微生物室室內(nèi)質(zhì)量控制操作程序

微生物室室內(nèi)質(zhì)量控制操作程序1目的指導微生物室工作人員進行室內(nèi)質(zhì)量控制，規(guī)范所有檢測項目的室內(nèi)質(zhì)控操作程序，保證檢測結(jié)果準確可靠，決定常規(guī)報告能否正確發(fā)出。2適用范圍適用于微生物室所有檢測項目的室內(nèi)質(zhì)量控制。3職責3.1微生物室技術(shù)人員應(yīng)分別負責微生物室檢測標本前、中、后的各項室內(nèi)質(zhì)量控制工作，若有失控，應(yīng)進行相應(yīng)的分析和失控后處理，并及時填寫失控分析報告。同時，做好微生物室試劑、培養(yǎng)基、儀器、接種環(huán)和標準菌株等的質(zhì)控工作。3.2質(zhì)量監(jiān)督員負責對微生物室所有檢測項目的室內(nèi)質(zhì)控進行指導、監(jiān)督和分析，并定期匯總、回顧室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果，制訂和修改質(zhì)控計劃。3.3微生物室組長負責協(xié)調(diào)、監(jiān)督和檢查質(zhì)量監(jiān)督員的工作，定期召開組內(nèi)質(zhì)量控制會議，總結(jié)小組室內(nèi)質(zhì)控情況。4室內(nèi)質(zhì)控工作程序4.1培養(yǎng)基的質(zhì)控程序4.1.1配制培養(yǎng)基時，所用原料如各類培養(yǎng)基干粉應(yīng)在瓶身注明收到日期，開啟時應(yīng)注明開啟時間，且嚴格遵守廠家規(guī)定的貯存條件和有效使用期限。配制完后填寫《微生物室自制培養(yǎng)基（試劑）配制及質(zhì)控記錄表》。4.1.2商品化成品培養(yǎng)基要記錄購入日期、失效日期，且每批培養(yǎng)基均需由廠家提供質(zhì)量評估報告并存檔，培養(yǎng)基按照廠家說明書規(guī)定的條件貯存并在有效期內(nèi)使用。商品培養(yǎng)基應(yīng)用相應(yīng)的質(zhì)控辦法和相應(yīng)菌株進行質(zhì)量監(jiān)測并填寫《商品化培養(yǎng)基質(zhì)控結(jié)果記錄》。4.1.3質(zhì)控頻率：每次配制培養(yǎng)基后；每批次或每貨次培養(yǎng)基使用前。4.1.4質(zhì)控方法：4.1.4.1培養(yǎng)基外觀檢查：要求培養(yǎng)基外觀良好，光滑、水分適宜，無污染，有適當?shù)念伾秃穸?、試管培養(yǎng)基濕度適宜。4.1.4.2無菌試驗：每批隨機抽樣5%，35℃培養(yǎng)24小時，抽樣中每個培養(yǎng)基出現(xiàn)2個以上菌落，視為本批培養(yǎng)基不合格；無菌生長視為合格。4.1.4.3合格試驗：包括生長試驗和生長抑制試驗。用標準菌株或經(jīng)準確鑒定的臨床分離株，檢測培養(yǎng)基的生長情況或生長抑制情況。鑒定培養(yǎng)基隨機取兩個，用相應(yīng)陰性和陽性反應(yīng)（標準菌株或質(zhì)控菌株或已知菌株）菌株做質(zhì)控，合格后，記錄結(jié)果。常用培養(yǎng)基的生長合格試驗見表1培養(yǎng)基MH平板BMH平板MH+++－++－－++－+++++++++24h生長明色24h生長HTM平板OF基+藥敏試驗在控層黃色/下層黃色/有氣泡玫瑰紅，黑色不定/下層玫瑰紅色淀4.2常用試劑質(zhì)控程序.1常用試劑包括.2試劑來源b觸酶試劑：30%雙氧水1ml加9ml蒸餾水混勻，4℃保存4.2.3質(zhì)控頻率及方法4.2.3.1氧化酶、觸酶、凝固酶試劑每日用陽性、陰性質(zhì)控菌株進行質(zhì)控，并記錄結(jié)果。4.2.3.2革蘭氏染液、抗酸染液使用中每周用陽性、陰性質(zhì)控菌株進行質(zhì)控，并記錄結(jié)果，每批號、每貨次時應(yīng)補做質(zhì)控進行性能驗證。