蛹蟲草實驗系列

目錄學(xué)習(xí)目標(biāo)一、 綜述：蛹蟲草背景資料及市場調(diào)查分析（一） 、蛹蟲草背景資料1、 生物學(xué)簡介2、 人工培養(yǎng)蟲草的主要營養(yǎng)與藥用成分均與野生蟲草的含量比較3、 蛹蟲草的功能及產(chǎn)品開發(fā)（二） 、蛹蟲草人工栽培及產(chǎn)品開發(fā)研究概況1、 固體栽培2、 液體培養(yǎng)（三） 、國內(nèi)外蟲草素研究現(xiàn)狀1、 國內(nèi)的發(fā)展:高含量蟲草素子實體研究2、 蟲草及蟲草素在國外的研究現(xiàn)狀（四） 、市場分析1、 市場調(diào)查2、 需求分析：3、 消費分析：4、 醫(yī)藥行業(yè)分析二、 學(xué)習(xí)前準(zhǔn)備：實驗室培養(yǎng)蛹蟲草在完成本學(xué)習(xí)情境前，需要做好下列準(zhǔn)備（一） 、栽培管理（二） 、滅菌方法三、 工廠化蛹蟲草生產(chǎn)（一） 、建設(shè)條件和廠址選擇1、 資源情況。2、 基礎(chǔ)設(shè)施：（二） 、工藝流程：制種（母菌種）一蛹蟲草栽培一蟲草素提取1、 母菌種制作：2、 蛹蟲草栽培：（1） 、配料：（2） 、滅菌（3） 、接種⑷、培養(yǎng)（5）、采收3、 蟲草素提取工藝（三） 、環(huán)境保護(hù)與勞動安全1、 排污情況2、 治理環(huán)境的措施3、 環(huán)境保護(hù)措施4、 勞動保護(hù)與安全衛(wèi)生四、 結(jié)論學(xué)習(xí)情境三 北冬蟲夏草培養(yǎng)一、綜述：蛹蟲草背景資料及市場調(diào)查分析（一）、蛹蟲草背景資料1、 生物學(xué)簡介蟲草是我國的一種名貴野生中藥材，具有補虛損、益精氣、保肺、益腎、止血化痰、滋補強(qiáng)壯等功效。與人參、鹿茸一起列為中國三大補藥。如一七五七年《本草從新》中就有“冬蟲夏草甘平保肺，益腎，補精髓，止血化痰，已勞咳，治膈癥皆良“的記載。中醫(yī)認(rèn)為，蟲草入肺腎二經(jīng)，既能補肺陰，又能補腎陽，主治腎虛，陽萎遺精，腰膝酸痛，病后虛弱，久咳虛弱，勞咳痰血，自汗盜汗等，是唯一的一種能同時平衡、調(diào)節(jié)陰陽的中藥。全世界已知蟲草類有350余種，我國目前有62種，但最為昂貴的只有冬蟲草和北蟲草。古語日：寧要蟲草一把，不要金玉滿車；民間則稱之為“活黃金“。蛹蟲草（又名北蟲草、北冬蟲夏草，）（c.militaris（L.）Link），蛹蟲草為子囊菌亞門，麥角菌目，麥角菌科、蟲草屬的模式種，學(xué)名為cordycepsm.litaris，世界性分布天然資源數(shù)量很少。由子座（即草部分）與菌核（即蟲的尸體部分）兩部分組成的復(fù)合體。冬季幼蟲蟄居土里，菌類寄生其中，吸取營養(yǎng)，幼蟲體內(nèi)充滿菌絲而死。到了夏季，自幼蟲尸體之上生出幼苗，形似草，夏至前后采集而得。國內(nèi)于1958年在吉林省首次發(fā)現(xiàn)，通過鑒定，認(rèn)為它與冬蟲夏草（Cordycepssinensis（Berk.）sacc.）是同一個屬，定名為蛹草（c.mil.taris（L_）Link）。主產(chǎn)于云南（昆明、安寧、江川）、吉林（安圖、永吉）、遼寧（沈陽）、內(nèi)蒙古（哲里木盟），生于針、闊葉林或混交林地表土層中鱗翅目昆蟲的蛹體上。能采用家蠶和柞蠶蛹人工批量培育，藥效、藥理與野生種相似甚至更好。北蟲草較之冬蟲夏草，具有幾個無可比擬的優(yōu)點：一是北蟲草為蟲草屬的模式種，分布廣泛，為世界各國學(xué)者所認(rèn)識和接受。二是北蟲草已在人工條件下育成了完整子座。三是北蟲草含有蟲草菌素（又名蟲草素Cot’dycepin，即3’一Dexyadenosinec10H1303N5）和蟲草多糖，其獨特藥理作用已日益引起藥學(xué)界的高度重視。由于蛹蟲草具有以上優(yōu)點，成為蟲草屬中藥用蟲草菌中的佼佼者。由于野生蟲草資源稀缺，價格昂貴，難于普及。采用生物工程技術(shù)方法人工培養(yǎng)蛹蟲草，在高科技營造的環(huán)境里，蟲草的生長過程不受自然界不利條件的影響，有效成份不受損失，品質(zhì)優(yōu)良。2、 人工培養(yǎng)蟲草的主要營養(yǎng)與藥用成分均與野生蟲草的含量比較

成分北蟲草冬蟲夏草功能蛋白質(zhì)（%）40.6925.44是構(gòu)成人體組織細(xì)胞及生命活動的物質(zhì)基礎(chǔ)。維生素Mg\gVA34.731.5維持上皮組織的正常機(jī)能，促進(jìn)生長發(fā)育。VB113.05.0維持神經(jīng)、心臟和消化系統(tǒng)的正常功能，促進(jìn)糖代謝。VB662.29.0參與氨基酸脂肪的代謝VB1270.32.0防治惡性貧血，改善神經(jīng)功能，保持心臟。參與氨基酸脂肪的代謝。菸(yan)酸42.98.2具有輔酶作用，可解毒，預(yù)防皮炎等，是重要的抗衰老元素。主要微量元素ppm硒0.440.14為”抗癌之王”，維持正常心肌組織內(nèi)結(jié)構(gòu)的必需元素。鋅13013.9是大腦中含量最高的元素，是人體204種酶的活性成分。銅29.152.8是s0D酶等多種酶的組成部分，為其活性所必需，系造血成分。鋅鉛4.464.96zn/cu在4.5—5.0之間，有利于預(yù)防和治療冠心病。蟲草素（%）1.52微量抗癌，對鳥型結(jié)核桿菌、人鼻咽癌KB細(xì)胞等有明顯拮抗或抑制作用蟲草酸（%）11.807.68利尿，防治血栓疾病和腎功能衰竭，有陣脂作用。蟲草多糖（%）3011.2提高免疫力，延緩衰老，扶正固本，保護(hù)心臟，肝臟，抗癌。sod酶（仇/mg蛋白）54（鮮品）抻制催人衰老的氧化自由基的形成，抗紅斑狼瘡、類風(fēng)濕、皮肌炎、防輻射、抗癌。蛹蟲草人工培養(yǎng)技術(shù)的成功，為我國開辟了名貴藥材產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的又一片天空。現(xiàn)代科學(xué)論證蛹蟲草不僅具有特殊的營養(yǎng)價值，而且有明顯的藥用價值。3、蛹蟲草的功能及產(chǎn)品開發(fā)冬蟲夏草與人參、鹿茸齊名為為我國傳統(tǒng)的三大補品而馳名中外，藥化、藥理和臨床實驗證明蛹蟲草完全可以作為冬蟲夏草的代用品。北冬蟲夏草中含有大量的蟲草素，蟲草素的特殊醫(yī)療保健功能已經(jīng)引起國內(nèi)外專家的高度重視，已有不少以蟲草索為主的保健品、保健食品、化妝品、藥品投放市場。據(jù)報道，在美國已將蟲草素作為抗癌抗病毒新藥進(jìn)入臨床試用。在我國也已將由蟲草素合成的治療白血病的新藥進(jìn)入期臨床試用。北冬蟲夏草的保健功能成分不僅有蟲草素，還有蟲草多糖是國際醫(yī)學(xué)公認(rèn)的人體免疫增強(qiáng)劑。中醫(yī)認(rèn)為其起扶正固本作用，對老年性慢性支氣管炎、肺原性心臟病有顯著療效，能提高肝臟解毒能力，起護(hù)肝作用，提高身體抗病毒和抗輻射能力。蟲草酸即D一甘露醇是治療心腦血管疾病的基本藥物，具有清除自由基、擴(kuò)張血管、降低血壓的作用。核苷酸具有抑制血小板聚集、防止心腦血栓形成，消除黃褐斑、老年斑、青春痘，抗衰防皺，養(yǎng)顏美容等。人工培養(yǎng)的北冬蟲夏草的純子實體，作為食品用于人體，經(jīng)研究是完全安全的，可廣泛用于保健食品、保健膳食和其它滋補類食品。