標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 35906-2018 豬瘟抗體間接ELISA檢測(cè)方法》是一項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，旨在提供一種科學(xué)、準(zhǔn)確的方法來(lái)檢測(cè)豬體內(nèi)是否存在針對(duì)豬瘟病毒的特異性抗體。該標(biāo)準(zhǔn)適用于對(duì)疑似感染或已接種疫苗豬只進(jìn)行血清學(xué)監(jiān)測(cè)，以評(píng)估其免疫狀態(tài)。以下為該標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容概述：

首先，在準(zhǔn)備階段，明確了所需試劑和材料的具體要求，包括抗原包被液、封閉液、稀釋液以及酶標(biāo)記二抗等，并且對(duì)于每種成分的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)都有詳細(xì)說(shuō)明。此外，還規(guī)定了樣品采集與處理的方法，強(qiáng)調(diào)應(yīng)從待測(cè)動(dòng)物中正確抽取血液樣本并分離出血清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

接下來(lái)是具體操作步驟，分為以下幾個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)：

  • 包被：使用豬瘟病毒抗原溶液在微孔板上進(jìn)行包被。
  • 封閉：加入封閉液以減少非特異性結(jié)合。
  • 加樣：將待測(cè)血清樣本按照一定比例稀釋后加入到相應(yīng)的孔中。
  • 孵育：在特定溫度下讓樣本中的抗體與固定于板上的抗原充分反應(yīng)。
  • 洗滌：去除未結(jié)合的物質(zhì)。
  • 加酶標(biāo)二抗：添加能夠識(shí)別并與目標(biāo)抗體結(jié)合的酶標(biāo)記二抗。
  • 再次孵育與洗滌：確保酶標(biāo)二抗與樣本中的抗體形成復(fù)合物。
  • 顯色：通過(guò)加入底物使顏色發(fā)生變化。
  • 終止反應(yīng)：使用終止液停止顯色過(guò)程。
  • 讀數(shù)：利用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔吸光度值。


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....

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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2018-02-06 頒布
  • 2018-09-01 實(shí)施
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文檔簡(jiǎn)介

ICS11220

B41.

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T35906—2018

豬瘟抗體間接ELISA檢測(cè)方法

IndirectELISAtodetectantibodyagainstclassicalswinefevervirus

2018-02-06發(fā)布2018-09-01實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T35906—2018

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口

(SAC/TC181)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所

:。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人王琴徐璐范學(xué)政趙啟祖鄒興啟朱元源寧宜寶

:、、、、、、。

Ⅰ

GB/T35906—2018

引言

牛病毒性腹瀉粘膜病病毒在牛的感染比較嚴(yán)重偶爾也有豬自然感染的報(bào)道在田間牛病毒性

/,。,

腹瀉粘膜病病毒通常對(duì)出生后的豬無(wú)致病性僅對(duì)胎豬有致病性雖然牛病毒性腹瀉粘膜病病毒可

/,。/

在豬群中傳播但這種傳播是很有限的在沒(méi)有新的傳染源引入的前提下豬群中已經(jīng)存在的牛病毒性

,。,

腹瀉粘膜病病毒會(huì)被逐漸清除病毒的傳染鏈會(huì)終止牛源牛病毒性腹瀉粘膜病病毒是豬感染牛病

/,。/

毒性腹瀉粘膜病病毒的主要來(lái)源主要與牛豬混養(yǎng)程度或使用了污染牛病毒性腹瀉粘膜病病毒的牛

/,/

源材料有關(guān)在我國(guó)生豬飼養(yǎng)的主力主要為大中型養(yǎng)殖場(chǎng)很少存在豬?；祓B(yǎng)情況因此不會(huì)導(dǎo)致牛病

。,,

毒性腹瀉粘膜病病毒在豬群中的流行傳播另外豬用疫苗生產(chǎn)中的所使用的牛源原材料均需進(jìn)行牛

/。,

病毒性腹瀉粘膜病病毒等外源病毒檢測(cè)因此疫苗生產(chǎn)工藝的提高也徹底切斷了牛病毒性腹瀉粘膜

/,,/

病病毒在豬群中傳播途徑最后豬瘟疫苗在我國(guó)的免疫率接近而豬瘟病毒與牛病毒性腹瀉

。,100%。/

粘膜病病毒為同屬病毒免疫上存在一定的交叉保護(hù)豬群中存在牛病毒性腹瀉粘膜病抗體陽(yáng)性的可

,。/

能性微乎其微因此本標(biāo)準(zhǔn)主要針對(duì)豬群中豬瘟疫苗免疫后的抗體檢測(cè)不用于對(duì)個(gè)體進(jìn)行豬瘟抗體

。,,

和牛病毒性腹瀉粘膜病抗體的鑒別檢測(cè)

/。

Ⅱ

GB/T35906—2018

豬瘟抗體間接ELISA檢測(cè)方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬瘟抗體的間接檢測(cè)方法

ELISA。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬瘟抗體檢測(cè)

。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡標(biāo)注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室生物安全技術(shù)管理規(guī)范中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第號(hào)

(302)

3縮略語(yǔ)

下列縮略語(yǔ)適用于本文件

。

豬瘟病毒

CSFV:(ClassicalSwineFeverVirus)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

ELISA:(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay)

辣根過(guò)氧化物酶

HRP:(HorseradishPeroxidase)

光密度

OD:(OpticalDensity)

4試劑

41豬瘟病毒蛋白見(jiàn)附錄

.E2:A。

42標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清豬瘟疫苗免疫仔豬制備熒光抗體病毒中和試驗(yàn)檢測(cè)中和抗體效價(jià)

.:,≥1∶20480。

43標(biāo)準(zhǔn)陰性血清無(wú)母源抗體未免疫豬瘟疫苗的仔豬血清熒光抗體病毒中和試驗(yàn)病毒抗體檢測(cè)為

.:、,

陰性

。

44酶結(jié)合物商品化的標(biāo)記的抗豬抗體工作濃度參照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

.:HRPIgG,。

45包被液見(jiàn)附錄中的

.:BB.1。

46磷酸鹽緩沖液見(jiàn)

.:B.2。

47封閉液見(jiàn)

.:B.3。

48洗滌液見(jiàn)

.1×:B.4。

49稀釋液見(jiàn)

.:B.5。

410底物液見(jiàn)

.A:

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