洗滌用纖維素酶制劑編制說明（送審稿）

行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《洗滌用纖維素酶》編制說明一、任務(wù)來源1、任務(wù)來源本項目為xxx，項目編號xxx。主要起草單位：xxx，項目實施周期xxx個月。2、主要工作過程起草階段：征求意見階段：3、主要參加單位和工作組成員二、標(biāo)準(zhǔn)編制原則和主要內(nèi)容1、標(biāo)準(zhǔn)編制原則本標(biāo)準(zhǔn)的修訂符合產(chǎn)業(yè)發(fā)展的原則，本著先進(jìn)性、科學(xué)性、合理性、可操作性等原則以及標(biāo)準(zhǔn)的目標(biāo)、統(tǒng)一性、協(xié)調(diào)性、適用性、一致性和規(guī)范性原則來進(jìn)行本標(biāo)準(zhǔn)的修訂工作。本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的要求進(jìn)行編寫。方法建立過程中盡量采用目前酶制劑生產(chǎn)廠商以及洗滌劑生產(chǎn)廠商檢測實驗室普遍采用的分析技術(shù)及儀器，選擇準(zhǔn)確、可行、便于操作的分析條件，保證檢測方法的可操作性和可重復(fù)性。該標(biāo)準(zhǔn)制定過程中主要參考了以下標(biāo)準(zhǔn)或文件：GB/T191包裝儲運圖示標(biāo)志GB/T4789.2食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)測定GB/T4789.3食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗大腸菌群計數(shù)GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T603化學(xué)試劑試驗方法中所用制劑及制品的制備（GB/T603-2002，ISO6353-1：1982，NEQ）GB15258化學(xué)品安全標(biāo)簽編寫規(guī)定GB/T9721-2006

化學(xué)試劑分子吸收分光光度法通則

(紫外和可見光部分)GB/T42239.1-2022洗滌用酶制劑第1部分：堿性蛋白酶2、標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容纖維素酶目前已在洗滌劑中廣泛使用，纖維素酶它能將棉纖維上的蠟質(zhì)剝離下來，同時纖維素酶能擴大織物纖維中的空穴，使內(nèi)嵌在纖維內(nèi)部的頑固污漬得到更好的去除。目前，立白、納愛斯等國內(nèi)外知名洗滌劑生產(chǎn)商都有纖維素酶的應(yīng)用。本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了洗滌劑用纖維素酶的術(shù)語和定義、產(chǎn)品分類、技術(shù)要求、試驗方法、檢驗規(guī)則以及標(biāo)志、包裝、運輸、貯存和保質(zhì)期。本標(biāo)準(zhǔn)適用于經(jīng)微生物發(fā)酵、提純等工藝制得的適用于洗滌劑工業(yè)的纖維素酶。2.1、產(chǎn)品分類本標(biāo)準(zhǔn)按照纖維素酶的形態(tài)分為兩類：液體劑型酶制劑和固體劑型酶制劑。2.2、要求2.2.1、感官要求本標(biāo)準(zhǔn)從色澤、氣味、狀態(tài)等方面對感官要求進(jìn)行了規(guī)定。發(fā)酵產(chǎn)品由于生產(chǎn)過程比較復(fù)雜，每一批產(chǎn)品的顏色會有區(qū)別，但是產(chǎn)品顏色的深淺與酶活力的高低沒有任何關(guān)系，所以在標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定了顏色是一個過渡色；同時產(chǎn)品會有一些特殊的“發(fā)酵”氣味，經(jīng)常會有客戶詢問廠家氣味的問題，所以在標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定了產(chǎn)品可能有發(fā)酵氣味。