口蹄疫監(jiān)測診斷作業(yè)指導(dǎo)書

口蹄疫監(jiān)測診斷作業(yè)指導(dǎo)書更多免費(fèi)資料下載請(qǐng)進(jìn)： 好好學(xué)習(xí)社區(qū)口蹄疫監(jiān)測診斷作業(yè)指導(dǎo)書修訂日期修訂單號(hào)修訂內(nèi)容摘要頁次版次修訂審核批準(zhǔn)2011/03/30/系統(tǒng)文件新制定4A/0///批準(zhǔn)：審核：編制：口蹄疫監(jiān)測診斷作業(yè)指導(dǎo)書全文共4頁，當(dāng)前為第1頁。

口蹄疫監(jiān)測診斷作業(yè)指導(dǎo)書全文共4頁，當(dāng)前為第1頁。口蹄疫監(jiān)測診斷作業(yè)指導(dǎo)書一、口蹄疫病毒VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢測酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)1.適用范圍用于檢測豬、牛、羊血清中的口蹄疫病毒VPI結(jié)構(gòu)蛋白抗體，與豬、牛、羊口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)診斷試劑盒聯(lián)合使用，可區(qū)分口蹄疫病毒感染動(dòng)物及疫苗免疫動(dòng)物。檢測豬血清應(yīng)用豬口蹄疫病毒VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)診斷試劑盒；檢測牛、羊血清應(yīng)用牛、羊口蹄疫病毒VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)診斷試劑盒。2.檢測試劑口蹄疫病毒VP1抗原包被板、樣品稀釋液、酶結(jié)合物、陰性對(duì)照、VP1陽性對(duì)照、酶結(jié)合物稀釋液、TMB底物A液、TMB底物B液、終止液（l.OMHZSO。）、濃縮洗滌液、稀釋板、一次性封板膜、微孔定位標(biāo)簽。3.檢測步驟3.1使用前將試劑盒恢復(fù)到室溫，避免陽光直射或放置在30℃3.2取出試劑盒中的樣品稀釋液。A1、B1兩孔作為陰性對(duì)照，Cl、D1兩孔作為陽性對(duì)照孔，其余孔作檢測孔，每孔一個(gè)樣品。3.3在稀釋板的各孔中加200樣品稀釋液。在相應(yīng)各孔中分別加入10此對(duì)照血清或被檢血清樣品。用加樣器重復(fù)吹吸數(shù)次。稀釋每個(gè)樣品時(shí)必須使用不同的吸頭。3.4取出抗原包被板。口蹄疫監(jiān)測診斷作業(yè)指導(dǎo)書全文共4頁，當(dāng)前為第2頁。3.5分別從稀釋板上取稀釋后的對(duì)照血清和被檢血清各100此，加至抗原包被板的相應(yīng)孔中，加益或封膜后，置37士2℃口蹄疫監(jiān)測診斷作業(yè)指導(dǎo)書全文共4頁，當(dāng)前為第2頁。3.6洗滌工作液配制：按需要量，用去產(chǎn)離子水或雙蒸水將洗滌液作25倍稀釋。3.7用洗滌工作液洗滌抗原包被板，每孔300噸，洗滌6次，拍干。3.8酶結(jié)合物工作液配制：用酶結(jié)合物稀釋液將酶結(jié)合物作100倍稀釋，現(xiàn)配現(xiàn)用。3.9每孔加入100此酶結(jié)合物工作液，加蓋或封膜后，置37±2℃下孵育30±3.10重復(fù)3.7。3.11TMB底物工作液配制：將TMB底物B液和TMB底物A液等量混合，現(xiàn)配現(xiàn)用。3.12每孔加入100此底物工作液，加蓋或封膜后，置37±2℃下孵育15±3.13每孔加入100此終止液，并輕輕振蕩混勻。3.14在15分鐘內(nèi)，用酶聯(lián)讀數(shù)儀測定在450nln波長下的OD值。結(jié)果判定4.1豬口蹄疫病毒vPI結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢測結(jié)果判定：4.1.1陰性對(duì)照孔平均0D值應(yīng)續(xù)0.15，每個(gè)陽性對(duì)照孔0D值應(yīng)妻0.5，且簇2.0。否則，試驗(yàn)無效。臨界值＝0.23x陽性對(duì)照孔平均OD值。4.1.2被檢樣品孔OD值<臨界值時(shí)、判為陰性，即為抗口蹄疫病毒VPI結(jié)構(gòu)蛋白抗體陰性。4.1.3被檢樣品孔OD值>臨界值，判為陽性。口蹄疫監(jiān)測診斷作業(yè)指導(dǎo)書全文共4頁，當(dāng)前為第3頁。4.1.4對(duì)判定結(jié)果為陽性的樣品，應(yīng)用2個(gè)孔進(jìn)行重復(fù)檢測。重復(fù)檢測后，若至少有一個(gè)孔為陽性，則判為口蹄疫病毒VPI結(jié)構(gòu)蛋白抗體陽性，若兩孔均為陰性，則判為口蹄疫病毒VPI結(jié)構(gòu)蛋白抗體陰性?？谔阋弑O(jiān)測診斷作業(yè)指導(dǎo)書全文共4頁，當(dāng)前為第3頁。4.1.5當(dāng)豬口蹄疫病毒vPI結(jié)構(gòu)蛋白抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)診斷試劑盒與豬口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)診斷試劑盒聯(lián)合使用時(shí)，按下列標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行最終判定}4.2牛、羊口蹄疫病毒VPI結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢測結(jié)果判定：4.2.1陰性對(duì)照孔平均OD值應(yīng)≤0.2，每個(gè)陽性對(duì)照孔OD值應(yīng)≥0.5，且≤2.0。否則，試驗(yàn)無效。臨界值=0.23x陽性對(duì)照孔平均OD值。4.2.2被檢樣品孔OD值＜臨界值時(shí)，判為陰性，即為抗口蹄疫病毒VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體陰性。4.2.3被檢樣品孔OD值≥臨界值，判為陽性。4.2.4對(duì)判定結(jié)果為陽性的樣品，應(yīng)用2個(gè)孔進(jìn)行重復(fù)檢測。重復(fù)檢測后，若至少有一個(gè)孔為陽性，則判為口蹄疫病毒VPI結(jié)構(gòu)蛋白抗體陽性，若兩孔均為陰性，則判為口蹄疫病毒VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體陰性。4.2.5當(dāng)牛、羊口蹄疫病毒VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)診斷試劑盒與牛、羊