化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準(zhǔn)則 第16部分：土壤微生物毒性試驗 編制說明

1《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準(zhǔn)則第16部分：土壤微生物毒性試驗》編制說明（一）任務(wù)來源根據(jù)國標(biāo)委發(fā)[2023]64號國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會關(guān)于下達(dá)2023年國家標(biāo)準(zhǔn)制修訂計劃的通知（2023年12月28日發(fā)）第390項，由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所主持承擔(dān)GB/T31270.16-2014“《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準(zhǔn)則第16部計劃號20232956-T-326。（二）制定背景化學(xué)農(nóng)藥對控制病、蟲、草害，保證農(nóng)作物高產(chǎn)發(fā)揮著巨大的作用，但同時也可能對生態(tài)環(huán)境造成不容忽視的污染和危害，甚至對人類健康產(chǎn)生嚴(yán)重威脅。1992年，聯(lián)合國環(huán)境與發(fā)展大會已將有毒化學(xué)品列為21世紀(jì)全球七大環(huán)境問題之一，農(nóng)藥對生態(tài)環(huán)境的污染危害已成為全球廣泛關(guān)注的2重大環(huán)境問題，農(nóng)藥的安全性（包括環(huán)境和人體健康）管理也已逐步成為全球農(nóng)藥管理的重點。為了加強(qiáng)農(nóng)藥的環(huán)境管理，以便在使用農(nóng)藥的同時保護(hù)日益脆弱的生態(tài)環(huán)境，世界各國都加大了監(jiān)管力度。農(nóng)藥環(huán)境管理的法律、標(biāo)準(zhǔn)不斷完善，繼英國于1952年首先頒布了《農(nóng)藥環(huán)境預(yù)防條例》之后，美國于1972年制定了《聯(lián)邦環(huán)境農(nóng)藥法規(guī)》，聯(lián)合國糧農(nóng)組織于1981年頒布了《農(nóng)藥登記環(huán)境指南》。對農(nóng)藥環(huán)境安全性作出評價，必須進(jìn)行一系列的試驗。世界各國都非常重視試驗準(zhǔn)則的制訂工作，F(xiàn)AO于1989年重新修訂了農(nóng)藥登記的環(huán)境試驗基準(zhǔn)指南；OECD于1981年制定了化學(xué)物質(zhì)（包括農(nóng)藥）的測試指南，并隨時加以修訂。USEPA農(nóng)藥及有毒物質(zhì)預(yù)防辦公室（OPPTS）在綜合40CFR、NTIS及OECD測試指南的基礎(chǔ)上，提出了一套統(tǒng)一的生態(tài)影響測試指南，其目的就是為了使各研究機(jī)構(gòu)的測試結(jié)果更準(zhǔn)確，更具可比性。藥登記制度》，規(guī)定申請正式登記的農(nóng)藥產(chǎn)品需提供生態(tài)環(huán)境資料。我國1989年國家環(huán)境保護(hù)局發(fā)布了《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準(zhǔn)則》（簡稱原準(zhǔn)則）。隨著農(nóng)藥環(huán)境問題研究的不斷深入及農(nóng)藥國際貿(mào)易的不斷擴(kuò)大，對我國的農(nóng)藥管理工作提出了更高的要求，農(nóng)藥環(huán)境管理的法律、標(biāo)準(zhǔn)不斷完善。因此，為了滿足新世紀(jì)農(nóng)藥管理的需求，促進(jìn)我國3農(nóng)藥的國際貿(mào)易，加強(qiáng)與規(guī)范農(nóng)藥對生態(tài)環(huán)境的安全評價工作，2014年制訂并發(fā)布國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T31270-2014《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準(zhǔn)則》。《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準(zhǔn)則》國家標(biāo)準(zhǔn)的制訂，進(jìn)一步完善我國農(nóng)藥環(huán)境安全評價技術(shù)體系，通過農(nóng)藥登記前的環(huán)境安全性評價，從源頭控制農(nóng)藥對環(huán)境可能產(chǎn)生的污染。同時試驗準(zhǔn)則的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化，可保證試驗結(jié)果的準(zhǔn)確可靠及可比性。