制劑仿制藥HPLC含量方法驗證方案

驗證目的根據(jù)法規(guī)的要求，采用非藥典或其它法規(guī)未收載的分析方法應(yīng)進行驗證，證明采用的方法適合于相應(yīng)的檢測要求。這個驗證方案的目的是為驗證提供具體方法參數(shù)、可接受標(biāo)準(zhǔn)和研究步驟。方法簡介與確認(rèn)范圍***制劑含量檢測方法為自行開發(fā)（或參考**標(biāo)準(zhǔn)建立）的高效液相色譜方法。為確保方法的準(zhǔn)確性和可行性，為日常檢測方法提供依據(jù)，現(xiàn)對該方法進行驗證。方法驗證必須按照驗證方案進行，此次驗證方案提供***制劑含量分析方法驗證驗證，包括：專屬性、精密度、線性和范圍、準(zhǔn)確度、耐用性。儀器設(shè)備、標(biāo)準(zhǔn)品和試劑、供試品3.1儀器設(shè)備儀器名稱型號編號驗證有效期高效液相色譜儀高效液相色譜儀電子分析天平 3.2標(biāo)準(zhǔn)品和試劑名稱批號來源級別4.1溶液配制4.1.1溶劑配制：4.1.2雜質(zhì)儲備液配制：4.1.3系統(tǒng)適用性溶液配制:4.1.4對照品溶液配制：4.1.5供試品溶液配制：4.2色譜條件色譜柱：波長：柱溫：流速： 進樣量:流動相：梯度/運行時間驗證內(nèi)容及可接受標(biāo)準(zhǔn)5.1含量色譜條件摸索

名稱試驗內(nèi)容備注檢測波長選擇（1） 取各主藥加甲醇（或乙月青）溶解并稀釋制成各約含XXug/ml（一般10ug/ml）的溶液，進行UV掃描（200nm?400nm）,取最大吸收波長或平滑區(qū)間的波長作為檢測波長；（2） 參考文獻或各國藥典進行波長選擇溶劑：能溶解供試品的常用溶劑。濃度：吸光度讀數(shù)以在0.3?0.7之間為宜色譜條件摸索（流動相、色譜柱的摸索）先查文獻或各國藥典，用系統(tǒng)適用性溶液和主藥初步選擇條件，再在此基礎(chǔ)上進行參數(shù)優(yōu)化。主要考察主成分峰的理論板數(shù)、拖尾因子、空白輔料干擾情況等。主峰的保留時間一般在5?15min，主峰峰型好，理論板數(shù)5000以上，拖尾因子在1.5以下。主藥的配制濃度：根據(jù)檢測結(jié)果，峰高適中。專屬性分別取空白輔料、各雜質(zhì)及供試品配成一定濃度，分別進樣。分離度溶液：配制成含主藥的濃度及各雜質(zhì)濃度為1%（主藥的含量測定濃度）空白輔料應(yīng)不干擾主峰；雜質(zhì)與主峰的分離度應(yīng)大于2.0；如果主成分含量測定濃度在有關(guān)物質(zhì)測定濃度的10%以下，雜質(zhì)峰與主峰分離不開也可以接受。濾膜吸附試驗取對照品或供試品試驗，用空白溶劑配制樣品，分別濾出第1、2、3......ml，檢測結(jié)果與離心樣品結(jié)果比較（用對照品時不必離心），用峰面積評價吸附強度與離心樣品結(jié)果比較（用對照品時不必離心），偏差W1%時認(rèn)為無吸附5.2含量方法學(xué)驗證具體內(nèi)容及可接受標(biāo)準(zhǔn)試驗內(nèi)容溶液配制方法進樣針數(shù)可接受標(biāo)準(zhǔn)備注系統(tǒng)適用性按標(biāo)準(zhǔn)配制系統(tǒng)適用性溶液（如有），配制1份；按標(biāo)準(zhǔn)配制對照品溶液1份。空白溶劑1針；系統(tǒng)適用性溶液1針；對照品溶液6針系統(tǒng)適用性溶液分離度、主峰理論板數(shù)、拖尾因子應(yīng)符合標(biāo)準(zhǔn)要求；6針對照品主峰面積RSDW1.0%；保留時間RSDW1.0%。-方法專屬性空白輔料溶液：取空白輔料適量，用溶劑配制成相當(dāng)于供試品溶液中含輔料量；主藥定位溶液：用溶劑配制成含主藥XXmg/ml；各雜質(zhì)定位溶液：先配制成各雜質(zhì)貯備液，再用溶劑配制成分別含各雜質(zhì)1%濃度；混合溶液：取空白輔料、主藥及各雜質(zhì)貯備液適量，用溶劑配制成含主藥XXmg/ml和含各雜質(zhì)1%濃度；各溶液分別配制1份空白溶劑1針；①②③④溶液分別1針空白溶劑、空白輔料應(yīng)不干擾主峰；除另有規(guī)定外，各雜質(zhì)峰與主峰分離度應(yīng)不小于2.0。如果主成分含量測定濃度在有關(guān)物質(zhì)測定濃度的10%以下且有關(guān)物質(zhì)中雜質(zhì)控制限度在1.0%以下，雜質(zhì)峰與主峰分離不開也可以接受。-重復(fù)性按照標(biāo)準(zhǔn)配制系統(tǒng)適用性溶液1份、供試品溶液6份、對照品溶液2份。空白溶劑1針；對照品溶液1進樣5針，其它各溶液分別2針6份樣品含量測定結(jié)果的 RSDW1.5%；12份樣品含量測定結(jié)果的RSDW2.0%。-

