動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)

關(guān)于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)第1頁，共29頁，2023年，2月20日，星期三常用藥物的最大給藥量動(dòng)物項(xiàng)

目

灌

胃

皮下注射

肌肉注射

腹腔注射

靜脈注射

大鼠最大給藥量2mLlmL0.4mL2mL4mL

使用針頭16號(hào)(鈍頭)6號(hào)6號(hào)6號(hào)5號(hào)小鼠最大給藥量lmL0.4mL0.4mLlmL0.8mL

使用針頭9號(hào)(鈍頭)5l/2號(hào)51/2號(hào)51/2號(hào)4號(hào)豚鼠最大給藥量3mLLmL0.5mL4mL5mL

使用針頭16號(hào)(鈍頭)61/2號(hào)61/2號(hào)7號(hào)5號(hào)家兔最大給藥量20mL2mL2mL5mL10mL

使用針頭10號(hào)導(dǎo)尿管61/2號(hào)61/2號(hào)7號(hào)6號(hào)第2頁，共29頁，2023年，2月20日，星期三人與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物之間藥物劑量的換算人與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)同一藥物的耐受性，動(dòng)物比人大，即單位體重的用藥量比人要大。一般可按下列比例換算，每單位體重人的藥量為1，則小鼠、大鼠為25-50，兔、豚鼠為15-20，狗、貓為5-10。第3頁，共29頁，2023年，2月20日，星期三在新藥藥效研究中多以下列公式轉(zhuǎn)換人及不同動(dòng)物之間的藥量：第4頁，共29頁，2023年，2月20日，星期三人及不同實(shí)驗(yàn)動(dòng)物之間藥物量對(duì)應(yīng)值第5頁，共29頁，2023年，2月20日，星期三例如：某藥物在60kg體重的病人的劑量為21.0g.kg-1.d-1，一只5kg的猴為53.6

g.kg-1.d-1，一只10kg重的犬為40.4

g.kg-1.d-1，一只20g的小鼠則為260.6

g.kg-1.d-1。第6頁，共29頁，2023年，2月20日，星期三實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血樣采取一、小、大鼠剪尾采血此法每鼠可采10次以上。小鼠每次0.1ml。大鼠每次0.4ml。眼眶后靜脈叢采血小鼠每次0.2-0.3ml。大鼠每次0.5ml。第7頁，共29頁，2023年，2月20日，星期三股動(dòng)脈采血小鼠每次0.5ml。大鼠每次2.0ml。二、豚鼠耳緣切口采血：0.5ml。心臟采血：足背正中靜脈采血：第8頁，共29頁，2023年，2月20日，星期三三、家兔耳緣靜脈采血：5-10ml。耳中動(dòng)脈采血：15ml。心臟采血：20-25ml。四、犬前肢皮下頭靜脈和后肢外側(cè)小隱靜脈采血：10-20ml。頸靜脈采血：心臟采血：第9頁，共29頁，2023年，2月20日，星期三常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的

最大安全采血量與最小致死采血量動(dòng)物種類最大安全采血量(mL)最小致死采血量(mL)小鼠0.10.3大鼠12豚鼠510家兔1040狗50300猴1560第10頁，共29頁，2023年，2月20日，星期三常用麻醉劑的用法及劑量

麻醉劑

動(dòng)物種類

給藥途徑

劑量(mg/kg)常用濃度(％)戊巴比妥鈉犬、兔靜脈303

腹腔40～503大鼠、小鼠、豚鼠

腹腔40～502硫噴妥鈉

犬、兔

靜脈15-202

大鼠

腹腔401

小鼠

腹腔15-201氯胺酮犬、貓

腹腔10-4010

大鼠、小鼠

腹腔100～20010

氯醛糖

兔

靜脈80-1002

大鼠

腹腔502烏拉坦

兔

靜脈750-100030

大鼠、小鼠

皮下或肌肉

800-100020第11頁，共29頁，2023年，2月20日，星期三第五節(jié)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本設(shè)計(jì)一、設(shè)計(jì)原則1.對(duì)照（antitheses）性原則：是要求在實(shí)驗(yàn)中設(shè)立可與實(shí)驗(yàn)組比較，用于消除各種無關(guān)因素影響的對(duì)照組。

