福建省木霉種類及分布特征

福建省木霉種類及分布特征

廣泛存在于土壤、空氣和植物體表面等生態(tài)環(huán)境中。一些植物對(duì)植物原生動(dòng)物的細(xì)菌有寄生蟲(chóng)和抵抗作用。有些是重要的細(xì)菌和真菌培養(yǎng)過(guò)程中的重要污染。例如，可以預(yù)防和處理由立枯草半菌、鐮刀菌和小核菌引起的植物疾病，并具有重要的抗生性。據(jù)報(bào)道，目前50多種國(guó)際木霉菌的不同制劑已被用作生物工具或生物肥料。為了加速福建省生物農(nóng)藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，本文對(duì)福建省的木菌資源進(jìn)行了研究，并從感染木霉的細(xì)菌、子實(shí)體、植物線蟲(chóng)體和植物根之間的土壤中分離并獲得了木菌植株。木霉菌的分類經(jīng)歷了一個(gè)長(zhǎng)期的演變過(guò)程.1969年Rifai首次提出了木霉屬的分類系統(tǒng),將木霉屬分為9個(gè)集合種(speciesaggregates);20世紀(jì)80年代中后期到90年代初,Bissett提出了一個(gè)新的分類系統(tǒng),引進(jìn)了組(section)的概念,將木霉屬分成了5個(gè)組,即長(zhǎng)枝組(Longibrachiatum)、土星孢組(Saturnisporum)、木霉組(Trichoderma)、厚基組(Pachybasium)和肉座組(Hypocreaum).木霉屬的形態(tài)學(xué)分種依據(jù)主要是產(chǎn)孢區(qū)的形狀,分生孢子梗的分枝方式及大小,瓶梗的著生方式、形狀、大小和數(shù)量,分生孢子的形狀、大小、長(zhǎng)寬比和表面紋飾的有無(wú)等形態(tài)性狀和培養(yǎng)特征.本研究根據(jù)Rifai和Bissett的分類系統(tǒng),對(duì)從福建省3種基質(zhì)上分離的木霉菌株進(jìn)行種類鑒定.1材料和方法1.1木霉病體及回復(fù)突變體木霉菌株從福建省古田、福州、漳州、龍巖、莆田、順昌和詔安等地的食用菌木霉病菌絲體和子實(shí)體、培養(yǎng)基質(zhì)、作物根際土壤、根結(jié)線蟲(chóng)卵囊及腎形線蟲(chóng)雌蟲(chóng)蟲(chóng)體等樣本中分離.1.2等間距1.2.1木霉的分離從發(fā)病的食用菌栽培料或子實(shí)體上挑取木霉孢子于PSA平板上,于28℃恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng),菌落形成后立即純化.1.2.2懸浮液稀釋、培育、純化把采集的土樣自然晾干后輾碎,過(guò)篩.稱取10g土樣置于盛有90mL無(wú)菌水的燒瓶中,用渦旋儀充分振蕩.吸取10mL懸浮液于90mL無(wú)菌水中稀釋,再?gòu)南♂尩膽腋∫褐形?0mL于90mL無(wú)菌水中稀釋,如此類推,稀釋至體積分?jǐn)?shù)為10-3、10-4、10-5.用微量移液槍從各含量的土壤懸浮液中吸取0.1mL懸浮液分散滴于馬丁氏—孟加拉紅平板上,再用滅菌的三角玻璃棒涂勻,靜置20min后于28℃的恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng),菌落形成后立即純化.1.2.3紅樹(shù)莓菌的分離純化用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.0%的NaClO溶液對(duì)供分離的根結(jié)線蟲(chóng)卵囊和腎形線蟲(chóng)雌蟲(chóng)表面消毒3min,用無(wú)菌水對(duì)消過(guò)毒的卵囊和雌蟲(chóng)蟲(chóng)體漂洗3次,將消毒過(guò)的卵囊和雌蟲(chóng)表面余水用無(wú)菌吸水紙吸去,單個(gè)移入含有抗生素的PSA平板上,于28℃恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng),菌落形成后立即純化.1.3類型識(shí)別1.3.1測(cè)定菌落純化的木霉菌在PSA平板上培養(yǎng)4d,用直徑為0.5㎝的打孔器打取菌碟,置于PSA平板上,于28℃、黑暗條件下培養(yǎng)5d,逐日測(cè)量菌落直徑并觀察菌落形狀和顏色等.1.3.2木霉菌的形態(tài)鑒定在顯微鏡下觀察木霉菌分生孢子梗的分枝情況和分生孢子的形態(tài),計(jì)測(cè)孢子大小和孢子梗長(zhǎng)度,結(jié)合培養(yǎng)性狀并參考Rifai和Bissett的木霉菌種群分類系統(tǒng)進(jìn)行種類鑒定.2結(jié)果與分析2.1類型識(shí)別2.1.1瓶梗和分生孢子在PSA平板上,菌落呈暗綠色,中部為密實(shí)產(chǎn)孢區(qū),外緣也產(chǎn)孢,菌絲較少.分生孢子梗叢束疏松,環(huán)狀排列,主分枝呈樹(shù)狀,其上有眾多次級(jí)分枝,常2-3個(gè)一組,直角伸出.