同時人工培育的北冬蟲夏草子實體，色澤鮮艷、氣味純正、實用性強(qiáng)、商品價值高，適合多種不同的人群使用。北冬蟲草子實體還可與一些中藥配伍，對一些疾病有治療作用。人工培育北冬蟲夏草的過程中產(chǎn)生的培養(yǎng)基殘基還可以釀制醬油的原料中添加5%?10%的培養(yǎng)基殘基，所釀制的醬油口味純正，營養(yǎng)豐富，具有濃郁的蟲草香味。（二）、蛹蟲草人工栽培及產(chǎn)品開發(fā)研究概況國外最早見于報道是1723年Valliant在《BotaniconParisiense》一書中，發(fā)表了蛹蟲和大團(tuán)囊蟲草，其后在20世紀(jì)30-60年代，日本等國研究人員分別做了一些生態(tài)調(diào)查和馴化、人工栽培的研究。我國這方面的研究是從20世紀(jì)80年代開始的，并且在人工栽培、化學(xué)成分、藥理等方面做了大量的研究，取得了一些成果。認(rèn)為蛹蟲草完全可以作為資源極缺的冬蟲夏革的代用品。1、固體栽培1986年吉林省蠶業(yè)研究所以家蠶和柞蠶為寄主培養(yǎng)蛹蟲草成功獲得子實體，后來蛹蟲草先后在柞蠶和桑蠶活蛹、家蠶、蓖麻蠶蛹以及樗蠶蛹為寄主在室內(nèi)種植蛹蟲草成功。瓶栽蛹蟲草成功，并提出子座的色澤與光線強(qiáng)弱有關(guān);鄭睛霞等首次將蛹蟲草菌直接在培養(yǎng)基上，并長出子座；而且提出可以直接液體培養(yǎng)菌絲體。姜明蘭等用野生菌進(jìn)組織分離，在PDA培養(yǎng)基上分離、純化出優(yōu)良的原種。經(jīng)人工馴化的原種在PDA液體培養(yǎng)基中擴(kuò)大培養(yǎng)后，接種到大米培養(yǎng)基上，在一定條件下獲得先端膨大呈棒狀的子實體。張顯科等研究認(rèn)為高粱米，小米，玉米渣和蠶蛹可以代替大米栽培蛹蟲草，后來劉守華等實驗得出大米加豬血培養(yǎng)基更適宜蟲草菌絲的生長，使產(chǎn)量有所提高。冉翠香等發(fā)現(xiàn)人工蛹蟲草培育成功的關(guān)鍵在于誘發(fā)子實體原基的形成，認(rèn)為溫差刺激對子實體原基形成的效果較好。2、液體培養(yǎng)天然蛹蟲草資源稀少，人工固體栽培周期長，也不易控制條件。通過液體深層培養(yǎng)法獲得蟲草菌絲體絲體的化學(xué)組成與從天然采集的蟲草的化學(xué)組成接近，而且可以從發(fā)酵液中得到人們需要的物質(zhì)，還能大大縮短生產(chǎn)周期。邵愛娟等研究得出蟲草菌絲的最適生長溫度為20?25°C。在進(jìn)行菌絲發(fā)酵時碳源以蛋白胨為最優(yōu)，采用1：2或1：3的碳氮比較為合適。李宗軍等正交實驗表明，發(fā)酵最佳培養(yǎng)基組成是：5%大米粉、1.5%豆餅粉、1.5%麥芽粉、O.1%KH2P04,0.05%MgS04.7H20。李信等得出影響蛹蟲草菌胞外多糖產(chǎn)量的實驗因子顯著性大小的排列順序為：甜菜糖>酵母浸出粉>KN03>MgS04-7H20>FeS04>KzHP04。胞外多糖最佳發(fā)酵工藝參數(shù)：初始pH值為7，500m1三角瓶中培養(yǎng)基裝液量為100m1，接種量6%，溫度280c。周期為96h。趙明文等得出的優(yōu)化培養(yǎng)基配方為：玉米粉4%，黃豆粉0.6%，酵母粉o.3%，K2HP040.05%，Mgs040.05%，接種量3%，pH5.5。認(rèn)為碳源因子對胞外多糖的產(chǎn)生影響顯示著。陳晉安等得出蛹蟲草發(fā)酵的適宜培養(yǎng)基組成為：蔗糖5.0%，玉米漿3.0%，酵母膏O.5%，MgS04-7H20O.05%，KH2P040.05%，認(rèn)為蔗糖為碳源最好，以酵母膏為氮源，菌體產(chǎn)量最高。李燁研究認(rèn)為蛹蟲草菌絲的生長可以利用多種碳源和氮源，在以紅糖碳源、奶粉為氨源的液體培養(yǎng)基中生長最佳且碳源/氮源合適的比例為2.0?2.5/1.0，適宜PH為5.O?6.5。汪宇等以發(fā)酵得率為指標(biāo)優(yōu)化培養(yǎng)基成分確定為蛋白胨1.5%，MgS040.05%，KH2P04O.15%，VBl5mg/L，2，4一D2mg/L。在相同條件下，優(yōu)化培養(yǎng)基比原來培養(yǎng)基的發(fā)酵得率提高了4.5%，研究初步得到蛹蟲草液體培養(yǎng)條件和生長動力學(xué)，為工業(yè)化生產(chǎn)提供了一定的理論依據(jù)。劉祝等研究最好的培養(yǎng)基配比可將該菌株的蟲草素含量提高到1.21%，比用Czapek培養(yǎng)基提高8.1倍。柴建萍等通過實驗得出玉米粉為最優(yōu)碳源，蠶蛹粉為最優(yōu)氮源，MgS04為最優(yōu)無機(jī)鹽。液體發(fā)酵最佳培養(yǎng)基配方為：玉米粉(20g/1000m1)，蠶蛹粉(5昏/1000m1)，硫酸鎂(0.5異/1000ml）。一種提高蛹蟲草生長穩(wěn)定性的方法，它選用優(yōu)良菌種，引入二次預(yù)培養(yǎng)，以提高蟲草生長的穩(wěn)定性。第一次預(yù)培養(yǎng)是將菌絲體接種到液體培養(yǎng)基中，預(yù)培養(yǎng)后，一支試管菌種可接種5—8瓶懸浮液，試種后每瓶懸浮液可轉(zhuǎn)接100瓶液體菌種，不但大大增加了轉(zhuǎn)接液體菌種，而且由于懸浮液具有很強(qiáng)的均一性，從中取樣具有更好的代表性，取樣試種，能進(jìn)一步確認(rèn)菌種的生產(chǎn)性能，保證生產(chǎn)的穩(wěn)定性。將液體菌種接種到大米培養(yǎng)基上，引入第二次預(yù)培養(yǎng)，使蟲草子實體在培養(yǎng)容器中營養(yǎng)、生殖同步生長、生長穩(wěn)定、成熟一致，外觀上粗細(xì)、長度均勻。既大大增加轉(zhuǎn)接液體菌種，降低生產(chǎn)成本，提高蟲草產(chǎn)量，縮短生長培養(yǎng)周期，又確保產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。（三）、國內(nèi)外蟲草素研究現(xiàn)狀1、國內(nèi)的發(fā)展:高含量蟲草素子實體研究我國北蟲草研究熱始自1988年，“高校科技信息”和“食用菌雜志”1990年4期介紹了罐頭瓶培養(yǎng)技術(shù)。此后有關(guān)研究論文在“中華本草”（上?？萍汲霭嫔纾?、中華醫(yī)學(xué)雜志、中國抗生素雜志、中國生化藥物雜志、中國藥學(xué)雜志、美國化學(xué)文摘、食用菌雜志以及有關(guān)大學(xué)的學(xué)報上相繼發(fā)表；有關(guān)成果在中國科學(xué)報、中國科技信息、北京科技報、大眾衛(wèi)生報、解放軍報、健康報等報刊上報導(dǎo)。據(jù)不完全統(tǒng)計至2000年有關(guān)培養(yǎng)人工蟲草和銷售的公司多達(dá)近百家，國外也有不少報道。從很多網(wǎng)站都可以看到人工北蟲草的照片，例如：湖南省益康生物高科技有限公司www.hnyk.coin或www.techoly,com或www.hhyk.com；沈陽博信www.bcc888.vip.sina.com,沈陽信大：www.1cnpro.com上海國寶www.guobaosh.com北京京都www.yc999.com、香港Wnv.herbsnenses.com和成都金草、上海大中、徐州銅山、安徽興隆、山東瑞東、廣東理科等等。