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集團(tuán)標(biāo)準(zhǔn)化辦公室：［VV986T-J682P28-JP266L8-6集團(tuán)標(biāo)準(zhǔn)化辦公室：［VV986T-J682P28-JP266L8-6軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)二、 原理：腫瘤細(xì)胞能無(wú)限繁殖形成細(xì)胞集落，而成熟分化的細(xì)胞則不能形成集落。CHO-EGFP和CHO-ECRT39/272細(xì)胞在體外無(wú)需加刺激因子，可在軟瓊脂培養(yǎng)基中形成集落，其他細(xì)胞則喪失了軟瓊脂中形成集落的能力。三、 操作收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞（如何鑒定），先測(cè)定細(xì)胞活力并進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)，然后調(diào)整細(xì)胞濃度，用含20%FBS的DMEM制成1000活細(xì)胞/ml的細(xì)胞懸液。用蒸餾水制備1.2%、0.7%兩個(gè)濃度的低熔點(diǎn)瓊脂糖，高壓滅菌后，維持在40°C不會(huì)凝固；1.2%瓊脂糖和2xDMEM等體積混合，6孔板中加入1.4ml，RT凝固作為底層瓊脂，置CO2溫箱中備用；0.7%瓊脂糖和2xDMEM等體積混合，再加入細(xì)胞懸液充分混勻，RT凝固作為上層瓊脂，勿有氣泡，將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組分兩組加好，蓋上蓋并作好標(biāo)記。在室溫放置20分鐘使細(xì)胞瓊脂懸液凝固。以上各步驟均在無(wú)菌條件下進(jìn)行。然后移培養(yǎng)板或平皿于CO培養(yǎng)箱中37C進(jìn)行培養(yǎng)。2培養(yǎng)7?10天，肉眼觀察并計(jì)數(shù)細(xì)胞集落。四、 結(jié)果：以肉眼可見(jiàn)的細(xì)胞團(tuán)（含500個(gè)以上細(xì)胞）作為計(jì)數(shù)集落的標(biāo)準(zhǔn)。集落的計(jì)數(shù)和計(jì)算：集落數(shù)二n孔中細(xì)胞集落

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