氣相及液相課件

化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室目錄色譜學(xué)基本概念一氣相色譜結(jié)構(gòu)及應(yīng)用二液相色譜結(jié)構(gòu)及應(yīng)用三化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室色譜學(xué)基本概念化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室色譜法的分類按操作形式分為：紙色譜法(PC)薄層色譜法(TLC)柱色譜法按兩相的物理狀態(tài)分為：氣相色譜法(GC)液相色譜法

(LC)

化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室色譜的工作原理化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室色譜法分析對象

氣相色譜：（占目前已知化合物的20-25%）

分子量小可揮發(fā)低沸點(diǎn)（一般不超過500攝氏度）熱穩(wěn)定性好

液相色譜：原則上其余化合物

化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室色譜的基本概念化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室基本概念和原理拖尾因子：用以衡量色譜峰的對稱性。T=A/B指10%峰高處的前峰寬A與后峰寬B的比值。化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室基本概念和原理峰寬--峰兩側(cè)拐點(diǎn)處所作兩條切線與基線的兩個(gè)交點(diǎn)間的距離。半峰寬--峰高一半處的峰寬。

化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室基本概念和原理噪音(noise)

基線信號的波動。通常因電源接觸不良或瞬時(shí)過載、檢測器不穩(wěn)定、流動相含有氣泡或色譜柱被污染所致。噪音化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室基本概念和原理死時(shí)間：t0保留時(shí)間：tR調(diào)整保留時(shí)間：tS化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室基本概念和原理《中國藥典》規(guī)定R≥1.5時(shí)，兩峰完全分離化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室色譜分析的意義化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室

因?yàn)楸Ａ魰r(shí)間是唯一的定性數(shù)據(jù)，因此在色譜分析過程中，標(biāo)準(zhǔn)樣品是必需的?；瘜W(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室定量分析化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室氣相色譜結(jié)構(gòu)及應(yīng)用化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室氣相色譜構(gòu)成氣路系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)檢測系統(tǒng)溫控系統(tǒng)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室氣路系統(tǒng)

氣源：載氣、檢測器需要的輔助氣氣流控制裝置：壓力表、流量計(jì)、電磁閥、電子流量計(jì)化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室氣源來源鋼瓶氣體發(fā)生器優(yōu)點(diǎn)氣體質(zhì)量有保障輸送氣體壓力穩(wěn)定一次性投入成本低使用方便（不用頻繁更換）安全性高缺點(diǎn)需要經(jīng)常更換（麻煩）氫氣鋼瓶放在室內(nèi)存在危險(xiǎn)氣體質(zhì)量差一次性投入成本高化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室載氣可用做載氣氣體：

N2、H2、He等，保證載氣純度在99.999%以上?；瘜W(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室氣路控制系統(tǒng)手動調(diào)節(jié)：通過多重壓力表對氣流進(jìn)行控制。自動調(diào)節(jié)：通過電子流量計(jì)或電磁閥進(jìn)行自動控制?；瘜W(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室電子流量控制優(yōu)點(diǎn)流量控制準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好可實(shí)現(xiàn)氣體的多模式操作使儀器體積更小使儀器自動化程度更高儀器更省氣操作更安全化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室最小檢測線和最小定量限化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室溫控系統(tǒng)

進(jìn)樣口

根據(jù)樣品的性質(zhì)確定，太高容易造成樣品的分解，太低會使樣品氣化不完全柱溫箱等溫程序升溫程序檢測器

檢測器的溫度總是比柱的溫度高。

通常比柱箱的程序升溫的最終溫度高20-30℃化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室柱溫與分離的關(guān)系化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室研究了一種同時(shí)測定水中兩種多環(huán)芳烴（萘、蒽）和三種酞酸酯（鄰苯二甲酸二甲酯(DMP)、鄰苯二甲酸二辛酯(DOP)、鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)）的固相微萃取-氣相色譜（SPME-GC）方法。

固相微萃取技術(shù)（solidphasemicro-extraction，SPME）技術(shù)是種集萃取、濃縮、進(jìn)樣于一體的樣品前處理新方法。目前，SPME除了在食品、藥物和毒理學(xué)等研究領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用.