然而由于蟲草培植技術(shù)畢竟是復(fù)雜的生物工程技術(shù)，許多公司僅僅熱了一段時間就因技術(shù)問題而退出了歷史舞臺，上面提到的有些網(wǎng)站大部現(xiàn)在也已關(guān)閉。在國內(nèi)雖然有3家企業(yè)能真正生產(chǎn)子實體，但其產(chǎn)品的蟲草素含量很低，一般為O.08%，最高為0.53%（這是我公司的產(chǎn)品，湖南省科技情報研究所）。湖南省益康生物高科技有限公司和吉首大學(xué)林產(chǎn)化工工程湖南省重點實驗室在北蟲草人工栽培、菌種馴化方面已取得了較為顯著的成績，目前培育的北蟲草中蟲草素含量高達(dá)4.28%。在蟲草素分離與純化方面國內(nèi)已有兩家公司能生產(chǎn)95%以上的產(chǎn)品。湖南益康生物高科技有限公司也取得明顯的進(jìn)展，其制備工藝已經(jīng)達(dá)到工業(yè)化水平，蟲草素純度達(dá)99.9%以上。有關(guān)成果通過了省科技廳組織的鑒定，處于國際領(lǐng)先水平。2、蟲草及蟲草素在國外的研究現(xiàn)狀蟲草在國外研究的歷史可以追溯到明代，從明代中葉1400-1465年間就從浙江傳到日本，并在貴族中廣泛食用。1723年由歐洲的傳教士尚加特利茨庫把從中國西北采到的冬蟲夏草帶到法國，由Reai.1mur在法國科學(xué)院的學(xué)士大會作了介紹，并登在會議紀(jì)要上；1943年，Berkeley鑒定了中國的冬蟲夏草，正式定名為：中國蟲草sphaerisienesis；1878年由saceltrd0歸為蟲草屬cordyceps，冬蟲夏草的研究在國外引起重視，中國蟲草也開始馳名于世。目前國外蟲草研究主要有蟲草素和蟲草多糖藥理反應(yīng)，臨床實用和相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)。有實驗研究表明蟲草素做為臨床抗瘤藥物的輔助藥有一定作用；其實早在20世紀(jì)七十年代就已被發(fā)現(xiàn)有抗瘧原蟲、抑制腫瘤和抑制mRNA翻譯的作用；而九十年代就有研究發(fā)現(xiàn)，添加腺苷脫氨酶（adenosinedeaminase，ADA）抑制劑對其抗腫瘤活性的表達(dá)起著重要作用，蟲草素的研究從而獲得突破性進(jìn)展。美國1997年開始將蟲草素用于一期臨床實驗，治療急性前B和前T淋巴細(xì)胞白血病患者；同時，蟲草素還表現(xiàn)出極強(qiáng)的抗真菌、抗HIV—I型病毒和選擇性抑制梭菌屬細(xì)菌活性。蟲草素作為核苷類新藥，由于它能干擾基因細(xì)胞RNA和DNA的合成，抑制不正常細(xì)胞（癌細(xì)胞）的分裂并能作為區(qū)別細(xì)胞中不同的RNA聚合酶的工具，并具有修復(fù)基因細(xì)胞、保護(hù)生命體遺傳密碼的特殊功效，因此有“機(jī)體細(xì)胞監(jiān)視器”、“腫瘤癌癥的克星”、“人體基因保護(hù)神”、“病毒性疾病的克星”等殊榮，也成為現(xiàn)代生物醫(yī)藥的佼佼者，引起醫(yī)藥學(xué)界的高度重視；現(xiàn)在蟲草素在美國作為抗癌、抗病毒新藥，已經(jīng)進(jìn)入三期臨床實驗。國外研究證明：對動物900mg/kg未出現(xiàn)毒性反應(yīng)，而動物試驗顯效量為50一200mg/kg，所以，治療指數(shù)為5.0（一般要求3.0以上），是安全可靠的新藥之一。美國人在網(wǎng)上也發(fā)布了人體藥代動力學(xué)，人體治療量20一80mg/5Okg/天；肝和腎內(nèi)含量0.15mg/kg。目前，因此研究開發(fā)蟲草素符合國內(nèi)外研究的發(fā)展趨勢。新藥申報規(guī)定尚未進(jìn)入某國藥典均屬于申報范圍，國外周期長，國內(nèi)周期短，因此，在我國研究有重要意義。（四）、市場分析1、市場調(diào)查（1）、產(chǎn)品用途：臨床使用表明北蟲草對人體有以下幾種功能：1、 能平喘止咳，對肺氣腫、氣管炎有較好療效；2、 具有壯陽補腎，增強(qiáng)體力、精力、提高大腦記憶力的功效；3、 能明顯降低血糖、尿糖；對糖尿病患者有明顯療效；4、 降低血壓、顱壓，緩解高血壓、腦血栓、冠心病、手足麻木等病癥；5、 抗菌、抗炎、抗癌、抑癌、能明顯增強(qiáng)機(jī)體免疫功能；6、 潤肌美容，尤其可快速消除“蝴蝶”斑。(2)、藥理及藥效研究：蟲草酸(甘露醇)：可以顯著地降低顱壓，促進(jìn)機(jī)體新陳代謝，因而使腦溢血和腦血栓病癥得到緩解。蟲草素：a、 蟲草素一機(jī)體細(xì)胞監(jiān)視器基因醫(yī)學(xué)是分子水平上的遺傳醫(yī)學(xué)，正常人體的遺傳細(xì)胞是有序進(jìn)行的，但由于多種體內(nèi)、體外、主觀、客觀因素的影響使人體遺傳細(xì)胞的自主復(fù)制能力減弱或失控，因而體內(nèi)的遺傳操作異常。某臟器基因細(xì)胞自主復(fù)制能力減弱時，某臟器就會產(chǎn)生疾病或受病毒侵襲發(fā)生疾病；某臟器基因細(xì)胞失控時，某臟器基因細(xì)胞就會發(fā)生突變。正常情況下，這種基因突變是體內(nèi)的免疫系統(tǒng)無法識別的，一般是細(xì)胞癌變的開始，如何能增加免疫系統(tǒng)的識別敏感性；控制基因突變；增強(qiáng)機(jī)體基因細(xì)胞自主復(fù)制能力；修復(fù)受損的基因細(xì)胞是遺傳醫(yī)學(xué)體內(nèi)基因操作的重中之重.蟲草素可有效增強(qiáng)免疫系統(tǒng)的識別敏感性，有效識別基因突變，控制基因突變，增強(qiáng)機(jī)體基因細(xì)胞自主復(fù)制能力，成為當(dāng)之無愧的機(jī)體細(xì)胞監(jiān)視器。b、 蟲草素一腫瘤癌癥的克星國內(nèi)外醫(yī)學(xué)界已經(jīng)證實，人類的85%以上的腫瘤癌癥是環(huán)境因素引起的，也就是肌體內(nèi)外環(huán)境中的一些物理性、化學(xué)性、生物性因素，對人體細(xì)胞的增殖和分化產(chǎn)生影響。在內(nèi)外環(huán)境因素作用于遺傳物質(zhì)以前，有害因素受到體內(nèi)防護(hù)系統(tǒng)的抵抗或修飾，如果我們的肌體免疫的功能不強(qiáng)，形成免疫缺陷，或基因細(xì)胞DNA受到損傷，DNA的修復(fù)功能有欠缺的情況下，DNA形成了不受機(jī)體調(diào)控的自主增殖的癌細(xì)胞，這樣，腫瘤、癌癥就發(fā)生了。蟲草素可有效修復(fù)基因細(xì)胞DNA，有效修飾機(jī)體免疫缺陷，當(dāng)癌細(xì)胞形成并迅速復(fù)制時，蟲草素在體內(nèi)從源頭上調(diào)控、抵抗或修飾癌細(xì)胞的自主增殖與復(fù)制，抑制腫瘤、癌癥細(xì)胞DNA合成，致腫瘤、癌癥細(xì)胞以死地，從而有效的防癌抗癌，成為腫瘤、癌癥的克星。c、 蟲草素一人體基因保護(hù)神人體內(nèi)有5—10萬個基因細(xì)胞，機(jī)體的細(xì)胞從一次分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束，為一個細(xì)胞增殖周期，在整個周期中，發(fā)生著一系列復(fù)雜而又有序的變化，DNA和染色體主要成分的含量增加一倍，且平均分配到兩個子細(xì)胞中，細(xì)胞一分為二，一套正常的基因表達(dá)，通過其遺傳密碼，保持染色體穩(wěn)定與DNA的有序增殖。