瓶梗短,基部變細(xì),中間膨大,以大角度伸出,終極瓶梗長(zhǎng)而細(xì),5個(gè)以內(nèi)的瓶梗近似輪枝排列,產(chǎn)孢細(xì)胞大小為(7.50-12.50)μm×(2.00-3.75)μm.分生孢子呈球形、倒卵圓形,大小為(2.50-3.75)μm×(2.50-3.00)μm(圖1A至1C).來(lái)源:銀耳(Tremellafuciformis)子實(shí)體、茶薪菇(Agrocybecylindracea)菌絲體、香蕉(MusaAAA)和柑橘(Citrussp.)根際土壤.采集地:古田、漳州、龍巖.研究菌株:見(jiàn)表1.2.1.2銀耳屬genussp.1e銀耳屬-1f銀耳屬法制水理工藝染整菌株lanfinusedpoleurithista的分離和來(lái)源在PSA平板上,菌落初呈白色絨狀,后期出現(xiàn)輪狀的菌絲密實(shí)產(chǎn)孢區(qū),顏色為綠色至深綠色.分生孢子梗呈環(huán)狀排列,次級(jí)分枝單個(gè)或以2-3個(gè)為一組,大角度伸出,分枝彎曲或波狀.瓶?；靠O縮,中部較寬,從中部以上變窄形成長(zhǎng)頸,產(chǎn)孢細(xì)胞大小為(8.0-12.0)μm×(2.5-3.0)μm.分生孢子呈球形,表面有刺,大小為2.5-4.8μm(圖1D至1F).來(lái)源:銀耳子實(shí)體,香菇(Lenfinusedodes)、靈芝(Ganodermalucidum)、平菇(Pleurotusostreatus)和毛木耳(Auriculariapolytricha)菌絲體,香蕉和柑橘根際土壤,根結(jié)線蟲(chóng)(Meloidogynespp.)卵囊.采集地:古田、福州、漳州、龍巖、順昌、詔安.研究菌株:見(jiàn)表1.2.1.3采出工菌及菌株在PSA平板上,菌落初呈白色,后期在菌落中間有一圈明顯的產(chǎn)孢區(qū),顏色為綠色、淺綠或黃綠.分生孢子梗分枝多,主分枝上又以2-3個(gè)為一組長(zhǎng)出次級(jí)分枝,分枝角度大,瓶梗上部變細(xì),產(chǎn)孢細(xì)胞大小為(2.5-3.0)μm×(5.0-10.0)μm.分生孢子呈橢圓形、卵圓形或倒卵形,個(gè)別呈近長(zhǎng)方形,大小為(2.5-5.0)μm×(2.0-2.5)μm(圖1G至1I).來(lái)源:靈芝菌絲體、腎形線蟲(chóng)(Rotylenchulusreniformis)雌蟲(chóng)蟲(chóng)體.采集地:福州、漳州.研究菌株:見(jiàn)表1.2.1.4近充膠質(zhì)瘤病原菌.在PSA平板上,菌落中間有一圈明顯的淺綠色產(chǎn)孢區(qū).分生孢子梗主分枝長(zhǎng),次級(jí)分枝直角伸出,瓶梗2-5個(gè)輪生、單生或間生,在近孢子梗頂部往往不規(guī)則伸出.瓶?；靠O縮,中間膨大,頂部變細(xì),終極瓶梗延長(zhǎng),基部不變細(xì),產(chǎn)孢細(xì)胞大小為(3.00-7.50)μm×(1.25-2.00)μm.分生孢子呈短圓柱形,大小為(2.5-4.5)μm×(2.0-2.5)μm(圖1J至1L).來(lái)源:靈芝菌絲體.采集地:古田、福州.研究菌株:見(jiàn)表1.2.1.5瓶梗密度、大小及菌株在PSA平板上,菌落初呈白色,后轉(zhuǎn)為淺綠或深綠.分生孢子梗長(zhǎng)而直,次級(jí)分枝直角伸出,或朝主枝彎曲,上部次級(jí)分枝短,基部次級(jí)分枝較長(zhǎng),常單個(gè)伸出或互生,很少再次分枝.瓶梗單生或2-7個(gè)輪生,呈圓柱狀,頂部明顯變細(xì),終極瓶?；坎豢O縮,其下著生許多間生瓶梗,產(chǎn)孢細(xì)胞大小為(5.0-12.5)μm×(2.0-2.5)μm.分生孢子光滑,呈倒卵形、橢圓形,大小為(2.5-5.0)μm×(2.0-2.5)μm(圖1M至1O).來(lái)源:靈芝、平菇菌絲體.采集地:古田、福州.研究菌株:見(jiàn)表1.2.1.6物種tichoudmamp.2.2不同基質(zhì)中木霉和綠木霉的比例,從食用菌、植物線蟲(chóng)和植物根際土壤中共分離到125個(gè)木霉菌菌株,從總體而言,綠色木霉和哈茨木霉為優(yōu)勢(shì)種,綠色木霉51株,占總菌株數(shù)的40.8%;哈茨木霉31株,占總菌株數(shù)的24.8%;康氏木霉、擬康氏木霉和長(zhǎng)枝木霉分別占總菌株數(shù)的16.8%、8.8%和4.0%.但是,不同基質(zhì)上的木霉優(yōu)勢(shì)種有所差異,食用菌上以康氏木霉和擬康氏木霉為優(yōu)勢(shì)種;植物根際土壤中以哈茨木霉和綠色木霉為優(yōu)勢(shì)種;植物線蟲(chóng)蟲(chóng)體上以綠色木霉為優(yōu)勢(shì)種.其分布情況如表1所示.3哈茨木霉和綠色木霉種的制備本研究初步揭示了福建省木霉菌的物種多樣性,為福建省木霉菌資源調(diào)查和種類鑒定提供了理論依據(jù).從125株木霉菌