樣品前處理：取40mL水樣于樣品瓶并加入小磁子，插入萃取針(纖維浸入并處于中心位置)，水浴控溫45℃，磁力攪拌60min，萃取結(jié)束退出纖維拔出萃取針，在氣相色譜進(jìn)樣口解析5min。

氣相色譜應(yīng)用實(shí)例一SPME-GC法同步分析水中多環(huán)芳烴和酞酸酯化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室SPME-GC法同步分析水中多環(huán)芳烴和酞酸酯A:經(jīng)固相微萃取后5種物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖；B:經(jīng)固相微萃取后自來水樣品色譜圖AB氣相色譜條件：GC-2010氣相色譜儀，配FID檢測器；HP-5石英毛細(xì)管柱(30m×0.25mm×0.25μm)柱溫起始70℃，保持8min，以30℃/min升至170℃，保持4min，以30℃/min升至280℃，保持8min；氣化溫度280℃；檢測器溫度300℃。載氣：N2，柱流量：1.0mL/min；H2：47mL/min；空氣：400mL/min；不分流進(jìn)樣。

化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室氣相色譜應(yīng)用實(shí)例二SPME-GC-FTD法測定人尿液中毒鼠強(qiáng)含量毒鼠強(qiáng)結(jié)構(gòu)式

樣品前處理：樣品離心后，直接取5mL于樣品瓶中，插入萃取針，水浴控溫50℃，磁力攪拌12min，萃取結(jié)束退出纖維拔出萃取針，在氣相色譜進(jìn)樣口解析3min。

最低檢測限：0.02ng/mL，比文獻(xiàn)報(bào)道的最低檢測限低一個(gè)數(shù)量級化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室SPME-GC-FTD法測定人尿液中毒鼠強(qiáng)含量氣相色譜條件：柱溫起始150℃，以10℃/min升至200℃，然后以20℃/min升至280℃，保持2min；氣化溫度245℃；檢測器溫度310℃。載氣：N2，線速度：2.0mL/min；H2：2.0mL/min；空氣：150mL/min；不分流進(jìn)樣。

GC-2010氣相色譜儀，配FTD檢測器；VO-17石英毛細(xì)管柱(30m×0.53mm×0.5μm)固相萃取后陽性尿液樣品色譜圖固相萃取后標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室氣相色譜應(yīng)用實(shí)例三氣相色譜法測定脂肪酶活力原理：傳統(tǒng)滴定法操作繁瑣，樣品消耗量大，重現(xiàn)性差?；瘜W(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室樣品處理：底物乳化液100μL,pH7.5的Tris-HCl緩沖液200μL，酶液200μL。在32℃水浴反應(yīng)5min后，加入乙腈800μL終止反應(yīng),振蕩10s，離心10min（10000r·min-1），取上清液進(jìn)樣分析。儀器條件：HP5890氣相色譜儀帶FID檢測Supecl-NUKOLTMFFAP毛細(xì)管柱；（30m×0.53mm×0.5μm)，柱溫100℃，保持5min，以20℃·min-1的速率升溫至180℃后，保持6min。分流。進(jìn)樣口溫度250℃，檢測器溫度250℃，載氣（氮?dú)猓┝魉?0mL/min，氫氣流速30mL/min，空氣流速300mL/min，尾吹30mL/min。進(jìn)樣量1μL。氣相色譜法測定脂肪酶活力A:正丁酸樣品色譜圖B:樣品色譜圖

1：正丁酸化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室氣相色譜應(yīng)用實(shí)例四樣品前處理：精密稱取五味子藥材（粉碎）0.200g置于50mL容量瓶中，加入甲醇定容并稱重，超聲（125W，40Hz）提取40min，放冷，再稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的重量后作為供試品溶液以備用。儀器條件：HP-5890氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測器，HP-3365化學(xué)工作站。HP-5MS石英毛細(xì)管柱(30m×0.25mmi.d.，0.25μm液膜厚度)；程序升溫，起始溫度為210℃，保持1min，以2℃/min升溫至230℃，保持30min；進(jìn)樣量1μL，分流比：10：1，載氣：氮?dú)猓?ml/min；進(jìn)樣口和檢測器溫度為280℃。氣相色譜法同時(shí)測定五味子中三種木脂素的含量