當(dāng)人的機(jī)體發(fā)生病變時，其實質(zhì)是一套正?；虮磉_(dá)被改變，DNA的復(fù)制或修復(fù)功能形成缺陷；DNA錯配了修復(fù)基因，染色體發(fā)生了變異。蟲草素在人體內(nèi)形成一種干擾素，干擾致病基因的形成，調(diào)控、保持染色體的穩(wěn)定，監(jiān)視DNA在體內(nèi)有序增殖，有效改變致病基因，系統(tǒng)改變基因病理狀態(tài)，獲得新生理活性。蟲草素在體內(nèi)的這套分子生物學(xué)和遺傳工程學(xué)的生物作用，是從基因的角度來改變、抵抗疾病的免疫細(xì)胞，成為人體基因保護(hù)神，因此，蟲草素受到國際醫(yī)藥學(xué)界的高度重視。d、蟲草素一病毒性疾病的克星蟲草素作為一種干擾基因細(xì)胞RNA和DNA的合成，抑制不正常細(xì)胞的分裂，并能作為區(qū)別細(xì)胞中不同的RNA聚合酶的工具，對病毒性疾病細(xì)胞產(chǎn)生監(jiān)視，阻止了病毒細(xì)胞在體內(nèi)的產(chǎn)生與復(fù)制。從基因的源頭出發(fā)，對人體特別是肝臟產(chǎn)生全方位和全程性的保護(hù)和治療效應(yīng)，它即能保護(hù)肝細(xì)胞正常增殖，又能直接清除病毒，進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，與病毒細(xì)胞做斗爭，使乙型肝炎病毒艾滋病毒、流感等病毒細(xì)胞無生身之地，無葬身之所。產(chǎn)生具有雙向調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的能力，成為病毒性疾病的克星。蟲草多糖：其中蟲草多糖經(jīng)藥理試驗顯示，具有下列作用：a、 免疫調(diào)節(jié)作用。蟲草多糖有刺激T淋巴細(xì)胞和B細(xì)胞產(chǎn)生增殖作用，對單核巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞均有作用，是一種作用面較廣的免疫增強(qiáng)劑，能增強(qiáng)機(jī)體抵抗力，改善機(jī)體功能，有助于延緩衰老。b、 降低血糖作用。對正常小鼠、四氧嘧啶糖尿病模型小鼠和鏈脲佐菌素糖尿病模型小鼠均有顯著的降血糖作用，且呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。c、 增加脾臟營養(yǎng)性血流量，對放射性損傷小鼠有明顯的保護(hù)作用，使動物成活率增加；可對抗化療藥引起的骨髓抑制等不良反應(yīng)。d、 具有降血脂、抗動脈粥樣硬化作用。e、 抗病毒、保肝等作用。f、 蟲草多糖對慶大霉素所致小鼠急性腎損傷具有顯著的保護(hù)作用，可使尿蛋白、血清肌酐、尿素氮和腎指數(shù)顯著下降；g、 具有耐缺氧、鎮(zhèn)靜作用是一種高度分枝的半乳甘露聚糖，它能促進(jìn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化，提高血清lgG抗體含量和機(jī)體的免疫功能，增強(qiáng)機(jī)體自身抗癌抑癌的能力。S0D(超氧化物歧化酶)：可消除機(jī)體內(nèi)超氧自由基，具有抗衰老、抗癌、抑癌等作用。此外，北冬蟲夏草還含有豐富的硒(se)，這種微量元素已被大家公認(rèn)是人體必須的微量元素，是谷胱甘肽過氧化酶的活性中心，以硒半胱氨酸的形式連接在酶蛋白的肽鏈上，保護(hù)細(xì)胞膜的穩(wěn)定性和正常的通透性，并刺激免疫球蛋白和抗體的產(chǎn)生，增強(qiáng)機(jī)體免疫和抗氧化能力。同時，大量的科學(xué)實踐證明硒可明顯地抑制癌細(xì)胞的生長。2、產(chǎn)品現(xiàn)有生產(chǎn)能力目前已有的醫(yī)藥和保健品：蛹靈口服液由蛹蟲草和靈芝配制，有防治癌癥，治療腎虛，神經(jīng)衰弱及消炎、鎮(zhèn)痛等作用。復(fù)方北蟲草膠囊江蘇海安縣中醫(yī)院制劑室生產(chǎn)，用于治療高血壓。蟲草酒以鮮北冬蟲夏草全草入酒既能防病、治病，又可滋補強(qiáng)身。具有補肺益腎、止咳化痰等功效。對肺結(jié)核、年老體衰、咳嗽氣喘、貧血虛弱、神經(jīng)性胃病、陽痿、遺精、腰膝酸痛等病有明顯治療作用。蟲草益壽酒以鮮北冬蟲夏草為主要原料配以人參、鹿茸等幾味名貴中草藥，經(jīng)高溫、酒精提取有效成分，加工而成。具有提高機(jī)體免疫力、降血脂、抗氧化、抑制腫瘤、增強(qiáng)心肝功能、健脾護(hù)肝等延壽抗衰作用。蟲草羅漢精以鮮北冬蟲夏草為主要原料配以羅漢果、佛手等幾味中藥，經(jīng)高溫提取加工而成。具有補腎抗衰、通宣理肺的治療作用。對各類肺結(jié)核具有明顯的療效。蟲草補腎酒以鮮北冬蟲夏草為主要原料配以枸杞、杜仲等幾味中藥經(jīng)高溫、酒精提取有效成分加工而成的保健品，發(fā)揮其本身持有的蟲草酸，對預(yù)防和治療腎功能衰竭有奇效。與中藥配伍后對各類腎病、陽痿遺精、腰膝酸痛等病有明顯治療作用，是腎病患者的特殊保健佳品。3、替代產(chǎn)品調(diào)查野生冬蟲夏草在市面上熱銷，目前每克均45元以上，冬蟲夏草人人皆知，成為國藥市場上的寵兒，一年四季旺銷。然而一般收入的階層無力購買，并且數(shù)量少又破壞草原生態(tài)。（五）、市場預(yù)測保健品市場預(yù)測：2005年中國保健品市場呈現(xiàn)快速發(fā)展的局面，市場總體銷售額突破5OO億元。樂觀估計，2006年還將保持20%以上年增長率，整個保健品行業(yè)的發(fā)展勢頭是比較令業(yè)內(nèi)企業(yè)欣慰的。1、 行業(yè)分析：隨著社會進(jìn)步和經(jīng)濟(jì)發(fā)展，人類對自身的健康日益關(guān)注。上世紀(jì)90年代以來，全球居民的健康消費逐年攀升，對營養(yǎng)保健品的需求十分旺盛。根據(jù)此項研究成果，從全球市場來看，預(yù)計到2010年，全球保健食品的銷量會接近1000億美元。有關(guān)資料顯示，歐美國家平均消費中，保健品方面的消費占了總支出的25%以上，而我國現(xiàn)在是0.07%，人均保健品消費大概是31元，是美國的1/17，日本的1/12。業(yè)內(nèi)認(rèn)為，這正說明了我國保健品的發(fā)展?jié)摿薮?。流傳幾千年的中醫(yī)理論，藥食同源的傳統(tǒng)飲食養(yǎng)生文化、更使我國食用保健品的發(fā)展有著得天獨厚的優(yōu)勢。從上世紀(jì)80年代起步的我國保健品行業(yè)，在短短十幾年時間里，已經(jīng)迅速發(fā)展成為一個獨特的產(chǎn)業(yè)，成為中國工業(yè)經(jīng)濟(jì)新的增長點之一、國民經(jīng)濟(jì)的一個新興行業(yè)。據(jù)中國海關(guān)統(tǒng)計的統(tǒng)計數(shù)據(jù)，我國的保健品市場經(jīng)過1999年的整合，在進(jìn)出口方面取得了巨大發(fā)展。2003年以來，保健品的行業(yè)政策有所改善；很多大企業(yè)、特別是制藥企業(yè)的加入，提升了整個行業(yè)的水平；非典促進(jìn)了政府和金社會對預(yù)防和保健的新的認(rèn)識；會議營銷、體驗營銷、直銷等多種的營銷模式為保健品行業(yè)帶來了活力。