空白對(duì)照：不施加任何處理因素實(shí)驗(yàn)條件對(duì)照：不用處理因素，但施加某種與處理因素相同的實(shí)驗(yàn)條件。標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照：用現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)照，如已知有效藥物、公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)療法。第12頁，共29頁，2023年，2月20日，星期三2．隨機(jī)（random）化原則

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)一般采用完全隨機(jī)分配或分層隨機(jī)分配。小動(dòng)物實(shí)驗(yàn)一般先配對(duì)或配伍，然后“對(duì)”內(nèi)或“伍”內(nèi)進(jìn)行隨機(jī)分配

大動(dòng)物多半先分層，然后在層內(nèi)隨機(jī)分配。

第13頁，共29頁，2023年，2月20日，星期三3．重復(fù)（repetition）的原則

指同一處理要設(shè)置多個(gè)樣本例數(shù)降低試驗(yàn)誤差。

應(yīng)該在保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有一定可靠性的條件下，確定最低的樣本例數(shù)

第14頁，共29頁，2023年，2月20日，星期三一般估測的樣本數(shù)

小動(dòng)物(大鼠、小鼠、蛙、魚)：每組10-30例,計(jì)量資料每組不少于10例,計(jì)數(shù)資料每組不少于30例；中等動(dòng)物(豚鼠、家兔)每組8-20例,計(jì)量資料每組不少于8例,計(jì)數(shù)資料每組不少于20例；大動(dòng)物(犬、貓、豬、羊等)每組6-20例,計(jì)量資料每組不少于6例,計(jì)數(shù)資料每組不少于20例.第15頁，共29頁，2023年，2月20日，星期三按統(tǒng)計(jì)學(xué)方法測算的樣本數(shù)

n=2б2(tα+tβ)2/δ2n為樣本含量，б為標(biāo)準(zhǔn)差；tα取有顯著性的t分布值，t0.05=1.96；tβ為無顯著性的t分布值，1-β為實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)?zāi)芰?，?dòng)物實(shí)驗(yàn)一般取1-β=0.80，t0.20=0.842；δ為處理組與對(duì)照組均值間的差異，可從預(yù)實(shí)驗(yàn)或文獻(xiàn)資料庫中獲得。第16頁，共29頁，2023年，2月20日，星期三舉例：給某種動(dòng)物飼喂一種藥物，預(yù)實(shí)驗(yàn)中每月體重增長比對(duì)照增加30±15g（均值±標(biāo)準(zhǔn)差）。設(shè)顯著水平為95%，檢驗(yàn)?zāi)芰?0%，則正式實(shí)驗(yàn)所需樣本含量n為：n=2152（1.96+0.842）2/302=3.93即每組只需4只動(dòng)物。第17頁，共29頁，2023年，2月20日，星期三二、基本設(shè)計(jì)方法單組比較設(shè)計(jì)

指在同一個(gè)體上觀察實(shí)驗(yàn)處理前后某種觀測指標(biāo)的變化。

優(yōu)點(diǎn)：能排除個(gè)體間生物差異。

缺點(diǎn)：不適用于在同一個(gè)體上多次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)和觀察的情況。

第18頁，共29頁，2023年，2月20日，星期三配對(duì)比較設(shè)計(jì)指實(shí)驗(yàn)前將動(dòng)物按性別、體重或其它有關(guān)因素加以配對(duì)，以基本相同的兩個(gè)動(dòng)物為一對(duì)，配成若干對(duì)，然后將一對(duì)動(dòng)物隨機(jī)分配到兩組中。優(yōu)點(diǎn)：減少兩組實(shí)驗(yàn)誤差及動(dòng)物間的個(gè)體差異。

