免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)（免疫學(xué)檢驗(yàn)課件）

第二十二章

免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)本章要點(diǎn)免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)又稱(chēng)免疫細(xì)胞化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)---是利用標(biāo)記的特異性抗體（或抗原）與組織細(xì)胞內(nèi)抗原（或抗體）進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，對(duì)組織和細(xì)胞抗原進(jìn)行定性、定位、定量測(cè)定的免疫檢測(cè)方法。本章要點(diǎn)免疫組化的檢測(cè)原理組織抗原抗體標(biāo)記物1、熒光2、酶3、親和技術(shù)4、金標(biāo)標(biāo)記抗體本章要點(diǎn)免疫組化的檢測(cè)原理組織抗原標(biāo)記抗體+標(biāo)記的抗原抗體物本章要點(diǎn)免疫組化的檢測(cè)原理間接法直接法兩種免疫細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)方法CONTENTS目錄免疫組化檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)酶免組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)化學(xué)發(fā)光酶免疫分析熒光免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)其他免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)0102030405免疫組化檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)01免疫組化檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)免疫組化全過(guò)程抗原的提取與純化免疫動(dòng)物或細(xì)胞融合，制備特異性抗體及純化標(biāo)記物與抗體集合形成標(biāo)記抗體標(biāo)本的處理抗原抗體反應(yīng)和呈色反應(yīng)顯微鏡下觀察結(jié)果免疫組化檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)一、標(biāo)本制作標(biāo)本制作是獲得良好的免疫細(xì)胞組織化學(xué)分析的保障，良好的細(xì)胞和組織學(xué)結(jié)構(gòu)將有助于抗原的準(zhǔn)確顯示和定位。（一）標(biāo)本的主要來(lái)源主要有：活體組織；各種體液及穿刺液；培養(yǎng)細(xì)胞等。123免疫組化檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)（二）標(biāo)本的固定與保存組織材料的固定目的防止組織細(xì)胞的死后變化，以保持其固有形態(tài)。使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)等各種抗原成份轉(zhuǎn)變成不溶性物質(zhì)，以保持它原有的結(jié)構(gòu)。使組織中的各種物質(zhì)沉淀和凝固起來(lái)而產(chǎn)生不同的折射率，以便染色后易于鑒別和觀察。1免疫組化檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)（二）標(biāo)本的固定與保存組織材料的固定目的固定劑兼有硬化作用，使組織硬化，便于制片。防止細(xì)胞過(guò)度收縮或膨脹而失去其原有形態(tài)結(jié)構(gòu)。經(jīng)過(guò)固定的組織能對(duì)染料產(chǎn)生不同的親和力而著色清晰，便于辨認(rèn)。1免疫組化檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)固定劑的選擇最佳固定劑的標(biāo)準(zhǔn)最好地保持細(xì)胞和組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)。最大限度地保存抗原的免疫活性。2免疫組化檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)固定方法固定方法常用浸泡法—主要適用于活檢和手術(shù)標(biāo)本以及其它不能進(jìn)行灌注的組織固定。灌注法—適用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究。