《熒光和熒光光譜》課件

Fluorescence&Spectroscopy

熒光和熒光光譜

1編輯課件pptFluorescence&Spectroscopy

良好的天平可測出10－5克的物質(zhì)，微量化學(xué)分析可測出10－9克的物質(zhì)，光譜分析可測出10－10克的物質(zhì)，熒光分析可測出10－11～10－12克物質(zhì)，一般的放射分則可測出10－18~10－19克的物質(zhì)(請參見：任時(shí)仁編著“生物學(xué)中的放射必核技術(shù)”，北京大學(xué)出版社，1997：P173；潘中允主編“簡明核醫(yī)學(xué)”，北京醫(yī)科大與中國協(xié)和醫(yī)科大聯(lián)合出版社，1990：P139)。

因此，熒光分析法和放射分析法，尤其是后者，是目前最好的可用于對超微量物質(zhì)進(jìn)行高靈敏性測定的分析方法。2編輯課件ppt良好的天平可測出10－5克的物質(zhì)，微量化學(xué)分析可測出10-1810-163編輯課件ppt10-1810-163編輯課件ppt熒光光譜法特點(diǎn) 靈敏度高、選擇性強(qiáng)、用樣少、方法簡便以及能提供較多的物理參數(shù)等優(yōu)點(diǎn)。 用途廣泛，如可用于研究溶液中蛋白質(zhì)構(gòu)象。4編輯課件ppt熒光光譜法特點(diǎn)4編輯課件pptByFelixA.Carroll,

PerspectivesonStructureandMechanismInOrganicchemistryBrooks/ColePublishingCompany,19985編輯課件pptByFelixA.Carroll,Perspecti6編輯課件ppt6編輯課件ppt7編輯課件ppt7編輯課件pptKASHARULE

Polyatomicmolecularentitiesluminescewithappreciableyieldonlyfromthelowestexcitedstateofagivenmultiplicity.Thereareexceptionstothisrule.KASHA-VAVILOVRULE

Thequantumyieldofluminescenceisindependentofthewavelengthofexcitingradiation.Thereareexceptionstothisrule.8編輯課件pptKASHARULE

PolyatomicmoleculaAnomalousFluorescencePatternsinCoralsWehavenoticedseveralkindsofanomalouspatternsincoralsthatshowupclearlyinfluorescencebutarenotvisibleunderwhite-lightillumination.Theseinclude:brightordarkpatcheswithinareasofmoreuniformfluorescenceisolatedpatchesoffluorescentcolorcolorpatternsthatareonlyseeninfluorescenceThesignificanceoftheseeffectsiscompletelyunknown,buttheyalmostcertainlypointtounderlyingdifferencesininternalchemistry.9編輯課件pptAnomalousFluorescencePatternWhite-light(left)andfluorescence(right)photographsofacoral,Roatan,Honduras.Notetheyellow-fluorescentareainthephotographontherightthatisnotevidentintheotherimage.10編輯課件pptWhite-light(left)andfluores2?；局R：（－〕.激發(fā)光譜與發(fā)射光譜11編輯課件ppt2?；局R：11編輯課件ppt日立12編輯課件ppt日立12編輯課件ppt激發(fā)光光源--激發(fā)單色器-------比色杯--透射光 | 熒光 | 熒光單色器 | 探測器(計(jì)算機(jī))