這些都促使了保健品行業(yè)的全面回暖。2004年，我國保健品行業(yè)產(chǎn)值達(dá)到500億。根據(jù)有關(guān)方面預(yù)測，到201O年，保健品產(chǎn)業(yè)市場總?cè)萘客黄?000億元，達(dá)到1300億元的消費量；到2020年時，人均消費達(dá)到300元，市場總?cè)萘客黄?500億元。2、 需求分析：近年來，由于飲食過度和過量的脂肪攝入，肥胖癥、非胰島素依賴型糖尿病、高血壓、冠心病及癌癥等慢性病在我國逐年上升。有利于預(yù)防和改善這些疾病的功能型營養(yǎng)食品受到了中老年消費者的歡迎。隨著”老齡化社會”的到，”銀發(fā)族”對保健品的需求尤為旺盛，購買力亦非常強(qiáng)。加上處于家庭、事業(yè)雙重壓力下的中年人，更是一個龐大的消費市場。另一類不可忽視的保健品是維生素、礦物質(zhì)等營養(yǎng)補充元素。據(jù)統(tǒng)計，我國85萬所中、小學(xué)校中的1.76億在校學(xué)生中，其蛋白質(zhì)、鈣、鋅、維生素A、維生素B2攝取普遍不足，缺鐵性貧血比例高達(dá)30%—40%。嬰幼兒家長們在營養(yǎng)保健品上的投資也在其中。近年來，美容保健品大有后來居上的勢頭，已成為拉動保健品成長的一個新的增長點。據(jù)統(tǒng)計，全球保健食品已占整個食品銷售的5%，達(dá)上千億美元，而且每年都以很高速度增長。美國目前的保健食品銷售額達(dá)750億美元，占食品銷售額的1/3；日本近兩年的保健品銷售額為15000億日元，年產(chǎn)保健品3000多種；歐洲的保健食品也有2000余種，銷售額以每年17%的速度遞增。我國自古就有藥食同源的養(yǎng)生文化，用老百姓的話說，就是“藥補不如食補”。作為一個亟須培育的行業(yè)，保健品市場的需求潛力之大實在誘人。2000年我國保健食品年銷售額達(dá)到500億元，權(quán)威部門預(yù)計到2010年將達(dá)到1000億元。3、消費分析：未來保健品消費市場需求很大。據(jù)統(tǒng)計，全球保健食品銷售額已占整個食品銷售額的5%，達(dá)到2000億美元，而且每年都以很高的速度在增長。我國保健品市場的兩大消費人群：“白領(lǐng)市場”和“銀發(fā)市場”對保健品的需求正趨旺盛，由于他們的購買力非常強(qiáng)，正成為國內(nèi)保健品市場的生力軍。此外，隨著人們環(huán)保意識和健康意識的增強(qiáng)，安全健康的消費觀念，正成為市場消費的主流。保健品產(chǎn)業(yè)提供的健康品從其內(nèi)涵看與綠色健康潮流是一致的，綠色和健康聯(lián)在一起，為保健品產(chǎn)業(yè)發(fā)展開拓了廣闊前景。因此，保健品產(chǎn)業(yè)具有競爭優(yōu)勢潛力和強(qiáng)勁的市場潛在需求，具備作為新的經(jīng)濟(jì)增長點的基本條件。保健品產(chǎn)業(yè)之所以蓬勃發(fā)展，主要原因是人民生活水平明顯提高。目前，我國城鄉(xiāng)的思格爾系數(shù)分別為52.9%和56.8%，處于溫飽向小康的過渡階段，東南沿海一些大中城市和地區(qū)已達(dá)到了中等收入國家水平，人們的消費觀念、健康觀念發(fā)生了較大變化，促進(jìn)城鄉(xiāng)保健品消費支出以每年15?30%的速度快速增長。同時，人民生活方式的改變，是保健品產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要契機(jī)。隨著社會競爭愈演愈烈，生活工作節(jié)奏不斷加快，給人們生理和心理機(jī)能帶來巨大沖擊，處于亞健康狀態(tài)的人群不斷擴(kuò)大。為規(guī)避不健康帶來的各種不利影響，使人們求助于保健品，使得保健品的開發(fā)和生產(chǎn)成為經(jīng)濟(jì)生活中的“熱點”。再者，多層次的社會生活需要，為保健品產(chǎn)業(yè)的發(fā)展提供了廣闊空間。除了在家庭和事業(yè)雙重壓力下的中年人逐步加入保健品消費行列之外“一老一小”(老年人、青少年)是保健品消費的主力軍。隨著老齡化趨勢的發(fā)展，“銀發(fā)族”對保健品的需求旺盛，使參茸滋補類的保健品消費大幅上揚?，F(xiàn)代家庭對獨生子女成長的期望，使家長舍得在營養(yǎng)保健品上投資，這就為滋補壯體型、益智型、營養(yǎng)均衡型、療型等保健品提供了廣闊的市場空間。特別是在“送禮送健康”新時尚潮流的引導(dǎo)下，保健品成為節(jié)假日送禮的重要選擇之一，中秋、國慶、元旦、春節(jié)期間這5個月的保健品銷量占到全年銷量的65%以上，成為保健品產(chǎn)銷旺季。在新的世紀(jì)里，保健品市場將繼續(xù)擴(kuò)大，保健品行業(yè)將繼續(xù)保持國民經(jīng)濟(jì)重要產(chǎn)業(yè)的地位。4、醫(yī)藥行業(yè)分析、世界上的癌癥患者人數(shù)增加了兩倍調(diào)查結(jié)果顯示：與3年前相比，世界上癌癥患者的人數(shù)增加了兩倍。據(jù)BBc網(wǎng)站報道，英國癌癥研究中心稱：癌癥患者人數(shù)的增加在一定程度上與人的年齡增長有關(guān)，因為罹患這一病癥的人多數(shù)為老年人。與此同時該中心的癌癥專家認(rèn)為：吸煙和節(jié)食等習(xí)慣也對罹患該病癥產(chǎn)生著很大影響。、研究顯示2020年全世界癌癥發(fā)病率將比現(xiàn)在增50%世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究中心日前公布的一份研究報告說，根據(jù)目前癌癥的發(fā)病趨勢，2020年全世界癌癥發(fā)病率將比現(xiàn)在增加50%，全球每年新增癌癥患者人數(shù)將達(dá)到1500萬人。該中心表示，為避免出現(xiàn)上述局面，各國政府應(yīng)立即采取有效的預(yù)防措施世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究中心位于法國里昂市。根據(jù)該中心的這份研究報告，目前全世界發(fā)病率最高的癌癥是肺癌，每年新增患者人數(shù)為120萬；其次是乳腺癌，每年新增大約100萬患者；隨后依次是腸癌94萬、胃癌87萬、肝癌56萬、宮頸癌47萬、食道癌41萬等。該中心指出，人口老齡化、吸煙人數(shù)增多、體育運動減少、飲食中缺少蔬菜水果等不良習(xí)慣可能進(jìn)一步導(dǎo)致全球癌癥人數(shù)猛增。、我國抗癌形勢復(fù)雜據(jù)2005年8月30日慧聰網(wǎng)中的中科院腫瘤研究所網(wǎng)站報道，每年約140—150萬人死于癌癥，“癌癥患者的醫(yī)療總支出已經(jīng)導(dǎo)致經(jīng)濟(jì)資源的巨大流失，”衛(wèi)生部疾控司慢病處處長孔靈芝坦率地說。在慢病預(yù)防領(lǐng)域工作了十多年的孔處長注意到，每年多達(dá)800億元的人民幣花在了對癌癥的治療而不是預(yù)防上。與此同時，她說，癌癥的死亡率從20世紀(jì)7O年代以來，持續(xù)上升，尤其在農(nóng)村和西部貧困地區(qū)更為顯著。