3免疫組化檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)各種抗原的固定抗原固定劑固定溫度與時(shí)間蛋白質(zhì)95%乙醇室溫，3~15min免疫球蛋白丙酮4℃，30min酶四氯化磺4℃，30min激素1%聚甲醛4℃，4h~5h細(xì)菌丙酮、甲醇室溫，3~10min病毒丙酮、無(wú)水乙醇室溫，5~10min四氯化磺4℃，30~60min類(lèi)脂質(zhì)10%甲醛室溫，3~10min細(xì)胞懸液1%聚甲醛室溫，2min免疫組化檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)（三）玻片的處理玻片的處理是做好免疫組化染色的重要步驟之一。一般用免疫組織化學(xué)的載玻片均需涂一定的黏合劑，常用的切片黏合劑有樹(shù)脂膠、多聚賴氨酸和防脫片劑。（四）切片方法的選擇免疫組化檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)冰凍切片和石蠟切片時(shí)免疫組化中最常用的制片方法。冰凍切片制片方法簡(jiǎn)單，可避免石蠟切片因固定、脫水、浸蠟等步驟造成的抗原損失。迅速冷凍可防止冰晶的形成，避免組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)的破壞。免疫組化檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)冰凍切片和石蠟切片時(shí)免疫組化中最常用的制片方法。石蠟切片觀察組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)的理想方法，可用于陳舊石蠟包埋材料的回顧性免疫組化研究，切片薄，有連續(xù)性，蠟塊可長(zhǎng)期保存，但是抗原的保存量不如冰凍切片。免疫組化檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)二、抗原處理（一）進(jìn)行抗原的暴露和修復(fù)的原因固定液的影響；抗體制備的影響。12免疫組化檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)（二）抗原的暴露主要采用酶消化的方法：在選擇酶消化時(shí)，應(yīng)針對(duì)要顯示的不同的抗原成分而選用不同的酶。在日常工作中用胰蛋白酶消化即可。12免疫組化檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)（三）熱誘導(dǎo)的抗原修復(fù)抗原修復(fù)是以高溫、高壓對(duì)常規(guī)固定石蠟切片進(jìn)行抗原修復(fù)以提高抗原抗體的陽(yáng)性檢出率：微波處理法；水浴鍋法；壓力鍋法。123免疫組化檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)三、抗體處理（一）抗體的選擇具有高度特異性和穩(wěn)定性的優(yōu)質(zhì)抗體。（二）抗體的稀釋抗原抗體反應(yīng)須有適當(dāng)?shù)谋壤?，過(guò)量或不足均不能達(dá)到預(yù)期結(jié)果。（三）抗體的合理保存抗體是免疫組織化學(xué)技術(shù)的首要試劑。要特別注意保持抗體的生物活性。免疫組化檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)四、常用標(biāo)記物（一）熒光素如：異硫氰酸熒光素、四乙基羅丹明。（二）酶如：辣根過(guò)氧化物酶(HRP)。（三）生物素-親和素系統(tǒng)（四）免疫金標(biāo)記技術(shù)（五）免疫鐵蛋白技術(shù)免疫組化檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)五、免疫組織化學(xué)技術(shù)的結(jié)果判斷（一）對(duì)照染色設(shè)計(jì)為了保證免疫組織化學(xué)染色的準(zhǔn)確性，證明和肯定陽(yáng)性結(jié)果的特異性，排除某些非特異性染色，通常需針對(duì)第一抗體設(shè)立對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照用已知抗原陽(yáng)性的切片與待檢標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。目的是證實(shí)所用免疫組化染色流程的有效性，排除假陰性的可能。1免疫組化檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)陰性對(duì)照用確證不含已知抗原的標(biāo)本作對(duì)照，應(yīng)呈陰性結(jié)果，稱(chēng)陰性對(duì)照。目的是排除假陽(yáng)性。2免疫組化檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)陰性試劑對(duì)照是指用于證實(shí)在免疫組化染色中所用試劑（尤其是特異性抗體試劑的有效性和可靠性）而設(shè)立的同步免疫染色對(duì)照，包括有：空白對(duì)照、替代對(duì)照、吸收試驗(yàn)和抑制試驗(yàn)等。