中間精密度不同人員，在不同日期，用不同儀器實驗。按照標(biāo)準(zhǔn)配制系統(tǒng)適用性溶液1份、供試品溶液6份、對照品溶液2份空白溶劑1針；對照品溶液1進樣5針，其它各溶液分別2針線性范圍用主藥對照品用適合溶劑配制成貯備液，再用溶劑配制至少5個濃度（50?150%）的線性溶液各1份。空白溶劑1針；各溶液1針相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.9990，Y軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的2%以內(nèi)，響應(yīng)因子的RSDW2.0%。-準(zhǔn)確性對照品溶液：按照標(biāo)準(zhǔn)配制2份加樣溶液：向一定量的空白輔料中加入對照品，配制至少3個濃度（80~120%）的溶液。每個濃度配制3份?？瞻兹軇?針；對照品溶液1進樣5針，其它溶液每份2針一般按限度80%、100%及120%濃度水平：每個樣品回收率在98~102%，9個回收率RSDW2.0%。統(tǒng)計95%的置信區(qū)間。-溶液穩(wěn)定性取按標(biāo)準(zhǔn)配制對照品溶液、供試品溶液各1份空白溶劑1針；0、1、2、4、6、8、24小時各進對照品、供試品溶液1針按峰面積變化量來衡量溶液穩(wěn)定性，如果各時間點峰面積 RSDW2.0%，可判斷樣品穩(wěn)定；如果某時間點峰面積與0h相比較變化量大于2.0%，即判斷該時間段內(nèi)溶液不穩(wěn)定。-耐用性按照標(biāo)準(zhǔn)配制系統(tǒng)適用性溶液、對照品溶液2份、供試品溶液1份變化條件：流動相pH±0.2；流動相配比±5%柱溫土2°C（如有柱溫）不同（批號）色譜柱流速相對值變化±10%供試品溶液提取方法：如果供試品溶液不能溶清，需要對提取溶劑用量、超聲（振搖）時間進行驗證每個條件下空白溶劑、系統(tǒng)適用性溶液各1針，對照品溶液1進5針，其它溶液每份2針各條件下空白溶劑均不干擾主峰檢測；系統(tǒng)適用性