同時根據(jù)洗滌劑產(chǎn)品行業(yè)的特點，固體產(chǎn)品可以根據(jù)客戶的要求，制成多種顏色。2.2.2、理化要求酶活力是產(chǎn)品的一個重要的理化指標(biāo)，但同時酶活力也是一個商業(yè)指標(biāo)，廠家可以根據(jù)客戶的要求，生產(chǎn)出各種酶活力的產(chǎn)品。所以在標(biāo)準(zhǔn)中沒有規(guī)定酶活力具體的數(shù)值。建議這個數(shù)值在合同中規(guī)定。對于固體產(chǎn)品，規(guī)定了產(chǎn)品最小顆粒度指標(biāo)。參照GB/T42239.1-2022洗滌用酶制劑第1部分：堿性蛋白酶，數(shù)值定為粒度<150μm≤0.5%。2.3、試驗方法本標(biāo)準(zhǔn)包括了纖維素酶酶活力，水分，粒度的檢測方法。與現(xiàn)有的纖維素酶活力檢測方法QB2583-2003《纖維素酶制劑》有較大差別，在對纖維素酶活力檢測方法不斷完善的過程中形成了新版本；對于顆粒產(chǎn)品，水分含量即干燥失重參照GB/T42239.1-2022洗滌用酶制劑第1部分：堿性蛋白酶6.5干燥失重。粒度檢測參照GB/T42239.1-2022洗滌用酶制劑第1部分：堿性蛋白酶附錄3粒度的測定篩分法進(jìn)行。2.4、檢驗規(guī)則檢驗規(guī)則包括批次的確定、取樣規(guī)則、型式檢驗、出廠檢驗、判定規(guī)則等內(nèi)容，對其都做了具體說明。2.5、標(biāo)志、包裝、運輸、貯存和保質(zhì)期產(chǎn)品的外包裝宜使用符合GB/T191要求的標(biāo)志。關(guān)于產(chǎn)品標(biāo)簽，規(guī)定了一些通用要求：如產(chǎn)品名稱、凈含量、生產(chǎn)者和（或）經(jīng)銷者的名稱、地址和聯(lián)系方式、生產(chǎn)日期和保質(zhì)期、貯存條件、批號及其他需要標(biāo)示的內(nèi)容。同時化學(xué)品應(yīng)該有安全標(biāo)簽，建議安全標(biāo)簽的內(nèi)容應(yīng)該符合GB15258《化學(xué)品安全標(biāo)簽編寫規(guī)定》的要求。產(chǎn)品保質(zhì)期由廠家根據(jù)穩(wěn)定性數(shù)據(jù)決定。三、主要試驗（或驗證）情況1、酶活力檢測方法1.1、方法介紹該標(biāo)準(zhǔn)在纖維素酶檢測方法多年運用的經(jīng)驗和不斷完善的過程中提出?？疾炝瞬煌瑥S家底物羧甲基纖維素鈉和DNS試劑對試驗的影響，不同試驗步驟對試驗結(jié)果的影響。本方法重點提出的地方：——對纖維素酶活力定義——羧甲基纖維素鈉溶液的配制——DNS試劑的配制——葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液及標(biāo)曲的繪制——待測酶液吸光度范圍——操作程序——活力計算1.2、主要指標(biāo)（1）不同廠家底物羧甲基纖維素鈉CMC和DNS對試驗的影響CMC：光復(fù)（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）的試劑溶解后有少量雜質(zhì)，沒有沉淀。sigma-C5678的試劑溶解后無雜質(zhì)和沉淀。恒興（天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司）的試劑溶解后無雜質(zhì)和沉淀。河北業(yè)之源化工有限公司的試劑溶解后無雜質(zhì)和沉淀。結(jié)果差別較大，因此在提供酶活力數(shù)據(jù)時要注明廠家。原因是羧甲基纖維素鈉在中性或堿性時，溶液呈高粘度液，實驗中易造成誤差，且粘度不同所測活力不同。表1同一個樣品不同底物對比底物活性(u/g)活性平均值(u/g)新配光復(fù)10mg/mLCMC281828222826新配sigma-C567810mg/mLCMC830784188528新配國藥10mg/mLCMC599161606328新配恒興10mg/mLCMC205720241990新配河北10mg/mLCMC312430713017DNS：不同廠家的DNS試劑對纖維素酶活力的測試影響不大。