（A）對照品和（B）樣品色譜圖1：五味子甲素；2：五味子乙素；3：五味子醇甲化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室液相色譜結(jié)構(gòu)及應(yīng)用第三部分化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室液相色譜發(fā)展歷史經(jīng)典液相色譜：室溫、常壓柱效低、時(shí)間長（常有幾個(gè)小時(shí)）現(xiàn)代液相色譜：

高效液相色譜：HighperformanceLiquidChromatography，HPLC填料顆粒小而均勻高壓輸送流動相又稱高壓液相色譜(HighPressureLiquidChromatography，HPLC)?；瘜W(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室我國藥典收載高效液相色譜法項(xiàng)目和數(shù)量比較表方法項(xiàng)目數(shù)量1985年版1990年版1995年版2000年版HPLC法鑒別934150檢查1240160含量測定760117387化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室液相色譜分類按原理分為：吸附色譜法（AC）

分配色譜法（DC）離子交換色譜法(IEC)排阻色譜法(EC)，又稱凝膠過濾色譜（GFC）親和色譜法(AC)分配色譜按固定相和流動相極性分為：正相色譜和反相色譜化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室固定相與流動相反相HPLC

極性:固定相<流動相固定相-極性弱流動相(甲醇,乙腈等)-極性強(qiáng)極性小物質(zhì)后出峰正相HPLC

極性:固定相>流動相固定相-極性強(qiáng)流動相(己烷,庚烷)-極性弱極性物質(zhì)后出峰正相色譜20%反相色譜80%正相色譜20%反相色譜80%主流化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室液相色譜構(gòu)成溶劑傳輸系統(tǒng)高壓泵樣品引入系統(tǒng)進(jìn)樣器樣品分離系統(tǒng)色譜柱信號檢測系統(tǒng)檢測器數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)軟件化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室溶劑傳輸系統(tǒng)貯液罐流動相輸液泵梯度洗脫裝置化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室貯液罐存放流動相的容器材料通常為玻璃，不銹鋼或表面涂聚四氟乙烯的不銹鋼等。

不能使用塑料容器容器應(yīng)定期清洗，特別是盛水、緩沖液和混合溶液的瓶子，以除去底部的雜質(zhì)沉淀和可能生長的微生物?；瘜W(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室流動相流動相應(yīng)不改變填料的任何性質(zhì)純度：分析純或色譜純必須與檢測器匹配粘度低對樣品的溶解度要適宜。化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室流動相的選擇在正相色譜中，溶劑的強(qiáng)度隨極性的增強(qiáng)而增加；在反相色譜中，溶劑的強(qiáng)度隨極性的增強(qiáng)而減弱。正相色譜的流動相通常采用烷烴加適量極性調(diào)整劑。反相色譜的流動相通常以水作基礎(chǔ)溶劑，再加入一定量的能與水互溶的極性調(diào)整劑，如甲醇、乙腈、四氫呋喃等?；瘜W(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室流動相的選擇參考資料：乙腈的毒性是甲醇的5倍，是乙醇的25倍。價(jià)格是甲醇的6~7倍。100%甲醇的沖洗強(qiáng)度相當(dāng)于89%的乙腈/水。乙腈的截止波長為190nm，甲醇的截止波長為205nm?；瘜W(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室流動相的pH值反相離子抑制技術(shù)：采用反相色譜法分離弱酸（3≤pKa≤7）或弱堿（7≤pKa≤8）樣品時(shí)，通過調(diào)節(jié)流動相的pH值，以抑制樣品組分的解離，增加組分在固定相上的保留，并改善峰形的技術(shù)。對于弱酸，流動相的pH值越小，組分的k值越大，當(dāng)pH值遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于弱酸的pKa值時(shí)，弱酸主要以分子形式存在；對弱堿，情況相反。分析弱酸樣品時(shí)，通常在流動相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液；分析弱堿樣品時(shí)，通常在流動相中加入少量弱堿，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。注：流動相中加入有機(jī)胺可以減弱堿性溶質(zhì)與殘余硅醇基的強(qiáng)相互作用，減輕或消除峰拖尾現(xiàn)象。所以在這種情況下有機(jī)胺（如三乙胺）又稱為減尾劑或除尾劑?；瘜W(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室緩沖鹽流動相注意點(diǎn)(1)現(xiàn)配現(xiàn)用.低溫下密封保存一般不超過3天。(2)確認(rèn)檢測波長下緩沖液是否有大的吸收（在波長210nm附近進(jìn)行檢測時(shí)，不能用醋酸和檸檬酸的緩沖液）(3)沖液必須過濾膜。(4)使用緩沖液期間，用注射器推純水，清洗柱塞桿，延長泵密封墊壽命。(5)工作完畢后及時(shí)沖洗LC系統(tǒng)緩。(6)梯度洗脫時(shí),確認(rèn)不同比列的緩沖液與有機(jī)溶劑能互溶?；瘜W(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室流動相的過濾和脫氣流動相的過濾濾膜類型：

聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑，酸和鹽。醋酸纖維濾膜：不適用于有機(jī)溶劑，特別適用于水基溶劑。

尼龍66濾膜：

適用于絕大多數(shù)有機(jī)溶劑和水溶液，可以用于強(qiáng)酸，不適用于二甲基甲酰胺。

再生纖維素濾膜：蛋白吸收低，同樣適用于水溶性樣品和有機(jī)溶劑化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室脫氣：除去流動相中溶解或因混合而產(chǎn)生的氣泡氣泡對測定的影響：

1）泵中氣泡使液流波動，改變保留時(shí)間和峰面積

2）柱中氣泡使流動相繞流，峰變形

3）檢測器中的氣泡產(chǎn)生基線波動化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室脫氣的目的

1.防止由氣泡的產(chǎn)生引起的故障

2.防止由溶解（在液體中的）氣體量的變動引起的檢測不穩(wěn)定程度

1）示差折射率檢測器*使折射率變化

2）UV檢測器（200nm以下）*溶解氧氣有吸收

3）熒光檢測器*溶解氧氣有消光作用化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室脫氣方法1.低壓脫氣法（真空脫氣法）2.吹氦脫氣法超聲波脫氣法在線脫氣法化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室往復(fù)式輸液泵結(jié)構(gòu)流動相泵頭清洗管路柱塞桿密封圈化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室并聯(lián)泵與串聯(lián)泵串聯(lián)往復(fù)式泵：Waters600泵，島津10AD泵并聯(lián)往復(fù)式泵：Agilent1100系列，島津10AT泵串聯(lián)柱塞泵消除流量脈沖

并聯(lián)柱塞泵減小流量脈沖

單向閥結(jié)構(gòu)化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室梯度洗脫裝置高壓梯度洗脫低壓梯度洗脫1-四通；2-混合器泵控制器；

3-高壓輸液泵；A,B,C-電磁比例閥，a,b,c-溶劑瓶1，2-泵；3，4-泵控制器；

5-梯度程序控制器；6-混合器化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室進(jìn)樣系統(tǒng)手動進(jìn)樣器自動進(jìn)樣器化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室手動進(jìn)樣器的原理圖