4.2.3.3β－內(nèi)酰胺酶紙片使用時用陽性、陰性質(zhì)控菌株進行質(zhì)控，并記錄結(jié)果。每批號、每貨次時應(yīng)補做質(zhì)控進行性能驗證。4.2.3.4桿菌肽、奧普托辛、X、V、X+V因子紙片使用時用陽性、陰性質(zhì)控菌株進行質(zhì)控，并記錄結(jié)果，每批號、每貨次時應(yīng)補做質(zhì)控進行性能驗證。4.2.4常用試劑質(zhì)控菌及結(jié)果：見表2金黃色葡萄球菌(陽性對照)鏈球菌屬(陰性對照)金黃色葡萄球菌(陽性對照)表皮葡萄球菌(陰性對照)銅綠假單胞菌(陽性對照)大腸埃希菌(陰性對照)金黃色葡萄球菌(陽性對照)糞腸球菌(陰性對照)金黃色葡萄球菌(陽性對照)大腸埃希菌(陰性對照)快生長分枝桿菌(陽性對照)大腸埃希菌(陰性對照)A群鏈球菌(敏感菌)草綠色鏈球菌(耐藥菌)否則為耐藥Optochin肺炎鏈球菌(敏感菌)草綠色鏈球菌(耐藥菌)mm耐藥:抑菌環(huán)<=14mm4.3常用診斷血清質(zhì)控程序4.3.1常用診斷血清包括沙門菌診斷血清、志賀菌診斷血清、致病性大腸埃希菌診斷血清、O157：H7大腸埃希菌。4.3.2質(zhì)控頻率及方法使用中每月用已知陽性參考菌株（標準菌株或質(zhì)控菌株或已知菌株）進行檢測，用生理鹽水做陰性對照并記錄；對失效或不合格者予以更換，每批號、每貨次時應(yīng)補做質(zhì)控進行性能驗證。4.4藥敏紙片（K-B法）的質(zhì)控程序4.4.1質(zhì)控菌株ATCC25922大腸埃希菌、ATCC25923金黃色葡萄球菌、ATCC27853銅綠假單胞菌。4.4.2質(zhì)控頻率每周1次；更換新批號或新貨次藥物或培養(yǎng)基時補做質(zhì)控進行性能驗證。4.4.3質(zhì)控方法：4.4.3.1方法及測定的抗生素種類均與每天常規(guī)測定相同。4.4.3.2之前未開展的新藥藥敏紙片進入實驗室后，應(yīng)常規(guī)以標準菌株連續(xù)檢測20～30天，每一組藥物/微生物超出參考范圍（抑菌圈直徑或MIC）的頻率需小于1/20或3/30。合格后方可用于常規(guī)藥敏試驗。此后，檢測頻率可同其他藥敏紙片一樣，改為每周一次。4.4.3.3一旦發(fā)現(xiàn)失控，應(yīng)從培養(yǎng)基，紙片，接種菌液等多方面查找原因，及時糾正并做好記錄。4.4.4注意事項：4.4.4.1備用紙片應(yīng)儲存在-20℃冰箱。4.4.4.2工作用紙片儲放在4℃冰箱中，可冷藏至少一周。某些不穩(wěn)定的藥物紙片（亞安培南、克維酸復合藥等）應(yīng)冷凍保存，用時再取出解凍恢復至室溫。4.4.4.3M-H瓊脂應(yīng)使用商用脫水培養(yǎng)基基礎(chǔ)并按照制造廠家的說明制備，平板厚度約4mm。每批平板應(yīng)抽樣，在30～35℃孵育24小時檢測其無菌性。若當天不使用，應(yīng)儲放在2～8℃冰箱中。4.4.4.4培養(yǎng)基的酸堿度以PH7.2-7.4最適宜。4.4.4.5瓊脂平板表面應(yīng)保持一定的濕度，但平皿接種后，培養(yǎng)基表面或培養(yǎng)皿蓋上均不應(yīng)出現(xiàn)水滴。4.4.4.6校正接種菌液濃度與標準比濁管相同，即達0.5號麥氏管濃度。4.4.4.7制備好的接種液必須在15分鐘內(nèi)使用。用滅菌的棉拭子蘸取菌液，在管壁上旋轉(zhuǎn)擠壓，去掉多余菌液，用拭子涂布整個培養(yǎng)基表面（三個方向，每次將平板旋轉(zhuǎn)60度，最后沿平皿周邊繞兩圈，保證均勻）。4.4.4.8半開平板的蓋子，約3-5分鐘（不可超過15分鐘），用鑷子取紙片一張，貼在瓊脂平板表面，用鑷尖壓一下，使其貼平，每張紙片間距不少于24mm，紙片中心距平皿邊緣不少于15mm。4.4.4.9孵育16～18小時后，用反射光照明，測量完全抑制的區(qū)域的直徑整毫米數(shù)。