熒光光度計(jì)示意圖13編輯課件ppt激14編輯課件ppt14編輯課件ppt15編輯課件ppt15編輯課件ppt16編輯課件ppt16編輯課件ppt17編輯課件ppt17編輯課件ppt18編輯課件ppt18編輯課件ppt熒光熄滅劑：引起熒光熄滅的物質(zhì)。如：鹵素離子，重金屬離子，硝基化合物，O2等。19編輯課件ppt熒光熄滅劑：引起熒光熄滅的物質(zhì)。如：鹵素離子，重金屬離子，Protein:Fluorescence?在蛋白質(zhì)中，能發(fā)射熒光的氨基酸殘基，只有:Try(348nm),Tyr(303nm)和Phe(282nm)。個(gè)別蛋白質(zhì)含有黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)，也能發(fā)射熒光。熒光光譜法是研究水溶液中蛋白質(zhì)分子構(gòu)象的一種新方法：通過測定蛋白質(zhì)分子的自身熒光；另一是向蛋白質(zhì)的特殊部位，引入熒光探測劑，然后測定熒光探測劑的熒光。20編輯課件pptProtein:Fluorescence?20編輯課件p芳香族類(全部共三種氨基酸):21編輯課件ppt芳香族類(全部共三種氨基酸):21編輯課件ppt 向蛋白質(zhì)分子引入熒光探測劑，運(yùn)用熒光偏振法，可以測定：蛋白質(zhì)分子的聚合與解離；抗原與抗體的反應(yīng)機(jī)制；不同蛋白質(zhì)分子相互作用等。22編輯課件ppt 向蛋白質(zhì)分子引入熒光探測劑，運(yùn)用熒光偏振法，可以測定：蛋白23編輯課件ppt23編輯課件ppt24編輯課件ppt24編輯課件ppt氨基的修飾Lys:+NH3-CH(COO-)-C4H8-NH3+ForExample:25編輯課件ppt氨基的修飾Lys:+NH3-CH(COO-)-C4H8-NNaBH426編輯課件pptNaBH426編輯課件pptCys:+NH3-CH(COO-)-CH2-SH27編輯課件pptCys:+NH3-CH(COO-)-CH2-SH27編輯課28編輯課件ppt28編輯課件pptCircadianRhythmsinRNaseA(Left,a:30

C;b:37

C)andDNA(Poly(dA*dT)-EB)

(He,Y.J.etal.,MedicalHypotheses2000,55(3):253-256)Fluorescence(A.u.)

Time(hr)inWashingtonDC,12:00(Noon)isstartingpoint29編輯課件pptCircadianRhythmsinRNaseA(DNA:Fluorescence?

NO.Inexperiment:DNA+EB=highFluo.Mechanism:Intercalation(嵌入)30編輯課件pptDNA:Fluorescence?30編輯課件pptA- B- Z-DNA31編輯課件pptA- B- Z-DNA31編輯課件ppt32編輯課件ppt32編輯課件pptZ-DNA:GC(GC)nHighSalt33編輯課件pptZ-DNA:GC(GC)n33編輯課件pptMechanism:Intercalation(嵌入)34編輯課件pptMechanism:Intercalation(嵌入)3CircadianRhythmsinRNaseA(Left,a:30

C;b:37

C)andDNA(Poly(dA*dT)-EB)

(He,Y.J.etal.,MedicalHypotheses2000,55(3):253-256)Fluorescence(A.u.)

Time(hr)inWashingtonDC,12:00(Noon)isstartingpoint35編輯課件pptCircadianRhythmsinRNaseA(DNASequencemodification(DNA序列修飾)36編輯課件pptDNASequencemodification(DNA37編輯課件ppt37編輯課件ppt38編輯課件ppt38編輯課件ppt39編輯課件ppt39編輯課件ppt40編輯課件ppt40編輯課件ppt41編輯課件ppt41編輯課件ppt42編輯課件ppt42編輯課件ppt43編輯課件ppt43編輯課件pptIsitOKforZ-DNAFluoresencelabelling?----NO!44編輯課件pptIsitOKforZ-DNAFluoresenceCircadianRhythmsin

EthidiumBromide(He,Y.J.etal.,MedicalHypotheses2000,54(5):783-785)

45編輯課件pptCircadianRhythmsinEthidium實(shí)驗(yàn)內(nèi)容:溴乙錠的熒光光譜性質(zhì)與溫度依賴性溴乙錠(EB)的激發(fā)光譜;EB的發(fā)射光譜;熒光強(qiáng)度與溫度的關(guān)系.目的：理解熒光的原理和掌握測定熒光的方法46編輯課件ppt實(shí)驗(yàn)內(nèi)容:46編輯課件ppt日立47編輯課件ppt日立47編輯課件ppt48編輯課件ppt48編輯課件ppt49編輯課件ppt49編輯課