目前，中國每年死于癌癥的人為140萬到150萬，而70年代是70萬。這意味著在0-64歲的人口中，每四例死亡就有一例死于癌癥。其造成的經(jīng)濟(jì)損失，專家估計為每年140億。所以癌癥專家將癌癥視為中國公共衛(wèi)生的頭號公敵：“如果政府現(xiàn)在不采取有效措施，癌癥死亡率在未來20年內(nèi)將上升一倍，達(dá)到300萬。因此，抗癌藥物的市場需求是非常大的。二、學(xué)習(xí)前準(zhǔn)備：實驗室培養(yǎng)蛹蟲草在完成本學(xué)習(xí)情境前，需要做好下列準(zhǔn)備（一）、栽培管理米飯瓶栽法1、 米飯培養(yǎng)基配方大米68.5%，蠶蛹粉25%，蔗糖5%，蛋白胨1.5%。另加維生素B1微量。大米50%，麥麩25%，玉米粉10%，蔗糖2%，雜木屑6%，蠶蛹粉6%，硫酸鎂1%。另加尿素0.1%，維生素B10.1%。大米90%，高粱（或玉米碎料）10%。另加酵母粉0.5%，蛋白胨0.2%,磷酸二氫鉀0.1%，硫酸鎂0.05%。大米100%。另加磷酸二氫鉀0.15%，每千克大米加維生素B12-3片，蛋清少許。大米70%，玉米30%。另加葡萄糖1%，蠶蛹粉1%，蛋白胨1%，磷酸二氫鉀0.1%，硫酸鎂0.05%，檸檬酸銨0.05%，維生素B1微量。2、 裝瓶、滅菌將大米在清水中浸泡5~6個小時，撈起放入鍋內(nèi)蒸至半熟，趁熱搗散，加入輔助原料，調(diào)節(jié)含水量為60%~65%，PH6左右。用500ml罐頭瓶裝料，每瓶裝干料約50g。將料面壓平，瓶口用聚丙烯薄膜包扎封口，在0.12MPa壓力下滅菌45min，或于100°C常壓下維持4~6h。滅菌后培養(yǎng)基要求上下濕度一致，米粒間有空隙，不呈糊狀。3、 接種培養(yǎng)基冷卻至30r以下時，于無菌條件下接種。每瓶接種固體菌種10g,或液體菌種10ml。4、 菌絲體培養(yǎng)接種后，將栽培瓶置清潔避光處培養(yǎng)。發(fā)菌初期，為減少雜菌污染，保持室溫15~18°C,待料面布滿菌絲后，將室溫調(diào)整到20~23C。發(fā)菌期間室內(nèi)空氣相對濕度應(yīng)控制在65%左右。經(jīng)15d左右培養(yǎng)，菌絲長滿料瓶。5、 子座培養(yǎng)菌絲滿瓶后，逐漸由白色轉(zhuǎn)變成橘黃色，此時菌絲已達(dá)到生理成熟，室內(nèi)應(yīng)增加光照。白天可利用自然散射光，保持在200lx;夜間用日光燈作光源，每天光照時間不少于10小時，以促進(jìn)菌絲轉(zhuǎn)色和刺激原基形成。當(dāng)培養(yǎng)基表面或四周有橘黃色色素出現(xiàn)、開始分泌黃色水珠、并有大小不一的圓丘狀橘黃色菌絲隆起時，為子座即將形成的前兆。此時室內(nèi)溫度保持在19-23C，并提高空氣相對濕度至85%-90%。蛹蟲草有明顯趨光性，因此，在子實體形成之后，應(yīng)根據(jù)情況適當(dāng)調(diào)整培養(yǎng)瓶與光源的相對方向，或調(diào)整室內(nèi)光源方向，使受光均勻，以保證子實體的正常生長，提高常量和質(zhì)量。子實體生長期間要適當(dāng)通風(fēng)，補充新鮮空氣。整個培養(yǎng)基不宜揭去封口塑料薄膜，可在塑料薄膜上針穿刺小孔，以利瓶內(nèi)氣體交換。6、 采集與加工當(dāng)子實體長高到5~8cm時即停止生長，子囊殼成熟。此時頭部出現(xiàn)龜裂狀花紋，表面可見色粉末狀物，應(yīng)即使采收。如采收過遲，則子實體枯萎或倒苗腐爛。采收時，用無菌手術(shù)鑷將子實體從培養(yǎng)基摘下即可。采收后，停水3~4d，然后在瓶內(nèi)注入營養(yǎng)液，10~20d后可長出第二批子座。米飯瓶培養(yǎng)蛹蟲草在管理正常情況下，從接受到子囊殼成熟需35~40d，從菌絲扭結(jié)到子實體成熟需15~20d，每瓶可生長子座10~30支，但以5支左右者商品性狀較好。生物學(xué)率一般在20%?50%，高產(chǎn)者可達(dá)70%?80%。米飯培養(yǎng)基培養(yǎng)的子座與野生蛹蟲草子座形狀基本一致，一般長2~6cm，粗0.2~0.3cm，大者長度可達(dá)10.5cm，基部直徑可達(dá)1.2cm，比野生的子座粗壯、高大。子實體采收后，將根部整理干凈，即時曬干或低溫下烘干，然后用適量黃酒噴霧使其回軟，整理平直后扎成小捆，用防潮包裝保藏。干品含水量應(yīng)在13%以下。米飯培養(yǎng)的蛹蟲草子座目前尚無統(tǒng)一的包裝標(biāo)準(zhǔn)，遼寧、河南等地交易質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分為以特級子座7cm以上，淡紅棕色粗細(xì)均勻一級子座7~8cm，金黃色，棒頭尖圓如球，無包塊、碎米和剪邊皮貨二級子座長6~7cm，金黃色，上粗下細(xì)，邊皮修剪粗細(xì)均勻如火柴梗，無米粒雜志。等外級子座長5cm以下的剪貨、渣皮、碎貨、白包塊、帶米粒小棒頭等。（二）、滅菌方法高壓蒸汽滅菌（在這次實驗中我們組選用的這種方法）為濕熱滅菌方法的一種。是微生物培養(yǎng)中最重要的滅菌方法。這種滅菌方法是基于水在煮沸時所形成的蒸汽不能擴(kuò)散到外面去，而聚集在密封的容器中，在密閉的情況下，隨著水的煮沸，蒸汽壓力升高，溫度也相應(yīng)增高。壓力和溫度之間的關(guān)系見表9—1。高壓蒸汽是最有效的滅菌法，能迅速地達(dá)到完全徹底滅菌。一般在15磅/英寸2壓力下（121.6。0,15?30分鐘，所有微生物包括芽抱在內(nèi)都可殺死。它適用于對一般培養(yǎng)基和玻璃器皿的滅菌。進(jìn)行高壓蒸汽滅菌的容器是高壓蒸汽滅菌鍋。高壓蒸汽滅菌鍋是一個能耐壓又可以密閉的金屬鍋，有立式與臥式兩種。可以用電熱、煤氣、蒸汽等。鍋上裝有壓力表，有的還裝有溫度計，能及時了解鍋內(nèi)壓力及溫度。鍋上還設(shè)有排氣口，其作用是在密閉之前，利用蒸汽將鍋內(nèi)的冷空氣排凈，另外還裝有安全活門，如果壓力超過一定限度，活門即可自動打開，放出過多的蒸汽。干熱滅菌微生物培養(yǎng)中常用的干熱滅菌是指熱空氣滅菌。一般在電烘箱中進(jìn)行。干熱滅菌所需溫度較濕熱滅菌高，時間也較濕熱滅菌長。這是因為蛋白質(zhì)在干燥無水的情況下不容易凝固。一般須在160r左右保持恒溫3?4小時，方能達(dá)到滅菌的目的。干熱滅菌適用于空玻璃器皿的滅菌，凡帶有橡膠的物品和培養(yǎng)基，都不能進(jìn)行干熱滅菌。間歇滅菌各種微生物的營養(yǎng)體在100°C溫度下半小時即可被殺死。而其芽抱和抱子在這種條件下卻不會失去生活力。間歇滅菌就是根據(jù)這一原理進(jìn)行的。間歇滅菌的方法是用100C、30分鐘殺死培養(yǎng)基內(nèi)雜菌的營養(yǎng)體，然后將這種含有芽抱和抱子的培養(yǎng)基在溫箱內(nèi)或室溫下放置24小時，使芽抱和抱子萌發(fā)成為營養(yǎng)體。這時再以100C處理半小時，再放置24小時。如此連續(xù)滅菌3次，即可達(dá)到完全滅菌的目的。間歇滅菌通常在流動蒸汽的滅菌鍋中進(jìn)行，也可用普通鋁鍋代替。這種滅菌方法多用于明膠、牛乳等物質(zhì)的滅菌，這類物質(zhì)在100r以上的溫度下處理較長時間，會被破壞，而用間歇滅菌法就既起到了殺菌作用，又使被處理的物質(zhì)免遭破壞。紫外線滅菌紫外線殺菌力最強(qiáng)的是波長2650?2660A的部分。