自身對(duì)照是指在同一標(biāo)記切片上的自身組織成分的陰性背景對(duì)照。34免疫組化檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)（二）陽(yáng)性結(jié)果陽(yáng)性細(xì)胞的顯色可位于細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核。免疫顯色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞密度是定性、定量指標(biāo)。陽(yáng)性細(xì)胞的著色形態(tài)（如胞膜型、胞核型、胞質(zhì)(漿)型等）及組織分布特點(diǎn)（如局灶型、彌漫型、片塊型等）主要是定位指標(biāo)。哪怕只有少數(shù)細(xì)胞陽(yáng)性（只要是抗原所在部位）也應(yīng)視為陽(yáng)性表達(dá)。免疫組化檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)（三）陰性結(jié)果陰性結(jié)果不能簡(jiǎn)單視為抗原不表達(dá)，由于染色方法靈敏度有高低之分，有時(shí)可因靈敏度不夠，而導(dǎo)致陰性反應(yīng)。（四）特異性顯色和非特異性顯色的鑒別分布位置特異性反應(yīng)必須分布于特定抗原部位。非特異性反應(yīng)無(wú)一定的分布規(guī)律。1免疫組化檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)顯色強(qiáng)度特異性反應(yīng)由于細(xì)胞內(nèi)抗原含量不同，顯色強(qiáng)度不一。陽(yáng)性細(xì)胞的染色常定位于細(xì)胞，并與陰性細(xì)胞間有明顯間隔。而非特異性染色常不限于單個(gè)細(xì)胞，常為成片的細(xì)胞自身對(duì)照。其他在過(guò)大的組織塊，中心固定不良也會(huì)導(dǎo)致非特異性顯色。23免疫組化檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)染色特異性染色非特異性染色顯色部位特定細(xì)胞或間質(zhì)細(xì)胞和間質(zhì)均勻染色或更強(qiáng)顯色定位特定，具有結(jié)構(gòu)性無(wú)特定部位，無(wú)結(jié)構(gòu)性顯色程度同一部位呈不同程度顯色無(wú)分布規(guī)律，某一片均勻著色免疫組化檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)六、質(zhì)量控制（一）試劑質(zhì)量控制質(zhì)量控制是免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)取得滿意結(jié)果的必要條件?？贵w的質(zhì)量是免疫組織化學(xué)染色成功的關(guān)鍵（二）操作過(guò)程質(zhì)量控制（三）儀器設(shè)備和器具的質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)操作標(biāo)本的質(zhì)量控制酶免組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)02酶免組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)酶免組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)是在一定條件下，應(yīng)用酶標(biāo)抗體（抗原）與組織或細(xì)胞標(biāo)本中的抗原（抗體）發(fā)生反應(yīng)，然后加入酶的底物，催化底物顯色，借助光鏡或電鏡，就可識(shí)別出標(biāo)本中抗原（抗體）的分布和性質(zhì)；也可通過(guò)圖像分析技術(shù)達(dá)到定量的目的。酶免組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)一、標(biāo)本制作常用的標(biāo)本有組織切片、組織印片和細(xì)胞涂片。酶免組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)可分為：酶標(biāo)記抗體免疫組織化學(xué)染色法；非標(biāo)記抗體酶免疫組織化學(xué)染色法。酶免組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)二、酶標(biāo)記抗體的免疫組化染色法酶標(biāo)記抗體的免疫組織化學(xué)染色法是借助交聯(lián)劑的共價(jià)鍵作用將酶直接連接在抗體（或抗抗體）上，酶標(biāo)抗體（或抗抗體）與組織內(nèi)特異抗原或抗原抗體復(fù)合物反應(yīng)后，通過(guò)酶對(duì)底物的催化作用，生成不溶性有色產(chǎn)物并沉淀在特定位置，達(dá)到對(duì)抗原定性、定位、定量檢測(cè)的目的。