如果被測菌是葡萄球菌或腸球菌，則應(yīng)孵育24小時，再在透射光下觀察苯唑西林或萬古霉素的透明抑菌圈內(nèi)有無耐甲氧西林或耐萬古霉素菌落的微弱生長。抑菌圈內(nèi)任何的可見生長，都表示甲氧西林或萬古霉素耐藥。4.4.4.10抑菌圈大小解釋可參閱CLSI紙片法執(zhí)行標準。4.5E-test法藥敏試驗的質(zhì)控程序4.5.1質(zhì)控菌株金黃色葡萄球菌ATCC29213，對青霉素（P）、萬古霉素（VA）E-test試紙條進行質(zhì)控監(jiān)測。4.5.2質(zhì)控頻率每周1次；更換新批號或新貨次藥物或培養(yǎng)基時補做質(zhì)控。4.5.3藥敏試驗的培養(yǎng)基9cm5％脫纖維羊血MH瓊脂平板。4.5.4質(zhì)控方法4.5.4.1按E-test法藥敏試驗SOP方法操作。4.5.4.2質(zhì)控結(jié)果的判讀，結(jié)果判讀方法及注意事項參照CLSI標準。如藥敏結(jié)果有超出允許范圍的抗生素則此藥敏試驗質(zhì)控失控，應(yīng)對失控情況應(yīng)加以分析、校正。4.6血培養(yǎng)儀的質(zhì)控程序4.6.1質(zhì)控頻率：每一批號或每一貨次培養(yǎng)瓶需進行陰性瓶和陽性瓶試驗。由于血培養(yǎng)瓶每月訂購一批，因此質(zhì)控頻率為每月一次。4.6.2質(zhì)控菌：根據(jù)廠家推薦，ATCC25923金黃色葡萄球菌、ATCC25922大腸埃希菌均可用于需氧瓶、厭氧瓶及兒童瓶的質(zhì)控。4.6.3質(zhì)控方法：陽性質(zhì)控是用1ml0.5麥氏單位的大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌的標準菌株分別接種于培養(yǎng)瓶，并將其與未接種標本的培養(yǎng)瓶同時放入儀器內(nèi)進行檢測。陽性瓶在72小時內(nèi)報陽性，未接種瓶則應(yīng)始終為陰性。此結(jié)果表明培養(yǎng)瓶的保存和運輸符合要求。它表明所收到的培養(yǎng)瓶并沒有受到倉儲或運輸中不利因素的影響。若報陽時間超過72小時或陽性瓶無生長或空白瓶出現(xiàn)生長均視為失控。應(yīng)及時聯(lián)系參加進行處理。4.7Phoenix-100全自動細菌分析儀質(zhì)控程序4.7.1質(zhì)控菌株ATCC25922大腸埃希菌、ATCC27853銅綠假單胞菌、ATCC25923金黃色葡萄球菌、ATCC29213金黃色葡萄球菌、ATCC49619肺炎鏈球菌。4.7.2質(zhì)控頻率每批次或每貨次測試板條在使用前應(yīng)進行質(zhì)控，并記錄，一起故障維修后因補做質(zhì)控加以驗證。4.7.3質(zhì)控方法4.7.3.1測試前將質(zhì)控菌株在瓊脂板上移種獲得單個菌落。4.7.3.2用IDbroth配置菌懸液，以0.5-0.6McFarland為佳。4.7.3.3在ASTbroth中垂直滴加50μlASTindicatorsolution。4.7.3.4從IDbroth中轉(zhuǎn)移25μl菌懸液至ASTbroth，顛倒混勻，請勿震蕩。4.7.3.5將IDbroth和ASTbroth分別傾倒入鑒定/藥敏板。4.7.3.6用密封條將鑒定/藥敏板封好。4.7.3.7檢查每一個反應(yīng)孔是否充滿菌液以及是否具有氣泡.4.7.3.8信息輸入a按鍵，然后在輸入界面按鍵b進入QC輸入界面，分別輸入或掃描Sequence#（樣本號）、Accession#（序列號）。c輸入Isolate#,儀器默認值為”1”。d按鍵，選擇ID和/或AST。e選擇質(zhì)控標準菌株（ATCC）的名稱。f分別輸入TechID（操作員代碼）、PanelLot#（檢測板批號）、PanelExp（檢測板失效日期）、IDBrothLot#（鑒定肉湯批號）、IDBrothExp（鑒定肉湯失效日期）、ASTBrothLot#（藥敏肉湯批號）、ASTBrothExp（藥敏肉湯失效日期）、ASTIndicatorLot#（藥敏指示劑批號）和ASTIndicatorExp（藥敏指示劑失效日期）。