據(jù)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部測算，2020年我國水稻、小麥、玉米三大糧食作物農(nóng)藥利用率為40.6%，其余大部分會通過各種途徑最終進(jìn)入土壤中，從而對土壤中微生物活性等產(chǎn)生影響，為明確化學(xué)農(nóng)藥對土壤微生物的毒性影響，2014年制訂并發(fā)布了相關(guān)的國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T31270.16-2014《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全式實施。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部6月21日公布了新的《農(nóng)藥登記管理學(xué)技術(shù)的發(fā)展以及我國近年來農(nóng)藥特別是熏蒸劑等易揮發(fā)農(nóng)藥登記的實際需要，原有的試驗方法已不能完全滿足我國現(xiàn)有農(nóng)藥登記試驗的國情需求和農(nóng)藥登記管理的實際要求，亟需對相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行的修訂，旨在進(jìn)一步完善我國農(nóng)藥環(huán)4境安全評價技術(shù)體系，通過農(nóng)藥登記前的環(huán)境安全性評價，從源頭控制農(nóng)藥對環(huán)境可能產(chǎn)生的污染。同時試驗準(zhǔn)則的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化，可保證試驗結(jié)果的準(zhǔn)確可靠及可比性。因此，國家標(biāo)準(zhǔn)的修訂，對于規(guī)范我國農(nóng)藥環(huán)境安全評價工作，使之適應(yīng)新形勢的要求，從而更好地為我國的農(nóng)藥登記和農(nóng)藥環(huán)境管理提供技術(shù)支持具有重要意義。GB/T31270.16-2014至今已實施近10年，廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥登記、新農(nóng)藥研制篩選和科研等領(lǐng)域，以氮轉(zhuǎn)化法測定化學(xué)農(nóng)藥對土壤微生物毒性的研究被廣泛采納，而CO2吸收法基本不采用，因此可以將標(biāo)準(zhǔn)僅保留氮轉(zhuǎn)化法。同時，OECD于2000年發(fā)布的適用于化學(xué)品測試的“土壤微生物毒性”試驗指南（Guideline216:SoilMicroorganisms:NitrogenTransformationTest,OECDGuidelinesfortheTestingofChemicals.）可以適用于易揮發(fā)等化學(xué)農(nóng)藥，可以為標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供方法參考。（三）起草過程（1）成立標(biāo)準(zhǔn)起草工作組。自項目通知下達(dá)后，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所組織相關(guān)專家成立了標(biāo)準(zhǔn)起草工作組,提出標(biāo)準(zhǔn)修訂實施方案。起草組成員主要包括：袁善奎、毛連綱、陳朗、周艷明、劉亮、朱麗珍、吳遲、張?zhí)m、王永江、白小寧、楊斯琪、王英杰、楊宇。（2）文本起草。2024年2-6月，標(biāo)準(zhǔn)編制組查閱了國5內(nèi)外相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)資料，調(diào)研了國內(nèi)外相關(guān)試驗方法的進(jìn)展以及ISO國際標(biāo)準(zhǔn)及其他國外有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)中關(guān)于此類試驗的情況。經(jīng)起草小組共同討論，確定了《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準(zhǔn)則第16部分：土壤微生物毒性試驗》修訂標(biāo)準(zhǔn)的框架結(jié)構(gòu)、評價指標(biāo)、試驗項目及其主要內(nèi)容等。并同時按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的要求編寫完成標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿和編制二、標(biāo)準(zhǔn)編制原則、主要內(nèi)容及其確定依據(jù)，修訂行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)時，還包括修訂前后技術(shù)內(nèi)容的對比；1.規(guī)范性原則一是格式的規(guī)范性，本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定進(jìn)行起草編寫；二是指內(nèi)容的規(guī)范性，標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的試驗方法，力求做到試驗條件的規(guī)范化。