（一）原理酶免組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)（二）技術(shù)類(lèi)型（三）方法評(píng)價(jià)直接法形成抗原一抗體一酶復(fù)合物。間接法形成Ag-Ab1-Ab2﹡E復(fù)合物。酶標(biāo)抗體三步染色法為間接法的改良法形成Ag-Ab1-Ab2﹡E-Ab3﹡E復(fù)合物。123酶免組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)三、非標(biāo)記抗體酶免疫組化染色法該技術(shù)首先用酶免疫動(dòng)物，制備效價(jià)高、特異性強(qiáng)的抗酶抗體（Ab3），將酶與Ab3結(jié)合形成復(fù)合物，然后利用第二抗體（Ab2）作橋，Ab2既可與Ab3的Fc段結(jié)合，又可與結(jié)合在組織抗原上的第一抗體（Ab1）的Fc段結(jié)合，經(jīng)酶催化底物的顯色反應(yīng)，達(dá)到對(duì)抗原的檢測(cè)。（一）原理酶免組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)（二）技術(shù)類(lèi)型酶橋法用辣根過(guò)氧化物酶（HRP）免疫動(dòng)物（如兔）制備抗HRP的抗體（Ab3），經(jīng)Ab2（如羊抗兔）作橋，將結(jié)合在組織抗原上的Ab1(兔抗相應(yīng)組織抗原的抗體)與Ab3連接起來(lái)，最后將HRP與Ab3結(jié)合形成Ag-Ab1-Ab2-Ab3-HRP復(fù)合物，加底物顯色。1酶免組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)酶免組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)PAP法即過(guò)氧化物酶（P）-抗過(guò)氧化物酶（AP）法，為酶橋法的改良，技術(shù)要點(diǎn)基本上與酶橋法相同，但該法將抗酶抗體（抗過(guò)氧化物酶（AP））與酶（過(guò)氧化物酶（P））制成了可溶性復(fù)合物（PAP）,該復(fù)合物由2個(gè)抗酶抗體和3個(gè)過(guò)氧化物酶分子組成，呈五角形，非常穩(wěn)定。通過(guò)橋抗體（Ab2）將特異性識(shí)別組織抗原的抗體（Ab1）與PAP復(fù)合物的抗酶抗體連接起來(lái)。2酶免組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)酶免組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)酶免組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)雙橋PAP法該法是PAP法的改良，通過(guò)兩次連接橋抗體和PAP，形成Ag-Ab1-Ab2-PAP-Ab2-PAP復(fù)合物，在抗原抗體復(fù)合物上結(jié)合了比PAP法更多的酶分子，大大增強(qiáng)了方法的敏感性。3酶免組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)APAAP法APAAP法就是以堿性磷酸酶代替HRP建立的堿性磷酸酶（AP）-抗堿性磷酸酶（AAP）法，簡(jiǎn)稱(chēng)APAAP法。技術(shù)要點(diǎn)與PAP法相似。4酶免組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)該技術(shù)既可檢測(cè)抗原，又可檢測(cè)抗體。由于酶不是標(biāo)記在抗體上，而是經(jīng)抗原（酶）抗體反應(yīng)與抗酶抗體結(jié)合，避免了酶標(biāo)抗體的缺點(diǎn)，提高了方法的敏感性。尤其是雙橋PAP法，是當(dāng)今免疫組化技術(shù)中敏感性較高的方法。（三）方法評(píng)價(jià)酶免組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)四、臨床應(yīng)用酶免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)主要用于組織切片或其它抗原的定性、定位、定量檢測(cè)。組織切片中各類(lèi)抗原性物質(zhì)，如各類(lèi)蛋白質(zhì)、酶、激素、細(xì)胞、病毒、腫瘤抗原、漿細(xì)胞中的免疫球蛋白、各種多肽、細(xì)胞表面標(biāo)志等均可檢測(cè)。