醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告課件

醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)設(shè)計性實驗報告

實驗項目一：動物細(xì)胞融合實驗原理兩個或兩個以上的細(xì)胞在自發(fā)或誘導(dǎo)條件下合并成為一個雙核或多核細(xì)胞的過程成為。在通常情況下，兩個細(xì)胞接觸并不會發(fā)生融合現(xiàn)象。因為各自存在完整的細(xì)胞膜，在特殊融合誘導(dǎo)物的作用下，兩個細(xì)胞膜發(fā)生一定變化，就可以促進(jìn)兩個或多個細(xì)胞聚集，相接觸的細(xì)胞膜之間融合，繼而細(xì)胞質(zhì)融合，形成一個大的融合細(xì)胞，在自然界的就是細(xì)胞融合的過程。

細(xì)胞融合受精

目前，細(xì)胞融合的誘導(dǎo)物種類很多，常用的主要有滅活的仙臺病毒，聚乙二醇（PEG）和電脈沖。目前應(yīng)用最廣泛的是聚乙二醇，因為它易得，簡單，且融合效果穩(wěn)定。實驗用品

（1).材料：雞血。

（2).試劑：Hanks液,PEG溶液(MV=400)，1640液（含10%滅活小牛血清和不含血清的兩種），0.85%生理鹽水，0.2%次甲基藍(lán)染

(3).儀器設(shè)備：顯微鏡(800r/min)，離心機(jī)，水浴箱，酒精燈，吸管，載玻片、蓋玻片，濾紙。

注意事項

1.制備50%PEG一定要保溫在37℃水浴中，不然冷卻后會有結(jié)晶析出。2.在離心管中加PEG之前，一定要將離心管倒置在濾紙上，流盡液體，否則殘留液會改變PEG的濃度。3.融合過程觀察：分別于溫育5min、10min、20min、30min取細(xì)胞懸液一滴制成臨時裝片。

兩個細(xì)胞核發(fā)生，形成一個含有兩個或多個核的圓形細(xì)胞。

預(yù)期結(jié)果融合細(xì)胞融合過程實驗原理：實驗項目二：細(xì)胞核的分離與鑒定

細(xì)胞核。細(xì)胞內(nèi)各種結(jié)構(gòu)的比重和大小都不相同，在同一離心場內(nèi)的沉降速度也不同，用不同的轉(zhuǎn)速和不同的介質(zhì)離心，就可以將細(xì)胞內(nèi)各組分分級分離出來。細(xì)胞核的分離就是利用了細(xì)胞核的比重大小與細(xì)胞內(nèi)其他組分不同，先將組織制成勻漿，再在懸浮的均勻介質(zhì)中進(jìn)行離心，分離，甲苯胺藍(lán)又可以將細(xì)胞核染成藍(lán)紫色，這樣，就可以鑒別分離出來的細(xì)胞核。實驗用品：材料：小白鼠試劑：生理鹽水,0.25mol/L蔗糖，0.003mol/L氯化鈣溶液，1%甲苯胺藍(lán)染液儀器設(shè)備：顯微鏡，普通離心機(jī)，天平，離心管，滴管，玻璃漏斗，量筒，25ml燒杯，解剖剪，鑷子，沖洗瓶，紗布，伯樂均漿器，載玻片，蓋玻片，染色盤架實驗步驟：斷頭處死小白鼠迅速開腹取肝加8ml預(yù)冷的0.25mol/L蔗糖0.003mol/L綠化高永液于燒杯中，將剪碎的肝組織倒入玻璃勻漿器，是勻漿器下端侵入盛有冰塊的器皿。盡量剪碎肝組織，取1克放入燒杯中反復(fù)洗滌手提尾部使其血液盡量流出左手握持勻漿器右手將勻漿搗桿垂直插入管中勻漿，直至看不到明顯的組織塊過濾勻漿液于離心管中

2500r/min離心15min離心

5到7分鐘后取上清液制一張涂片1將原離心管中剩余上清液吹打成沉淀成懸液另制涂片2滴染甲苯胺藍(lán)染液用8層紗布滴染甲苯胺藍(lán)染液

5到7分鐘洗滌，晾干洗滌，晾干鏡檢注意事項：1.操作規(guī)范，防止試劑污染。2.細(xì)胞懸液的涂片制作要輕柔。3.使用離心機(jī)要注意平衡，轉(zhuǎn)速從低到高。預(yù)期結(jié)果：低倍鏡下找到標(biāo)本，再換高倍鏡，可見肝細(xì)胞核已游離出來，被染成藍(lán)紫色，圓形，中央有2到4個甚至更多個深藍(lán)色的核仁。設(shè)計組名單姓名學(xué)號王正旭1120150135羅秀1120150136徐鷺1120150137汪俊成112015