2.先進(jìn)性原則本標(biāo)準(zhǔn)所涉及的主要試驗方法從滿足實際需要出發(fā)，充分考慮與國際通用試驗準(zhǔn)則的接軌。注意吸收國內(nèi)外相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，國際農(nóng)藥環(huán)境安全性評價技術(shù)最新進(jìn)展。在符合我國最新《農(nóng)藥管理條例》《農(nóng)藥登記管理辦法》要求的前提下，為滿足我國《農(nóng)藥登記資料要求》的實際需要，積極地把先6進(jìn)技術(shù)、要求納入本標(biāo)準(zhǔn)，推動農(nóng)藥登記試驗更加科學(xué)規(guī)范，加快和國際要求接軌，提高我國農(nóng)藥登記產(chǎn)品的競爭力。3.適應(yīng)性原則本標(biāo)準(zhǔn)代替GB/T31270.16-2014《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準(zhǔn)則第16部分：土壤微生物毒性試驗》，近些年由于新《農(nóng)藥管理條例》《農(nóng)藥登記管理辦法》的頒布，相應(yīng)新發(fā)布的《農(nóng)藥登記資料要求》對環(huán)境資料要求也有新的變化。原有的試驗方法已無法完全滿足我國現(xiàn)有農(nóng)藥登記試驗的國情需求和農(nóng)藥登記管理的實際要求。本標(biāo)準(zhǔn)的提出符合法律法規(guī)的規(guī)定且與相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)協(xié)調(diào)。在確定標(biāo)準(zhǔn)的主要試驗方法和具體試驗操作要求時，綜合考慮了農(nóng)藥登記試驗單位的能力和我國農(nóng)藥登記的實際需求，適應(yīng)我國國情，有利標(biāo)準(zhǔn)的實施。1.范圍。給出了本標(biāo)準(zhǔn)的適用范圍。2.規(guī)范性引用文件。規(guī)定了試驗用水規(guī)格、試驗用土壤理化性質(zhì)檢測和微生物量測定以及試驗最低濃度設(shè)置等應(yīng)采用的方法標(biāo)準(zhǔn)。3.術(shù)語和定義。給出了氮轉(zhuǎn)化等本標(biāo)準(zhǔn)涉及的術(shù)語、定4.原理。簡單介紹了化學(xué)農(nóng)藥土壤微生物毒性氮轉(zhuǎn)化法試驗的基本原理。75.試驗條件。規(guī)定了試驗期間溫度、光照、土壤含水率等方面的要求。6.試劑或試劑。給出了開展化學(xué)農(nóng)藥土壤微生物毒性氮轉(zhuǎn)化法試驗所需的試劑，規(guī)定了供試土壤的選擇、采集、運輸、處理、保存、理化性質(zhì)測定等方面的要求。7.儀器設(shè)備。給出了開展化學(xué)農(nóng)藥土壤微生物毒性氮轉(zhuǎn)化法試驗所需的儀器。8.樣品。給出了被試物相關(guān)信息。9.試驗步驟。規(guī)定了土壤預(yù)培養(yǎng)、試驗設(shè)計、樣品的采集與分析的具體要求。10.試驗數(shù)據(jù)處理。規(guī)定了檢測結(jié)果的表示方式。11.質(zhì)量控制。規(guī)定了被試物染毒操作及對照組重復(fù)性等質(zhì)量控制要求。12.試驗報告。給出了試驗報告中至少應(yīng)包含的內(nèi)容。經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織（OECD）于2000年發(fā)布了化學(xué)品Microorganisms:NitrogenTransformationTest,OECDGuidelinesfortheTestingofChemicals.）。該文件是國際通行的研究農(nóng)藥對土壤微生物毒性（氮轉(zhuǎn)化法）的試驗準(zhǔn)則，大多數(shù)國家農(nóng)藥管理機(jī)構(gòu)接受按該準(zhǔn)則開展的農(nóng)藥對土壤微生物毒性試驗資料。OECD216經(jīng)過多年使用已較為完善，8本標(biāo)準(zhǔn)在OECD216基礎(chǔ)上制定，除文字性修改外，本標(biāo)準(zhǔn)與OECD216試驗方法的技術(shù)內(nèi)容基本一致。本文件代替GB/T31270.16-2014《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準(zhǔn)則第16部分：土壤微生物毒性試驗》，與GB/T31270.16-2014相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動外，主要技術(shù)變化如下：a)刪除了CO2吸收法的相關(guān)規(guī)定，刪除了“本部分不適用于易揮發(fā)和難溶解的化學(xué)農(nóng)藥”的規(guī)定（見2014年版的b)增加了“規(guī)范性引用文件”一章（見第2章c)刪除了化學(xué)農(nóng)藥、原藥、制劑、有效成分、供試物、d)增加了“試劑或材料”一