綴合物水解衍生化

（四）綴合物的水解

為測定尿藥總量,需水解綴合物。綴合物：藥物或其代謝物與體內(nèi)的內(nèi)源性物質(zhì)結(jié)合生成的產(chǎn)物。內(nèi)源性物質(zhì)：葡萄糖醛酸、硫酸、甘氨酸、谷胱甘肽和醋酸等。尿中藥物多數(shù)呈綴合狀態(tài)。方法：0.1NHCl，100℃，30min

簡便,快速水解過程中發(fā)生藥物分解專一性較差條件：pH4.5~5.5,37℃葡萄糖醛酸苷酶或/和硫酸酯酶專屬性強(qiáng)時間較長可引入粘蛋白

溶劑萃取過程中綴合物(尤其硫酸酯)直接分解條件溫和由于綴合物較原型藥物具有較大的極性，不易被有機(jī)溶劑提取，常用酸水解或酶水解的方法。1.酸水解法2.酶水解法3.溶劑解法目前對于綴合物的分析，逐漸趨向于直接測定綴合物的含量（HPLC和RIA法）。例：血液和尿液中三唑侖的GC測定法酶水解：尿樣1ml加入pH4.8緩沖液50ul加β-葡萄糖醛酸苷酶0.1ml37℃水浴12h代謝物的萃?。杭觾?nèi)標(biāo)物（艾司唑侖）加pH10.8緩沖液調(diào)節(jié)尿樣pH=9加乙醚5ml，渦旋2min離心萃取取乙醚層，揮干后殘渣加甲醇0.1ml溶解進(jìn)樣GC（五）化學(xué)衍生化定義：在色譜過程中，用特殊的化學(xué)試劑借助化學(xué)反應(yīng)給樣品化合物接上某個特殊基團(tuán)，使其轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)衍生物之后進(jìn)行檢測的方法。包括紫外衍生化法、熒光衍生化法、電化學(xué)衍生化法和手性衍生化法。③含-NH2、-COOH、-OH官能團(tuán)的藥物常使色譜峰拖尾；①使極性藥物變成非極性的、易于揮發(fā)的藥物，使具有能被分離的性質(zhì)；②增加藥物的穩(wěn)定性；④為提高對光學(xué)異構(gòu)體的分離能力。GC中衍生化的目的：GC中的衍生化的主要反應(yīng)具有-OH–COOH–NH-的極性基團(tuán)藥物常用的硅烷化試劑：三甲基氯硅烷（TMCS）、雙-三甲基硅烷乙酰胺（BSA）等具有-OH–NH2–NH-的極性基團(tuán)藥物常用的?；噭阂宜狒⒈狒?；

采用不對稱試劑，使其生成非對映異構(gòu)體衍生物常用的不對稱試劑有：（S）-N-三氟乙酰脯氨酰氯、（S）-N-五氟乙酰脯氨酰氯等。硅烷化?；榛菍τ钞悩?gòu)體具有-OH–COOH–NH-的極性基團(tuán)藥物常用的烷基化試劑：碘庚烷、疊氮甲烷、氫氧化三甲基苯胺（TMAH）等；①提高對樣品的檢測靈敏度②改善樣品混合物的分離度③適合于進(jìn)一步作結(jié)構(gòu)鑒定，如質(zhì)譜、紅外、核磁共振HPLC中衍生化的目的：對衍生化反應(yīng)的要求：①能迅速、定量地進(jìn)行，且反應(yīng)條件溫和；②選擇性高，最好只與待測成分反應(yīng)，衍生化試劑和副產(chǎn)物不干擾樣品的分離和測定；③衍生化試劑方便易得，通用性好。從衍生化反應(yīng)發(fā)生的場合，可以分為：柱前衍生化：柱前衍生是在色譜分離前，預(yù)先將樣品制成適當(dāng)?shù)难苌?，然后進(jìn)樣分離檢測。優(yōu)點(diǎn)：衍生化條件不受色譜系統(tǒng)的限制缺點(diǎn)：操作繁瑣，準(zhǔn)確性低柱后衍生化：先用色譜