缺點(diǎn)：應(yīng)考慮種屬、品系、性別、年齡與體重、同父母、同胎次出生等因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。第19頁，共29頁，2023年，2月20日，星期三舉例：為研究VitE缺乏飼料對(duì)大鼠肝臟中VitA含量(u/mg)的影響，選取同性別(雌、雄各半)、同月齡(斷乳1個(gè)月)、同體重(50g+2g)等正常大鼠配成10對(duì)，對(duì)每對(duì)中每只大鼠按隨機(jī)數(shù)字表(或抽簽)隨機(jī)分配到給以正常飼料組和VitE缺乏飼料組，分飼條件相同的不同籠中，經(jīng)1個(gè)月飼食后殺掉，按每對(duì)分別取肝臟，測得VitA含量(u/mg)如表。

大白鼠對(duì)別正常飼料組VitE缺乏組13.952.6523.803.3533.452.4543.352.6553.702.6563.903.1573.802.9083.051.9093.651.70102.002.50第20頁，共29頁，2023年，2月20日，星期三完全隨機(jī)化設(shè)計(jì)將動(dòng)物隨機(jī)分配到處理組及對(duì)照組做實(shí)驗(yàn)觀察。優(yōu)點(diǎn)：統(tǒng)計(jì)分析也比較簡單，抗數(shù)據(jù)缺失能力較強(qiáng)。

缺點(diǎn)：對(duì)非實(shí)驗(yàn)因素缺乏有效控制，適用于實(shí)驗(yàn)對(duì)象同質(zhì)性較好的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。第21頁，共29頁，2023年，2月20日，星期三舉例：為比較小白鼠接種3種不同菌型傷寒桿菌(9D、11C、DSC1)后存活日數(shù)的差異，選擇同品系、性別(雌、雄各半)、體重(土1s)、月齡(土2天)、生理精神狀態(tài)、飼養(yǎng)條件等小鼠30只，依隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為3組，在相同條件下接種菌苗，后觀察存活日數(shù)如下表。

9D11CDSC125746113862567109775212115664634710第22頁，共29頁，2023年，2月20日，星期三隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)，可將一窩小鼠或大鼠劃為一個(gè)區(qū)組，確定數(shù)個(gè)區(qū)組后，按區(qū)組隨機(jī)化原則將各區(qū)組的動(dòng)物隨機(jī)分配到處理組和對(duì)照組。優(yōu)點(diǎn)：均衡性好，可減少誤差，提高實(shí)驗(yàn)效率，統(tǒng)計(jì)分析也較簡易。

缺點(diǎn)：抗數(shù)據(jù)缺失能力較低。若一個(gè)區(qū)組的某個(gè)動(dòng)物發(fā)生意外，那么整個(gè)區(qū)組都得放棄，或不得已采取缺項(xiàng)估計(jì)。第23頁，共29頁，2023年，2月20日，星期三舉例：有人用4種不同種系的未成年大鼠做實(shí)驗(yàn)，每一種以同窩雌大白鼠3只，隨機(jī)分配注射3種不同劑量的雌性激素(mg/100g)后，在相同條件下稱其子宮重量(g)，見表：

大鼠種系0.20.40.811611614524268115370111133442358480第24頁，共29頁，2023年，2月20日，星期三析因設(shè)計(jì)可以分析多種交互作用，但一般采用較簡單的析因試驗(yàn)。當(dāng)水平和因素過多，不但計(jì)算復(fù)雜而且解釋困難。舉例：觀察絕經(jīng)促性腺激素(HMG)、絨促激素(HCG)及其交互作用，隨機(jī)將20只幼雌大白鼠分成4組。第一組空白，第二組每天注射HMGl個(gè)單位，第三組每天注射HCG20單位，第四組每天HMGl單位、HCG20單位，一定時(shí)間后取卵巢稱重，以每10g大白鼠體重卵巢mg數(shù)表示(mg/10g)，結(jié)果如表：

第25頁，共29頁，2023年，2月20日，星期三1234空白HMGHCGHMG+HCG912143912111729111416411315134610131940∑556579195第26頁，共29頁，2023年，2月20日，星期三三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果變異分析

實(shí)驗(yàn)間變異

處理會(huì)