熒光免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)03熒光免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，先用熒光素標(biāo)記已知抗體并以此作為探針，檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原，在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后，即會(huì)發(fā)出一定波長(zhǎng)的熒光，進(jìn)而對(duì)組織中的某種抗原進(jìn)行定性、定位和定量分析。熒光免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)一、標(biāo)本制作常見(jiàn)的臨床標(biāo)本材料主要有組織、細(xì)胞和細(xì)菌三大類(lèi)，按不同標(biāo)本性質(zhì)可制作涂片、印片或組織切片等。（一）載玻片和蓋玻片的處理載玻片和蓋玻片要厚薄均勻、潔凈及透光性好。熒光免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)（二）制片組織切片：組織材料可制備成冰凍切片或石蠟切片。印片：組織材料也可制成印片。涂片：細(xì)胞或細(xì)菌要制成涂片，涂片應(yīng)薄且均勻。123熒光免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)（三）標(biāo)本的固定防止細(xì)胞或切片從玻片上脫落。去除妨礙抗原抗體結(jié)合的類(lèi)脂。便于保存。除活細(xì)胞外，其他標(biāo)本應(yīng)在染色前以適當(dāng)?shù)姆绞焦潭ā?23主要目的是：熒光免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)（四）標(biāo)本片的保存固定好的標(biāo)本片應(yīng)盡快熒光染色檢查，如需保存，置-20℃下低溫干燥保存。熒光免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)二、熒光抗體標(biāo)記及染色熒光抗體是熒光免疫技術(shù)的關(guān)鍵試劑，是將熒光素與特異性抗體通過(guò)共價(jià)鍵的方式結(jié)合而成。其制備過(guò)程通常包括抗體的標(biāo)記、純化和鑒定三步。在已固定的標(biāo)本上滴加經(jīng)適當(dāng)稀釋的熒光抗體，置于帶蓋的濕盒內(nèi)，37℃溫育30min。檢測(cè)不耐熱抗原以4℃過(guò)夜為宜。溫育后充分洗滌、干燥、鏡檢。熒光免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)三、臨床應(yīng)用此外還應(yīng)用于HLA、腫瘤組織中的腫瘤抗原、組織中的免疫球蛋白和補(bǔ)體組分、激素和酶的定位等。在自身免疫性疾病中的應(yīng)用。各種病原微生物的快速檢查和鑒定。寄生蟲(chóng)感染的診斷。白細(xì)胞分化抗原的檢測(cè)。1234親和組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)04親和組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)親和組織化學(xué)是利用兩種物質(zhì)之間的高度親和力而建立的一種方法。一些具有雙價(jià)或多價(jià)結(jié)合力的物質(zhì)如生物素、葡萄球菌A蛋白、植物血凝素等，對(duì)某種組織成分具有高度親和力，可與蛋白質(zhì)、糖類(lèi)、熒光素和酶等多種類(lèi)型的大小分子結(jié)合形成相應(yīng)復(fù)合物，采用熒光顯微鏡、酶加底物的顯色反應(yīng)等技術(shù)，在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平進(jìn)行對(duì)應(yīng)親和物質(zhì)的定位、定性或定量分析。用于親和組織化學(xué)的物質(zhì)有生物素與親和素、植物凝集素與糖類(lèi)、SPA與IgG、鏈霉親和素與生物素等。親和組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)一、生物素-親和素法生物素可與蛋白質(zhì)、糖類(lèi)和酶等多種類(lèi)型的大小分子形成生物素化的產(chǎn)物。親和素也稱(chēng)抗生物素，每個(gè)親和素分子有生物素結(jié)合的4個(gè)位點(diǎn)，二者可牢固結(jié)合成不可逆的復(fù)合物。親和組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)一、生物素-親和素法常用的技術(shù)類(lèi)型有：1.標(biāo)記親和素-生物素法（LAB法）將親和素與標(biāo)記物（HRP）結(jié)合，一個(gè)親合素可結(jié)合多個(gè)HRP；將生物素與抗體（一抗與二抗）結(jié)合，一個(gè)抗體分子可連接多個(gè)生物素分子，抗體的活性不受影響。細(xì)胞的抗原（或通過(guò)一抗）先與生物素化的抗體結(jié)合，繼而將標(biāo)記親和素結(jié)合在抗體的生物素上，如此多層放大，提高了檢測(cè)抗原的敏感性。