實(shí)驗(yàn)八 中性粒細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)八中性粒細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)實(shí)驗(yàn)七思考題：為何常用密度為1.077土0.002的分層液分離人單個(gè)核細(xì)胞？答：這和人外周血中各類成分密度有關(guān)。血小板：1.030-1.035，淋巴細(xì)胞：1.075-1.090，粒細(xì)胞:1.092，紅細(xì)胞：1.093，因此將血液疊加在1.077土0.002的分層液上面，經(jīng)離心會(huì)單個(gè)核細(xì)胞會(huì)處于血漿和分離液中間，從而達(dá)到分離目的。實(shí)驗(yàn)八中性粒細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)臨床微生物及免疫學(xué)檢驗(yàn)教研室一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆罩行粤＜?xì)胞吞噬功能試驗(yàn)的原理。熟悉中性粒細(xì)胞吞噬功能試驗(yàn)的操作方法。二、實(shí)驗(yàn)原理中性粒細(xì)胞具有吞噬細(xì)菌和異物顆粒的能力。在體外將中性粒細(xì)胞與細(xì)菌或異物顆粒共同孵育后，即可被中性粒細(xì)胞吞噬、攝入，顯微鏡觀察可見中性粒細(xì)胞內(nèi)有細(xì)菌或異物顆粒。二、實(shí)驗(yàn)原理計(jì)算吞噬有細(xì)菌或異物顆粒的中性粒細(xì)胞數(shù)占中性粒細(xì)胞總數(shù)的百分率和每個(gè)中性粒細(xì)胞平均吞噬細(xì)菌或異物顆粒數(shù)，可反應(yīng)中性粒細(xì)胞的吞噬功能。三、實(shí)驗(yàn)器材標(biāo)本：人抗凝血被吞噬物：金黃色葡萄球菌培養(yǎng)基：肉湯培養(yǎng)基試劑：瑞－吉氏染液、無(wú)菌生理鹽水器材：枸櫞酸鈉抗凝管、試管、載玻片、

恒溫箱、顯微鏡等。制備被吞噬物：金葡菌接種于肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)12h后，置4℃?zhèn)溆谩?.準(zhǔn)備被檢測(cè)標(biāo)本：枸櫞酸鈉抗凝血1ml。四、實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟混合培養(yǎng)：在1ml抗凝血中加入金葡菌懸液3-5滴，混勻，置37℃水浴箱中，孵育30min，期間每10min搖勻1次。制備細(xì)胞推片，瑞-吉染色：油鏡觀察：計(jì)數(shù)200個(gè)中性粒細(xì)胞，記錄吞噬細(xì)菌的細(xì)胞數(shù)和每個(gè)中性粒細(xì)胞吞入的細(xì)菌數(shù)。五、結(jié)果判斷中性粒細(xì)胞核深染且分葉，胞漿淡紅色，細(xì)菌呈紫色-吞噬百分率（%）=×100％吞噬指數(shù)=參考區(qū)間：吞噬率（91

+

5.8）%；吞噬指數(shù)大于1計(jì)數(shù)的中性粒細(xì)胞吞噬細(xì)菌總數(shù)計(jì)數(shù)的中性粒細(xì)胞總數(shù)吞噬細(xì)菌的中性粒細(xì)胞數(shù)計(jì)數(shù)的中性粒細(xì)胞總數(shù)

-六、注意事項(xiàng)1.抗凝劑的選擇：肝素抗凝時(shí)白細(xì)胞著色不佳，經(jīng)瑞-吉染色后易出現(xiàn)深藍(lán)色背景；EDTA影響

白細(xì)胞的吞噬功能；構(gòu)椽酸鈉抗凝最合適。2.細(xì)菌的濃度和孵育溫度：3.血涂片的質(zhì)量：七、應(yīng)用與評(píng)價(jià)本試驗(yàn)可用于檢測(cè)有吞噬功能障礙的病癥，如結(jié)合NBT（硝基藍(lán)四氮唑還原試驗(yàn)），在一定程度上可反映機(jī)體的免疫功能狀態(tài)，也可用于有免疫調(diào)節(jié)活性藥物的篩選。此法操作簡(jiǎn)便，不需特殊設(shè)備