、

大學(xué)

。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人李一經(jīng)邵衛(wèi)星魏榮宋建德姜艷平袁麗萍唐麗杰喬薪瑗崔文徐耀輝

:、、、、、、、、、、

吳發(fā)興張志孫映雪魏戰(zhàn)勇李曉成

、、、、。

Ⅰ

GB/T34757—2017

豬流行性腹瀉病毒RT-PCR檢測(cè)方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬流行性腹瀉病毒檢測(cè)方法的儀器試劑樣品的采集和處理程

RT-PCR、、、RT-PCR

序電泳及結(jié)果判定的技術(shù)要求

、。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于快速檢測(cè)豬臨床樣品豬小腸和新鮮糞便或細(xì)胞培養(yǎng)物中豬流行性腹瀉病毒核酸

()。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注明日期的引用文件僅注日期的版本適用于本

。,

文件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682

3縮略語(yǔ)

下列縮略語(yǔ)適用于本文件

。

鳥類病毒反轉(zhuǎn)錄酶

AMV:RNA(avianmyeloblastosisvirus)

堿基對(duì)

bp:(basepair)

焦碳酸二乙酯

DEPC:(diethylpyrocarbonate)

脫氧核糖核酸

DNA:(deoxyribonucleicacid)

種脫氧核糖核苷三磷酸混合物

dNTPs:4(deoxyribonucleosidetriphosphates)

磷酸鹽緩沖液

PBS:(phosphate-bufferedsalinebuffer)

核糖核酸

RNA:(ribonucleicacid)

反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

RT-PCR:-(reversetranscriptase-polymerasechainreaction)

酶抑制劑

RRI:RNA(rnaseribonucleaseinhibitor)

Taq酶Taq聚合酶Taq

:DNA(DNApolymerase)

4儀器

41擴(kuò)增儀

.PCR。

42高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)可控溫至離心速度可達(dá)以上

.:4℃、12000r/min。

43組織研磨器或者研缽

.。

44冰箱冰箱和以下超低溫冰箱

.2℃~8℃-70℃。

45核酸電泳儀和水平電泳槽

.。

46微量移液器量程分別和

.0.2μL~2μL、1μL~10μL、10μL~100μL、20μL~200μL100μL~

的移液器并配備與移液器相匹配的吸頭

1000μL,