章，列出了試驗所需的試劑，細(xì)化了供試土壤性質(zhì)、采樣和儲存要求（見第6章，2014年版的4.1.2e)增加了試驗容器相關(guān)要求（見7.2f)更改了土壤樣品培養(yǎng)方法，規(guī)定了揮發(fā)性被試物的適用方法（見9.2.2，2014年版的4.2.2.3g)細(xì)化了被試物制備方法，增加對揮發(fā)性被試物的制備要求（見9.2.3，2014年版的4.2.299.3.3，2014年版的4.2.2.4i)更改了數(shù)據(jù)處理方法，明確了統(tǒng)計學(xué)方法（見10.1，2014年版的4.3.2j)增加了試驗結(jié)果表達(dá)方法（見10.2k)刪除了“氮轉(zhuǎn)化法對土壤的要求”、“試驗土壤的采集與儲存”、“農(nóng)藥對土壤微生物毒性的毒性等級劃分”（見2014年版的附錄A、附錄B、附錄Cl)刪除了部分參考文獻(xiàn)（見2014年版的[1]、[2]、[4]）。三、試驗驗證的分析、綜述報告，技術(shù)經(jīng)濟(jì)論證，預(yù)期的經(jīng)濟(jì)效益、社會效益和生態(tài)效益；為驗證該方法在國內(nèi)實驗室的可行性和各實驗室間結(jié)果的可重復(fù)性，標(biāo)準(zhǔn)制定工作組組織開展了驗證試驗。由北京綠城堡農(nóng)業(yè)科技有限公司、浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全與營養(yǎng)研究所、沈陽化工研究院有限公司等三家試驗室開展了96%氯蟲苯甲酰胺原藥土壤微生物毒性驗證試驗。土壤微生物毒性驗證試驗結(jié)果匯總見表1。表1土壤微生物毒性驗證試驗結(jié)果匯總表室驗證試驗結(jié)果表明三家實驗室的試驗結(jié)果均一致，表明試驗方法在國內(nèi)實驗室的具有較好的可重復(fù)性。目前國際通行的研究農(nóng)藥對土壤微生物毒性（氮轉(zhuǎn)化法）的試驗準(zhǔn)則是經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織（OECD）于2000年發(fā)布了化學(xué)品土壤微生物毒性試驗準(zhǔn)則（Guideline216:SoilMicroorganisms:NitrogenTransformationTest,OECDGuidelinesfortheTestingofChemicals.大多數(shù)國家農(nóng)藥管理機(jī)構(gòu)接受按該準(zhǔn)則開展的農(nóng)藥對土壤微生物毒性試驗資料。本標(biāo)準(zhǔn)在OECD216基礎(chǔ)上制定，除文字性修改外，本標(biāo)準(zhǔn)與OECD216試驗方法的技術(shù)內(nèi)容基本一致，具有國際先進(jìn)水平。據(jù)估計，我國農(nóng)藥的有效利用率約為40%，其余部分多數(shù)進(jìn)入土壤。農(nóng)藥對土壤中的微生物、蚯蚓等土壤生物的影響以及易淋溶農(nóng)藥對地下水的影響引起人們的廣泛關(guān)注。其中，農(nóng)藥對土壤中微生物的毒性是評估農(nóng)藥對土壤環(huán)境安全性的重要部分，我國《農(nóng)藥登記資料要求》也規(guī)定化學(xué)農(nóng)藥申請農(nóng)藥登記時需要提交土壤微生物毒性試驗報告。本標(biāo)準(zhǔn)的制定實施有利于規(guī)范化學(xué)農(nóng)藥對土壤微生物毒性試驗，明確農(nóng)藥對土壤微生物毒性（氮轉(zhuǎn)化法試驗結(jié)果可用于農(nóng)藥對土壤生物（土壤微生物部分）的環(huán)境風(fēng)險評估，減少高風(fēng)險農(nóng)藥的登記使用，促進(jìn)農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展、保障生態(tài)環(huán)境安全。四、與國際、國外同類標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)內(nèi)容的對比情況，或者與測試的國外樣品、樣機(jī)的有關(guān)數(shù)據(jù)對比情況；本標(biāo)準(zhǔn)制定和起草過程中參考了國際通行的OECD試驗準(zhǔn)則，結(jié)合我國土壤實際情況，與歐美發(fā)達(dá)國家和國際組織現(xiàn)行的試驗準(zhǔn)則水平相當(dāng)。本標(biāo)準(zhǔn)沒有專用儀器設(shè)備和專用標(biāo)準(zhǔn)樣品，不存在國內(nèi)外樣機(jī)與樣品對比問題。五、以國際標(biāo)準(zhǔn)為基礎(chǔ)的起草情況，以及是否合規(guī)引用或者采用國際國外標(biāo)準(zhǔn)，并說明未采用國際標(biāo)準(zhǔn)的原因；主要參照經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織（OECD）《化學(xué)品測試216:SoilMicroorganisms:NitrogenTransformationTest,OECDGuidelinesfortheTestingofChemicals.）