無菌室緩沖間和接種箱常用紫外線燈作空氣滅菌。無菌室和緩沖間的照射時間為20?50分鐘（視房間大小而定），接種箱照射10?15分鐘即可。為了加強(qiáng)紫外線滅菌的效果，在照射前，可在無菌室、緩沖間或接種箱內(nèi)噴灑5%石炭酸，以使空氣中附著有微生物的塵埃降落，同時也可以殺死一部分微生物。無菌室的工作臺的臺面和椅子，可用2?3%的來蘇兒擦洗。然后再照射紫外線。由于紫外線對人體有傷害作用，所以人不要直視正在照射的紫外線燈，也不要在照射情況下進(jìn)行工作。滅菌后，為了檢驗紫外線的滅菌效果，可以在無菌室、緩沖間或接種箱內(nèi)放一套盛有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿，將皿蓋打開5?10分鐘，蓋好后，放入溫箱中培養(yǎng)。如果只有一、二個菌落，可認(rèn)為滅菌效果良好。如雜菌叢生。則需延長照射時間或同時加強(qiáng)其它滅菌措施。三、工廠化蛹蟲草生產(chǎn)（一）、建設(shè)條件和廠址選擇1、 資源情況。原材料：大米、玉米、蠶蛹粉燃料動力及其他公用設(shè)施供應(yīng)：（1）電力：有穩(wěn)定的220伏電力；（2）水：有充足的縣城區(qū)自來水供應(yīng)。2、 基礎(chǔ)設(shè)施：（1） 供電、電源情況：要有三相供電變壓器，可滿足生產(chǎn)生活需要。（2） 供水、水源情況：要有自來水資源，可滿足工人生活需要。（3） 運輸條件：要符合運輸條件方便。排水：生產(chǎn)過程無廢水，僅有工人生活廢水和清潔產(chǎn)品廢水，經(jīng)沉淀后可通過下水道排出。施工條件：要道路平坦，廠地開闊，施工安全，材料購買、運輸容易，施工勞動力資源豐富。(二)、工藝流程：制種(母菌種)一蛹蟲草栽培一蟲草素提取1、 母菌種制作：菌種分離培養(yǎng)、育種長期采用無性繁殖及多次轉(zhuǎn)管的蛹蟲草菌種，其母本基因容易變異，表現(xiàn)為出草畸形，產(chǎn)質(zhì)量下降。因此，在生產(chǎn)中應(yīng)定期對蛹蟲草菌種進(jìn)行一次有性繁殖。具體做法是，選取高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、早熟的蛹蟲草子實體，用0.1%升汞溶液，或75%的酒精進(jìn)行表面消毒后，用無菌水清洗表面藥液，置于盛有綜合培養(yǎng)基容器上方懸空，在21°C—23°C下靜置培養(yǎng)，待培養(yǎng)基表面出現(xiàn)星芒狀蟲草菌落時，在接種箱內(nèi)挑取單個或多個菌落置試管斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)。待蛹蟲草菌絲布滿斜面后再提純。獲得的抱子母種須經(jīng)出草比較試驗后，選取優(yōu)質(zhì)蟲草子實體再進(jìn)行一次組織分離，經(jīng)篩選后方可用于轉(zhuǎn)擴(kuò)栽培種。、考種將母種擴(kuò)大培養(yǎng)后，置米飯培養(yǎng)基上，于18C—20C下培養(yǎng)20—30d，觀察生長情況。若見有細(xì)菌或霉菌污染，應(yīng)對母種進(jìn)一步純化；若無雜菌污染，可繼續(xù)培養(yǎng)，一個月后即有橙紅色子實體產(chǎn)生，說明母種可靠。、二級種子培養(yǎng)將液體培養(yǎng)基分裝于500m1三角瓶中，每瓶加培養(yǎng)液200m1，用12層紗布外加一層牛皮紙封口。13—30分鐘滅菌后，將母種在無菌條件下用接種鉤接入三角瓶中，每支斜面可接10瓶以上。接種后于20C搖床培養(yǎng)5d左右，待形成均勻小球后即可用于栽培種。值得注意的是：如果培養(yǎng)液變混，有兩種可能性，一是細(xì)菌污染應(yīng)予以淘汰；二是由于菌絲生長過分粘稠所致。若難以判斷，可進(jìn)行鏡檢。2、 蛹蟲草栽培：人工栽培北蟲草技術(shù)與普通食用菌栽培技術(shù)基本相同，其栽培技術(shù)主要分為五個過程：配料一滅菌一接種一培養(yǎng)一采收（1）、配料:A、 培養(yǎng)基的組成：培養(yǎng)基=大米（30克/瓶）+混合水（50毫升/瓶）1、 大米：一般生活用米，無霉變，無雜質(zhì)，無蟲蛀，不用淘洗，每瓶所需30克/大米2、 混合水：其中包括玉米粉、淀粉、營養(yǎng)米三種（1） 玉米粉：選擇顆粒飽滿的黃色玉米粉碎，一般用0.8—1.0毫米粗細(xì)的篩片或120目的篩網(wǎng)粉碎，量為每瓶1克。（2） 淀粉：最好用土豆（洋竽）淀粉，婉豆淀粉次之，而不能用紅薯淀粉，自制精純淀粉可以減少用量。其淀粉用量為每瓶2克。（3） 營養(yǎng)料：蠶蛹粉，每袋重量為5OO克，每袋可配500瓶。每瓶用量為1克，注意在保存時防潮。B、 混合水的配制方法（以100瓶為例）a、 計算玉米粉=1克/瓶X100瓶=1OO克（即2兩）淀粉=2克/瓶X100瓶=200克（即4兩）營養(yǎng)料=1克/瓶X100瓶=100克（即2兩）混合水總量=50毫升/瓶X100瓶=5000毫升=10斤水的體積來表示b、 配制的步驟：（1） 準(zhǔn)備：2個足夠容量的塑料桶（不用鐵桶）秤，再多準(zhǔn)備一個量杯也可。（2） 首先拿一個塑料桶去皮重，然后向桶內(nèi)加水10斤，在10斤水（也即是500毫升水）的表面做標(biāo)記，再倒掉桶內(nèi)的清水。后向桶內(nèi)加入100克的玉米粉和200克的淀粉，再加3—4斤的清水充分?jǐn)嚢杈鶆?，使玉米粉和淀粉充分溶解。?）另外拿一只桶，向桶內(nèi)加入100克的營養(yǎng)料，用2—3斤60—90°C的熱水充分?jǐn)嚲鶆?，使其營養(yǎng)料完全溶化。將稀釋后的營養(yǎng)料倒入標(biāo)記的桶內(nèi)，用清水加至劃有的標(biāo)記處。c、配好混合水后，必須測試和調(diào)節(jié)混合水的酸堿度（PH值），要求PH值為5—6測試，用廣泛PH試紙。如果測出來的PH值大于6,則向混合水中加10%的氫氧化納調(diào)節(jié)或直接向其中一點一點的加入蘇打粉，且邊加邊測PH值。C、 裝瓶a、 瓶子的要求質(zhì)量：耐高溫，透明度好的罐頭瓶子；大?。?80—500毫升。b、 處理方法將瓶子用洗衣粉或洗滴劑等加入水中，清洗干凈，再把瓶子用清水刷干凈，后倒立在平臺上，溯干瓶內(nèi)的殘留水后即可使用。c、裝瓶方法（1）自制兩個小容器，一個能裝30克大米，一個能裝50毫升混合水。⑵首先向每個罐頭瓶內(nèi)加入30克大米，再向每瓶內(nèi)加入50毫升混合水（注意：加混合水時必須要邊加邊攪拌，防止玉米粉和淀粉沉淀）。D、 封口封口膜要求質(zhì)量：耐高溫，透明度好，無毒的塑料薄膜。厚度：0.03一0.08毫米，最好為0.05毫米。材料：聚乙烯或聚丙烯，一般常壓滅菌時兩者均可使用，如若用高壓滅菌則須用聚丙烯膜。封口：要求封嚴(yán)、封緊，不漏氣即可。方法：將一張封口膜放在瓶口中央，用單個雙股折成的膠圈將瓶口扎嚴(yán)，封緊不漏氣即可（2）、滅菌（一）蒸汽滅菌1、 要求：常壓蒸汽滅菌要求其溫度達(dá)100°C以上，102°C—105°C最好，滅菌時問10—12小時，計時從102C開始。高壓蒸汽滅菌要求：溫度達(dá)12卜126C，滅菌時間為40—60分鐘，計時從121C開始，其雖時短，但投資大，每次蒸的瓶子數(shù)量少。