寄生蜂鑒定DNA條形碼方法編制說明

一、工作簡況（一）任務來源由江蘇沿海地區(qū)農業(yè)科學研究所提出，由江蘇省農業(yè)工程學會正式立項。（二）協作單位中國農業(yè)科學院植物保護研究所；鹽城師范學院。主要工作過程為了確保本標準編制工作的科學性、權威性、廣泛性和可操作性，高效、按時完成標準的起草和編制工作，組織熟悉寄生蜂分類鑒定以及DNA條形碼技術研究的業(yè)內專家共同組成工作小組，把關標準編制的各環(huán)節(jié)內容質量，直至通過評審。本標準編制過程中，主要開展了以下四方面工作：1.標準內容查新2023年9月11日，根據“關于征集2023年江蘇省農業(yè)工程學會團體標準項目的通知”精神，立足于推動寄生蜂快速精準分類技術的研究，廣泛查閱國內外相關文案資料并進行標準查新后，決定撰寫《寄生蜂鑒定DNA條形碼技術》，并于2024年2月15日向江蘇省農業(yè)工程學會提交標準制修訂項目立項申請書。2.結構框架確定2024年3月1日，根據通知相關要求，由江蘇沿海地區(qū)農業(yè)科學研究所承擔的《寄生蜂鑒定DNA條形碼技術》團體項目，即時組織成立標準編制小組，正式開啟《寄生蜂鑒定DNA條形碼技術（草案）》的編寫，組織討論了標準的編制原則、工作程序、基本架構和主要內容，明確了工作計劃、任務分工及時間節(jié)點。3.方案研討調研2024年3月1日～3月15日，深入到中國農業(yè)科學院植物保護研究所、鹽城師范學院等單位進行交流研討，對寄生蜂鑒定的術語和定義、DNA提取方法、序列比對擴增等技術問題進行詳細研討，為后續(xù)標準的撰寫和完善提供支持。4.形成標準征求意見稿2024年3月16日～4月9日，在前期文案調研和實地踏勘工作基礎上，組織編寫了標準文本內容和編制說明，根據專家的建議反復修改，形成了《寄生蜂鑒定DNA條形碼方法（征求意見稿）》。主要起草人及其所做的工作標準主要起草人來源于江蘇沿海地區(qū)農業(yè)科學研究所、中國農業(yè)科學院植物保護研究所和鹽城師范學院3家單位。江蘇沿海地區(qū)農業(yè)科學研究所的主要起草人有孫星星、王凡和蔣穎潔，主要負責標準內容查新、結構框架制定與整體設計等；中國農業(yè)科學院植物保護研究所的主要起草人有張禮生研究員，主要負責DNA條形碼引物的設計與篩選等；鹽城師范學院主要起草人有黎文建，主要負責寄生蜂的形態(tài)學驗證等。二、標準編制原則和主要內容的論據本技術標準在多年寄生蜂鑒定中進行了應用與驗證，綜合相關專家技術指導意見，采用GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法、GB19489實驗室生物安全通用要求和WS/T230臨床診斷中聚合酶鏈反應（PCR）技術的應用等相關技術標準。嚴格按照GB/T1.1-2020的要求進行編寫，遵循“針對性、先進性、實用性、統(tǒng)一性、規(guī)范性”的原則，注重標準的可操作性。本標準主要技術內容包括：寄生蜂DNA的提取方法、引物的選擇與設計、PCR擴增體系與反應程序、PCR產物的檢測、DNA測序與拼接、序列比對和結果判定。根據寄生蜂分類鑒定研究現狀和存在問題，充分汲取和利用國內現有相關標準、規(guī)范的精華，使本標準能天敵資源挖掘、農業(yè)害蟲管理和生態(tài)平衡維護中發(fā)揮著重要作用。本研究目的在于開發(fā)和優(yōu)化基于DNA條形碼的寄生蜂鑒定技術，實現對寄生蜂種類的快速、準確鑒定。不僅能夠加深對寄生蜂生物多樣性的認識，而且對于促進生物防治技術的應用、提高農業(yè)害蟲管理的效率和生態(tài)安全性具有重要意義。三、主要試驗（或驗證）的分析、綜述報告、技術經濟論證、預期的社會經濟效益項目組于2018-2024年期間通過馬來氏網以及掃網法對沿海濕地、農田生態(tài)系統(tǒng)以及桃園生態(tài)系統(tǒng)的寄生蜂進行收集，收集到包括赤眼蜂、姬蜂科、繭蜂科等寄生蜂多種，目前共存有5093頭寄生蜂標本，涉及18科150余種，每個標本均留有電子照片，初步構建了寄生蜂試驗標本庫。對桃園內57種寄生蜂共109個樣本進行了DNA條形碼測序，得到CO1序列52條，28SrDNA序列94條，ITS1序列75條，16SrRNA序列22條；進行了4種DNA條形碼在寄生蜂鑒定應用中的評估，篩選得到對寄生蜂鑒定效果好的DNA條形碼。相關數據將在《中國生物防治學報》、《Cropprotection》、《Biocontrol》等期刊雜志上發(fā)表。本研究具有顯著的經濟效益，通過精確鑒定寄生蜂種類，可以有針對性地選擇對特定害蟲有控制效果的寄生蜂，從而提高生物防治的效率和成功率。這有助于減少對化學農藥的依賴，降低環(huán)境污染，同時減少農業(yè)生產成本。本項目也具有顯著的生態(tài)效益，準確的物種鑒定是生物多樣性研究和保護的基礎。該技術能夠幫助科學家更好地了解寄生蜂在生態(tài)系統(tǒng)中的角色和分布情況，為制定保護策略提供科學依據，有助于生態(tài)平衡和生物多樣性的保護。四、與國際、國外對比情況在國際上，基于DNA條形碼的物種鑒定技術已經成為生物多樣性研究的重要工具。許多國家和區(qū)域，特別是在北美、歐洲和澳大利亞，這項技術已經被廣泛用于野生動植物的分類、物種新記錄的確認、以及入侵物種的監(jiān)測等方面。國際上的科研機構和組織，如國際生物多樣性信息標準組織（TDWG）、全球生物多樣性信息設施（GBIF）、以及加拿大的國際條形碼生命項目（iBOL），都在推動DNA條形碼技術的發(fā)展和應用。這些努力包括建立全球物種數據庫、發(fā)展高通量DNA測序技術以及推廣DNA條形碼在生物多樣性監(jiān)測和環(huán)境DNA分析中的應用。五、與現行相關法律、法規(guī)和強制性國家標準的關系本文為試驗標準，標準內容符合現行法律法規(guī)的要求，與我國現行其他國家標準協調一致。六、重大分歧意見的處理過程及依據無。七、涉及相關知識產權的有關說明無。八、貫徹團體標準的要求和措施建議本標準適用于寄生蜂物種的鑒定，可首先在相關領域的科研機構及社會環(huán)保組