親和組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)親和組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)2.橋連親和素-生物素法（BAB法）先使抗原與生物素化的抗體結(jié)合，再以游離親和素將生物素化的抗體與酶標(biāo)生物素搭橋連接，也達(dá)到多層放大效果。親和組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)3.親和素-生物素-辣根過(guò)氧化物酶復(fù)合物法（ABC法）此法是前兩種方法的改進(jìn)，即先按一定比例將親和素與酶（辣根過(guò)氧化物酶）標(biāo)生物素結(jié)合在一起，形成親和素-生物素-辣根過(guò)氧化物酶復(fù)合物（ABC復(fù)合物），當(dāng)其與檢測(cè)反應(yīng)體系中的生物素化抗體（直接法）或生物素化第二抗體（間接法）相遇時(shí)，ABC中未飽和的親和素結(jié)合部位即可與抗體上的生物素結(jié)合，最終形成晶格樣結(jié)構(gòu)的復(fù)合體，其中網(wǎng)絡(luò)了大量酶分子，加底物顯色，可大大提高檢測(cè)抗原的靈敏度。親和組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)親和組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)SPA具有和人及許多動(dòng)物如豚鼠、豬、小鼠、猴等的IgGFc結(jié)合的能力，這種結(jié)合不會(huì)影響抗體的活性。每個(gè)SPA分子可同時(shí)結(jié)合兩個(gè)IgG分子，也可一方面同IgG相結(jié)合，一方面與標(biāo)記物如熒光素、過(guò)氧化物酶、膠體金和鐵蛋白等相結(jié)合。二、SPA法親和組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)親和組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)三、鏈霉親和素—生物素技術(shù)鏈霉親和素與生物素的結(jié)合是已知自然界中最強(qiáng)的非共價(jià)相互作用之一，其功能類(lèi)似親和素。利用生物素結(jié)合的二抗與酶標(biāo)記的鏈霉親和素蛋白就組成酶標(biāo)鏈霉親和素-生物素方法（LSAB）。親和組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)三、鏈霉親和素—生物素技術(shù)LSAB法的特點(diǎn)：特異性強(qiáng)；分子量小，穿透力強(qiáng)，放大效應(yīng)遠(yuǎn)超ABC法，故其敏感性更強(qiáng)；等電點(diǎn)中性更適合組織，可明顯減少非特異性染色，低背景著色使特異性著色更清晰；操作時(shí)間縮短，更簡(jiǎn)便。親和組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)親和組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)四、凝集素法一種凝集素具有專(zhuān)一性結(jié)合某種特異性糖基的能力，同時(shí)所有生物膜都含有一定量的糖類(lèi)，后者主要以糖蛋白和糖脂的形式存在。因此，凝集素可作為一種探針來(lái)研究細(xì)胞膜上特定的糖基。另一方面，凝集素具有多價(jià)結(jié)合能力，能與熒光素、生物素、酶、膠體金和鐵蛋白等示蹤物結(jié)合，從而在光鏡或電鏡水平顯示其結(jié)合部位。親和組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)一般認(rèn)為細(xì)胞膜上特定的糖基可用以區(qū)別細(xì)胞的類(lèi)型并反映細(xì)胞在分化、成熟和細(xì)胞病變中的變化。標(biāo)記了相應(yīng)示蹤物的凝集素可用來(lái)：①作為細(xì)胞分化和成熟的標(biāo)記。②作為細(xì)胞特殊類(lèi)型的標(biāo)記。③腫瘤細(xì)胞伴有細(xì)胞膜的改變，細(xì)胞膜上的糖基也會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的變化，也可用凝集素檢測(cè)出腫瘤細(xì)胞。親和組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)常用下列染色法：直接法—標(biāo)記物直接標(biāo)記在凝集素上，使之直接與切片中的相應(yīng)糖蛋白或糖脂相結(jié)合。間接法—將凝集素直接與切片中的相應(yīng)糖基結(jié)合，而將標(biāo)記物結(jié)合在抗凝集素抗體上。糖—凝集素—糖法—本法是利用過(guò)量的凝集素與組織切片中特定的糖基相結(jié)合，經(jīng)沖洗后，凝集素上還存在未被