2、 常壓蒸汽滅菌鍋的設(shè)計。燒煤用。要求：材料：鐵皮或磚和水泥混合結(jié)構(gòu)。鍋蓋上應(yīng)插入一只0—15OC的溫度計，蓋上還應(yīng)留8—12個孔徑為2—3毫米或毛衣針尖大小的排氣孔。加水時應(yīng)加開水，原則少量多次，(注：加開水時和加煤時鍋內(nèi)應(yīng)用大火猛攻，防溫度下降。)，加水和加煤不能同時。大小直徑為0.8米，高為1.2米能裝瓶大約5OO個左右，裝瓶一般6—8層為好，不超過10層。鍋內(nèi)水面離最下層及最上層距鍋蓋距離為5—10厘米。燒火原則：攻頭、?；稹⒖罩虚g攻頭：用大火猛攻，使溫度達(dá)100C以上時最好達(dá)102—105C時攻1小時左右?？罩虚g：用溫火維持，溫度不能降至100C以下，保尾：在最后1--2小時再用大火猛攻。燒電用(燒煤氣用)：要求鍋內(nèi)水面高度須達(dá)18厘米以上，鍋內(nèi)燒水用電熱常1.5—2.5Kw、2Kw。3、 需用蒸汽滅菌法滅菌的有：培養(yǎng)基瓶接種工具(剪刀、鑷子、勺子)用毛巾或布塊包裹(3)無菌水瓶報紙和工作服等也可4、無菌水瓶的制作：用一空罐頭瓶向其中加入一定量的水，對其封嚴(yán)后與培養(yǎng)基瓶、接種工具一塊放入滅菌鍋內(nèi)滅菌。作用：是用來稀釋菌種之用，也可用來稀釋酒精。無菌水的數(shù)量為100一150毫升清水。無菌水瓶的數(shù)量=菌種瓶的數(shù)量+備用瓶數(shù)量(注：一瓶無菌水能稀釋一瓶菌種，一瓶菌種可配5O瓶培養(yǎng)基。)(二)化學(xué)滅菌法1、熏蒸滅菌法，主要針對培養(yǎng)室內(nèi)的滅菌培養(yǎng)室的要求和結(jié)構(gòu)：要求：清理干凈，遠(yuǎn)離污染源，相對密閉，通風(fēng)采光相對好一點，窗戶在通風(fēng)口應(yīng)安4—5層的紗布封嚴(yán)，防止微小生物飛入房內(nèi)或瓶內(nèi)而引起蟲蛀現(xiàn)象。結(jié)構(gòu)：①緩沖問，大約2平方米的密閉空間，內(nèi)可放工作服、鞋等。②接種箱，可作為單人接種箱，寬大約40—60厘米，也可作雙人的寬約為60—80厘米，長度均可為1.2一1.4米，正中央開兩孔徑為14—17厘米大的操作孔，兩空心間距離為40厘米左右，兩孔用深色雙層棉布袖套封好。接種箱斜面安玻璃窗，兩旁兩個做成活動拉門，接種箱頂部兩測或兩端開兩個8—10厘米大小的通氣散熱孔，孔上用4—5層紗布封好，箱內(nèi)安一盞紫外燈可并排安一日光燈，供晚上接種之用。③培養(yǎng)架材料可木架、竹架、鐵架和鐵絲網(wǎng)、竹網(wǎng)、木板等做成，長、高度據(jù)房屋的長、高而定，度最好為60—70厘米左右，層高最好在30—50厘米之問，培養(yǎng)架四周距墻壁距離為10—20厘米。熏蒸方法高猛酸鉀5克/立方米甲醛（福爾馬林）1O毫升/立方米在培養(yǎng)室準(zhǔn)備好一耐高溫的盆子（鐵盆除外），首先將稱好的高錳酸鉀加入，再將量好的甲醛加入，人即迅速離開，關(guān)閉培養(yǎng)室所有門窗進(jìn)行熏蒸24小時以上時間。（3） 除去甲醛味的方法：如需用培養(yǎng)室時，進(jìn)入又有一般非常刺激的甲醛氣味，則需去除。去除方法：在一耐高溫的容器如銀鍋、鐵盆內(nèi)加入每立方米5克的碳酸氫銨，用酒精燈或電爐加熱便可產(chǎn)生氨氣，和甲醛味中和后便可去除，大約需30—60分鐘。（4） 需熏蒸的物質(zhì)有：①培養(yǎng)架：②接種箱（內(nèi)外均需）：③緩沖間：④報紙；⑤工作服和鞋。2、 紫外燈滅菌法紫外燈全稱紫外線殺菌法，是用作空氣和物體表面滅菌規(guī)格：40w的1.2米和，30w的一米長。安裝的地方：（1）接種箱內(nèi)需安一只：（2）培養(yǎng)室內(nèi)每4—6平方米大小的空間內(nèi)需再裝一支。滅菌時間：每次20—30分鐘，最好是30分鐘注：（1）每月要用紗布擦試紫外燈卜2次。（2）紫外燈對人體有害，人不能長期在紫外燈下工作。（3）在每次開紫外燈之前，都必須將所有培養(yǎng)物表面用報紙蓋好，表面消毒時距離不超過1-2米，最好在1米之內(nèi)。）合理使用紫外燈：在培養(yǎng)管理過程中1-15天（其中3—10天最關(guān)鍵）每天開燈2—3次，15天之后每3—4天開一次，每次開窗通風(fēng)關(guān)窗之后開燈一次，每次20—30分鐘，每次關(guān)燈后10分鐘左右進(jìn)屋揭開報紙，注是培養(yǎng)的第二、三階段時）。3、 酒精滅菌法：燃燒用酒精：濃度需達(dá)90%以上，如95%的乙醇或99.7%的無水乙醇均可。消毒用酒精：濃度需達(dá)75%左右。如配1OO毫升75%的酒精=用95%或99.7%的乙醇75毫升+25毫升水酒精燈的使用：加入酒精燈內(nèi)酒精的量不能太多，一般為燈體高2/3處。酒精燈在使用過程中，要求每次接種前須檢查，不夠則加。氧氣不足，每次接種時箱體均要密閉，要求箱頂要留散熱孔。、接種菌種的保存：(菌種是液體菌種，屬活性制劑)1、 保存溫度為4—1O°C時地佳，可保存15—2O天左右，如在20^以下的常溫下保存時間為7—1O天左右。2、 注意事項：菌種箱和瓶在保存時不能倒置。在未接種之前不允許輕易拔掉菌種瓶塞。在運輸、貯存過程中不能過于裝滿。忌光(太陽光和紫外光)、防潮。接種步驟1、 對接種箱進(jìn)行薰蒸消毒，首先將箱體內(nèi)清理干凈，用5克高錳酸鉀和10毫升甲醛對接種箱薰蒸10分鐘以上。2、 薰好后，將已泠的培養(yǎng)基瓶，無菌水瓶，接種工具、酒精燈、支架、酒精棉球、打火機(jī)等拿入接種箱(菌種除外)，然后打開紫外燈照射滅菌20—30分鐘后關(guān)掉。3、 帶入菌種：首先剪去長指甲及飾物，用肥皂水洗手，并用75%的酒精棉球擦試手和菌種瓶及外表面。然后從袖套口帶入菌種，再次對手和菌種瓶外表面擦試消毒。4、 燃燒工具：首先點燃酒精燈，在其火焰上方將接種工具進(jìn)行燃燒（注：燒時要將工具的尖端燒紅，其它部位燒燙，燒好后放在支架上，讓工具的尖端保持在火焰上方部位）。5、 處理菌種：（1）將菌種瓶的瓶頸放在火焰上方進(jìn)行轉(zhuǎn)動燃燒5—6圈，在火焰上去掉瓶塞，并開口不能離開火焰。（2）另一只手揭開無菌水瓶的封口膜，將其他瓶頸也放在火焰上方轉(zhuǎn)動燃燒幾圈，在火焰上方將菌種倒入無菌水瓶內(nèi)，無菌水瓶傾斜的放在支架上。如菌種瓶內(nèi)有菌皮，則用鑷子夾住，用剪刀剪碎即可。6、 接種：首先將菌種攪拌均勻，然后拿培養(yǎng)基瓶放在火焰附近打開部分封口，用接種勺均勻的將5毫升稀釋的菌種接入培養(yǎng)基的表面。（注：接種要均勻）7、 封口：原樣的將封口膜封嚴(yán)封緊。（注：每接種5—6瓶后需重新燃燒一次接種勺，冷卻之后接種。）8、 接種完一批之后，將接種好的培養(yǎng)物上架培養(yǎng)。9、 重復(fù)只需進(jìn)行（2）—（8）即可。⑷、培養(yǎng)（一） 影響蟲草生長的因素有：（1）溫度：（2）濕度：（3）光照：（4）通風(fēng)。（二） 蟲草生長的三個階段：第一階段（培養(yǎng)的卜10天左右）稱早草菌絲體的生長階段，現(xiàn)象：白色菌絲逐漸的長到培養(yǎng)基表面80%左右。第二階段（1O—20天左右）稱蟲草子實體的生長階段（三） 具體管理要點：1、溫度要求：第一階段，最佳濕度為18—