g按鍵存盤。h將QC板放入儀器檢測。4.7.3.9儀器結(jié)果顯示“PASS”表示質(zhì)控通過。如出現(xiàn)失控，應(yīng)及時聯(lián)系廠家處理。4.8標準菌株的保存及轉(zhuǎn)種質(zhì)控程序4.8.1質(zhì)控頻率金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸埃希菌ATCC25922、銅綠假單胞菌ATCC27853、金黃色葡萄球菌ATCC29213、肺炎鏈球菌ATCC49619每三個月轉(zhuǎn)種一次并鑒定，記錄結(jié)果。每支菌株轉(zhuǎn)種不能超過6次。4.8.2菌株保存方法采用含珠菌管留取菌種，-70℃保存。使用中的菌株用4℃培養(yǎng)基保存法保存。具體操作見《微生物室菌種管理程序》。4.9高壓滅菌器的質(zhì)控程序4.9.1質(zhì)控頻率及方法4.9.1.1每次高壓時每個滅菌包外貼化學指示膠帶、內(nèi)置化學指示卡來監(jiān)測滅菌效果，做好記錄并存檔。4.9.1.2每周一次用生物指示劑（嗜熱脂肪芽孢桿菌）監(jiān)測滅菌效果，做好記錄并存檔。4.10紫外燈性能監(jiān)測。4.10.1測試頻率：每月月末用紫外線強度測試條測試。4.10.2方法：測試前先開紫外燈5min，將專用紫外強度測試條圖案面向上置于紫外燈垂直距離1m處照射1min，及時觀察測試條的顏色變化，與標準條相比，如強度>70，則為合格，否則需更換燈管，并將相關(guān)更換資料保存作為原始數(shù)據(jù)。4.11厭氧培養(yǎng)環(huán)境監(jiān)測4.11.1質(zhì)控物：厭氧指示卡。4.11.2質(zhì)控頻率：每次進行厭氧培養(yǎng)時，在厭氧袋中放入?yún)捬踔甘究ǎ^察卡片顏色變化，確保達到厭氧條件。做好記錄并存檔。4.12超凈工作臺無菌試驗4.12.1質(zhì)控頻率及方法：每月進行一次超凈工作臺空氣培養(yǎng)，方法：將直徑9cm的普通瓊脂平板置于超凈臺內(nèi)暴露5分鐘后，35℃～37℃培養(yǎng)48小時，記錄平板菌落數(shù)，合格為無細菌生長。如出現(xiàn)細菌生長，應(yīng)進行紫外殺菌后方能使用。4.13恒溫箱、冰箱質(zhì)控程序4.13.1質(zhì)控頻率及方法每日上午和下午兩次記錄恒溫箱和冰箱溫度，溫度超出范圍時隨時校正。4.14RapID鑒定試劑質(zhì)控見《RapIDNH試驗操作及質(zhì)控程序》、《RapIDYeast試驗操作及質(zhì)控程序》、《RapIDANAIISystem試驗操作及質(zhì)控程序》。填寫相應(yīng)質(zhì)控記錄表。5失控結(jié)果的處理5.1尋找失控原因應(yīng)定期檢查常用試劑、診斷血清是否失效或過期；檢查各種儀器（包括孵箱、冰箱）狀態(tài)。K-B法紙片及E-test試條的原因包括藥敏紙片或試條藥物的效價降低、貼放不規(guī)范、過期；質(zhì)控菌株的原因包括菌齡老化、質(zhì)控菌污染；技術(shù)操作的原因包括錯誤的判讀時間和方法、菌液的調(diào)配有誤差、培養(yǎng)基不符合要求、孵育條件不正確等。5.2失控處理5.2.1培養(yǎng)基5.2.1.1當無菌試驗不合格或外觀（如硬度）不合格時，應(yīng)將全批培養(yǎng)基丟棄重配，若為商品化成品培養(yǎng)基，因?qū)⑵渫嘶?，囑廠家重新送貨，再進行驗證，合格后方能使用。5.2.1.2如性能檢測不合格，則重復試驗，查找失控原因，確定為培養(yǎng)基生長性能不合格，則應(yīng)全批培養(yǎng)基丟棄重配，若為商品化成品培養(yǎng)基，因?qū)⑵渫嘶?，囑廠家重新送貨，再進行驗證，合格后方能使用。5.2.2診斷試劑如質(zhì)控結(jié)果超出預(yù)期