標準解讀
《NY/T 544-2002 豬流行性腹瀉診斷技術(shù)》是一項針對豬流行性腹瀉(PED)的診斷標準。該標準詳細規(guī)定了用于診斷豬流行性腹瀉的方法和技術(shù)要求,旨在為獸醫(yī)及相關(guān)從業(yè)人員提供科學依據(jù)和技術(shù)指導,以準確識別和控制這種疾病在豬群中的傳播。
根據(jù)該標準,豬流行性腹瀉的診斷主要基于臨床癥狀觀察、實驗室檢測以及流行病學調(diào)查三個方面進行:
- 臨床癥狀:包括但不限于仔豬出現(xiàn)嚴重的水樣腹瀉、嘔吐、脫水等癥狀;成年豬可能出現(xiàn)輕微的癥狀或無明顯癥狀。
- 實驗室檢測:通過采集患病動物的新鮮糞便樣本或其他相關(guān)樣本,采用直接免疫熒光法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、RT-PCR等方法來檢測病毒的存在與否及其類型。
- 流行病學調(diào)查:收集并分析發(fā)病場點的信息,如地理位置、飼養(yǎng)管理條件、近期是否有新引進豬只等因素,幫助判斷疫情的發(fā)生原因及可能的發(fā)展趨勢。
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- 被代替
- 已被新標準代替
- 2002-08-27 頒布
- 2002-12-01 實施



文檔簡介
IcS.11.220n41NY中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準NY/T544-2002豬流行性腹瀉診斷技術(shù)Diagnostictechniquesforporcineepidemicdiarrhoea2002-08-27發(fā)布2002-12-01實施中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布
NY/T544-2002豬流行性腹瀉是豬的嚴重傳染病之一.癥狀與豬傳染性胃腸炎相似,病毒形態(tài)上也基本相同,但兩者的抗原性不一樣。本標準是根據(jù)國內(nèi)研究成果和參考國外同類研究成果編寫的。本標準的附錄A、附錄B、附錄C均為規(guī)范性附錄。本標準由農(nóng)業(yè)部童牧獸醫(yī)局提出本標準由全國動物檢疫標準化技術(shù)委員會歸口。本標準起草單位:中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所、中國人民解放軍軍需大學本標準主要起草人:馬思奇、王明、宜華、馮力、傳有恩。
NY/T544-2002豬流行性腹瀉診斷技術(shù)范園本標準規(guī)定了豬流行性腹瀉(PED)的病毒分離鑒定與檢測病毒抗原的直接免疫熒光法、雙抗體夾心醇聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA).檢測抗體的血清中和試驗、間接ELISA試驗技術(shù)。本標準適用于對豬流行性腹瀉的診斷、產(chǎn)地檢疫及流行病學調(diào)查等。2病毒分商與鑒定2.1材料準備2.1.1器材倒置顯微鏡,冷凍離心機,微孔濾器,細胞培養(yǎng)瓶,蓋玻片,溫箱等。2.1.2培養(yǎng)基及溶液的配制磷酸鹽緩沖液(PBS)、細胞培養(yǎng)液、病毒培養(yǎng)液及N-2-羥乙基哌噪-N'-2-乙烷磺酸(HEPES)液(配制方達見附錄A)。2.1.3細胞Vero細胞系、2.2病賽分商2.2.1病料采集采采病仔豬空腸內(nèi)容物及小腸內(nèi)容物用于分離病毒.樣品冷凍保存。2.2.2病料處理將采集的小段空腸連同腸內(nèi)容物用含1000IU/ml.青雅索、1000g/mL鏈蛋素、PBS液制成5倍懸液,在4℃條件下3000r/min離心30min,取上清液,經(jīng)0.22m微孔濾膜過濾,分裝,-20℃保存?zhèn)溆谩?.2.3接種及觀察將過濾液(病毒培養(yǎng)液的10%)接種于Vero細胞單層上,同時加過濾液量50%的病毒培養(yǎng)液,37℃吸附1h,根據(jù)組織培養(yǎng)瓶大小漆加病毒培養(yǎng)液至病毒培養(yǎng)總量,暨37℃培養(yǎng),逐日觀察3d~4d,按致細胞病變作用(CPE)變化情況,可官傳2代~3代。2.3結(jié)果判定CPE變化的特點是:細胞面粗糙,顆粒增多,有多核細胞(7個~8個甚至幾十個),并可見空斑樣小區(qū),細胞遙漸脫落,這是特征性的CPE,可與(豬)傳染性胃腸炎(TGE)病毒的CPE相區(qū)別。同時在細胞培養(yǎng)瓶中加蓋玻片,收毒后用直接熒光做鑒定試驗。有條件時可進行電鏡觀察,用負染法在陽性樣品中電鏡觀察可見到冠狀病毒粒子。3直接茨光抗體法3.1材料準備3.1.1器材:茂光顯微鏡、冷凍切片機、載玻片、蓋玻片、溫箱、滴管等。3.1.2熒
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