裝填狀態(tài)進(jìn)樣狀態(tài)化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室六通閥進(jìn)樣方式：部分裝液法：進(jìn)樣量應(yīng)不大于定量環(huán)體積的50%（最多75％），并要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同。完全裝液法：進(jìn)樣量應(yīng)不小于定量環(huán)體積的5~10倍（最少3倍），這樣才能完全置換定量環(huán)內(nèi)的流動相，消除管壁效應(yīng)，確保進(jìn)樣的準(zhǔn)確度及重復(fù)性?；瘜W(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)：①樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45μm濾膜過濾，以減少微粒對進(jìn)樣閥的磨損。②轉(zhuǎn)動閥芯時(shí)不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動相受阻，使泵內(nèi)壓力劇增，甚至超過泵的最大壓力；再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時(shí)，過高的壓力將使柱頭損壞。③為防止緩沖鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中，每次分析結(jié)束后應(yīng)閥清洗接頭和注射器沖洗進(jìn)樣閥，防止交叉污染?；瘜W(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室自動進(jìn)樣器注意事項(xiàng)：樣品瓶中應(yīng)有超過瓶高1/3的樣品量樣品瓶中樣品不要裝太滿，應(yīng)留有一定的空氣。使用與儀器配套的樣品瓶。機(jī)械手樣品盤化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室洗針溶劑根據(jù)流動相的不同應(yīng)有所不同?；瘜W(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室色譜柱色譜柱結(jié)構(gòu)：柱管，卡帽，卡套，篩板，接頭，螺絲等化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室色譜柱色譜柱的分類：色譜柱按用途可分為分析型和制備型尺寸規(guī)格：①常規(guī)分析柱（常量柱），內(nèi)徑2~5mm（常用4.6mm，國內(nèi)有4mm和5mm），柱長10~30cm；②窄徑柱（narrowbore，又稱細(xì)管徑柱、半微柱semi-microcolumn），內(nèi)徑1~2mm，柱長10~20cm；③毛細(xì)管柱（又稱微柱microcolumn），內(nèi)徑0.2~0.5mm④半制備柱，內(nèi)徑＞5mm；⑤實(shí)驗(yàn)室制備柱，內(nèi)徑20~40mm，柱長10~30cm；化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室柱填料基質(zhì)化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室硅膠填料物理性質(zhì)物理性質(zhì)硅膠純度色譜柱尺寸顆粒形狀粒徑表面積孔徑填料硅膠的純度與殘留金屬離子濃度化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室硅膠填料化學(xué)性質(zhì)鍵合類型碳覆蓋率封端化學(xué)性質(zhì)化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室C18硅膠填料結(jié)構(gòu)化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室高效液相色譜檢測器UV熒光示差折光蒸發(fā)光散射信號吸光度熒光強(qiáng)度折光率散射光強(qiáng)流速影響無無無無溫度影響小小大小檢測限(g/ml)10-1010-1310-710-9梯度洗脫適宜適宜不宜適宜細(xì)管徑柱難難難適宜樣品破壞無無無無通用型否否是是化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室紫外檢測器工作原理：

通過測定樣品在檢測池中吸收紫外-可見光的大小來確定樣品的含量。

朗伯-比爾定律：

當(dāng)一束單色光輻射通過物質(zhì)溶液時(shí)，如果溶劑不吸收光，則溶液的吸光度與吸光物質(zhì)的濃度和光經(jīng)過溶液的距離成正比。

A=εbc

A:吸光度；E：吸光系數(shù)；b：光路長度；c：溶液濃度

對于給定的檢測池（b一定），在固定的波長下（ε一定），紫外檢測器的輸出一個(gè)與樣品濃度（c）成正比的光吸收信號——吸光度（A）。

分類

紫外-可見光檢測器

光電二極管陣列檢測器（PDA或DAD）化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室紫外-可見光檢測器（UV-Vis）結(jié)構(gòu)1-氘燈；2-透鏡；3-濾光片；4-夾縫；5-放射鏡；6-光柵；7-分束器；

8-參比光電二極管；9-流通池；10-樣品光電二極管化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室光電二極管陣列檢測器(PDA/DAD)結(jié)構(gòu)1-氘燈；2-光源轉(zhuǎn)化鏡；3-鎢燈；4-反射鏡；5-入口狹縫；6-扇形鏡；

7-圓形鏡；8-參比吸收池；9-樣品吸收池；10-準(zhǔn)光鏡；

11-分光器入口狹縫；12-平面鏡；13-光柵；14-光電二極管陣列化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室熒光檢測器(FD)原理：化學(xué)生物學(xué)及中藥分析教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&島津合作實(shí)驗(yàn)室熒光檢測器結(jié)構(gòu)1-中壓汞燈光源；2-10%反射棱鏡