實驗動物生物樣本質量控制規(guī)范

2實驗動物生物樣本質量控制規(guī)范GB/T39767-2021《人類生物GB/T37864-2019《生物樣本庫質量和能從病理形態(tài)、分子水平和特定指標等方面對4.1樣本質量控制應符合GB/T334.2樣本及相關數(shù)據(jù)的質量控制應符合預期用途，并依據(jù)該預期用途確定質量控制的最低關鍵性能指5.1方法的確認應依據(jù)GB/T37864-2019中7.9的要求，使用經(jīng)過確認和/或驗證的方法來完成樣本及相關數(shù)據(jù)的質5.2相關影響因素在進行方法確認和/或驗證時，應考慮人員、環(huán)境、生物樣本的前處理過程、獲取、保存、銷毀、運輸?shù)炔僮鲬螱B/T37864-2019的要求。應建立6.2.1應定期隨機抽檢，系統(tǒng)性評價樣本生命周期中的6.2.2.3應記錄抽樣質檢程序的改動，并體現(xiàn)在質檢報6.2.2.5如抽樣導致樣本耗盡時，抽樣質控可6.3.1.1組織樣本質量評估是指從組織學形態(tài)、分子水平和特定指標等方面對樣本進行評價，并判斷6.3.1.3分子水平評價是通過檢測樣本的核酸（濃度、純度、完整性）、蛋白質（46.3.5其他樣本質量評估，如糞便、唾液、乳汁、陰道內液、羊水等，應依據(jù)各自預期用途，建5A.1DNA樣本的濃度測定A.1.1分光光度法A.1.2熒光染料檢測法一般用標準品溶液的濃度(ng/mL)對應的熒光強度作回歸曲線,將樣本溶液的絕對定量分析：起始濃度(Log)與Ct值呈線性關系,通過已相對定量分析(2-ΔΔCt法):即通過計算測試樣本目的基因相對于對照樣本采用微滴發(fā)生器將含有核酸分子反應體系形成成千上萬納升級的微滴,其中每個微滴或A.2.1分光光度法A.2.2瓊脂糖凝膠電泳法若電泳條帶最前面如果有較小的條帶,說明存在RNA污染,應在提取過程中加入適當濃度的RNA酶進A.3.1凝膠電泳法6A.3.2毛細管凝膠電泳法毛細管凝膠電泳分析方法可提供DNA片段峰分布分析如下:A.4RNA樣本的濃度測定A.4.1分光光度法A.4.2熒光染料檢測法一般用標準品溶液的濃度(ng/mL)對應的熒光強度作直線回歸,將樣本溶液的程,計算出樣本的核酸含量。對于微量和低濃度樣本,宜采用熒光染料檢測法,此方法受其A.5RNA樣本的純度測定A.5.1分光光度法A.5.2瓊脂糖凝膠電泳法電泳后點樣孔較亮甚至點樣孔與目標帶之間有明顯拖尾現(xiàn)象在4kb-5kb甚至更高分子量處出現(xiàn)條帶,說明有明顯A.6RNA樣本的完整性測定A.6.1凝膠電泳法顯示28S(2kb左右):18S(1kb左自動化凝膠電泳可以提供RNA完整值參數(shù),用于評價從高度完整的RNA(RIN值為10)到嚴重降解的RNA(RINA.6.2毛細管凝集電泳法依據(jù)RIS值可對RNA的完整性進行評分，RIS值越高,代表RNA的7B.1蛋白質樣本的濃度測定B.1.1蛋白凱氏定氮法B.1.2雙縮脲法本方法應用于微量蛋白質含量的測定。蛋白質在堿性溶液中可形成銅-蛋白質的復合物，此考馬斯亮藍顯色法基于蛋白質與考馬斯亮藍染料結合的原理，通過測定染料與蛋白質結B.1.5二辛可寧酸法(又名BCA法)B.1.6紫外分光度檢測法B.2蛋白質樣本的完整性測定B.2.1SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法聚丙稀酰胺凝膠電泳時,不同的蛋白質按照其分子量大小進行分布,電泳遷移率僅取決于量。由于不連續(xù)的PH梯度作用樣品被壓縮成一條狹窄區(qū)帶,采用染觀察結果。通過該方法測定蛋