表2同一個樣品同一底物不同DNS試劑對比DNS標(biāo)曲活性(u/g)活性平均值(u/g)光復(fù)y=0.0026x-0.0628281828222826國藥y=0.0024x-0.0965267227062739（2）不同試驗步驟對試驗的影響對于檢測步驟，在與各單位的交流中發(fā)現(xiàn)爭議較大的是對于空白樣的處理，經(jīng)過系列試驗證明，采用方法一無論怎么稀釋，樣品吸光度都達(dá)不到檢測要求，而采用我們的方法測試穩(wěn)定性較好。表3同一樣品同一底物同一DNS不同測試方法方法一方法二稀釋倍數(shù)吸光度酶活力稀釋倍數(shù)吸光度酶活力稀釋250倍0.1793216稀釋130倍0.2452096稀釋200倍0.1822602稀釋120倍0.2962237稀釋125倍0.1931694稀釋110倍0.3142148稀釋100倍0.2261519稀釋100倍0.3372067注：方法一空白樣先加酶液再煮沸顯色，方法二為我們的檢測方法（3）吸光度在0.29-0.33區(qū)間時纖維素酶酶活力數(shù)值更穩(wěn)定。表4吸光度區(qū)間測定樣品1樣品2樣品3稀釋倍數(shù)吸光度酶活力稀釋倍數(shù)吸光度酶活力稀釋倍數(shù)吸光度酶活力稀釋180倍0.1922433稀釋250倍0.2454637稀釋450倍0.2397127稀釋150倍0.2652568稀釋220倍0.2984125稀釋420倍0.2907709稀釋120倍0.2962238稀釋210倍0.3224187稀釋410倍0.3137991稀釋110倍0.3142149稀釋170倍0.3583691稀釋400倍0.3298112稀釋100倍0.3372068稀釋160倍0.3543443稀釋350倍0.36974441.3、方法精密度根據(jù)統(tǒng)計學(xué)計算，方法精密度小于6.0%（實驗數(shù)據(jù)見表4不同實驗室驗證結(jié)果）1.4、方法學(xué)驗證本方法經(jīng)方法學(xué)研究，驗證如下：——不同廠家底物對試驗影響顯著——不同DNS試劑無顯著影響。——測試步驟對結(jié)果影響顯著。1.5、不同實驗室驗證結(jié)果實驗介紹實驗數(shù)據(jù)收集主要在山西勇寧記科技有限公司與山西大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院兩個實驗室進(jìn)行，根據(jù)實驗指導(dǎo)，各實驗室數(shù)據(jù)收集已經(jīng)完成，經(jīng)分析報告以下部分會展示不同實驗室之間和不同樣品之間的對比情況。表4樣品活性均值表樣品活性（U/g）勇寧記山西大學(xué)樣品132573203樣品225342608樣品331203082樣品412491233樣品528353007樣品662776069樣品781348094四、標(biāo)準(zhǔn)中如果涉及專利，應(yīng)有明確的知識產(chǎn)權(quán)說明未涉及專利等知識產(chǎn)權(quán)問題。五、產(chǎn)業(yè)化情況、推廣應(yīng)用論證和預(yù)期達(dá)到的經(jīng)濟(jì)效果等情況洗滌行業(yè)是酶制劑最重要應(yīng)用領(lǐng)域之一，在全球范圍內(nèi)，每年所生產(chǎn)的酶制劑中，有三分之一被應(yīng)用于洗滌行業(yè)。在發(fā)達(dá)國家，洗滌用品加酶已逐漸成為新產(chǎn)品開發(fā)的標(biāo)準(zhǔn)配置。從最新發(fā)布的中國洗滌用品行業(yè)發(fā)展十三五規(guī)劃中可以看出，目前我國洗衣粉加酶比例已高達(dá)80%。行業(yè)協(xié)會也在積極引導(dǎo)國內(nèi)洗滌用品往液體化、濃縮化、綠色化的方向創(chuàng)新發(fā)展。但是缺乏統(tǒng)一的洗滌用酶制劑標(biāo)準(zhǔn)，使得傳統(tǒng)的加酶洗衣粉和新興的加酶洗滌劑都缺乏權(quán)威的檢測方法和監(jiān)管依據(jù)，很容易被不良企業(yè)拿來作為概念炒作并用劣質(zhì)產(chǎn)品低價競爭，從而破壞新興產(chǎn)品市場，打擊消費者信任度，壓抑業(yè)內(nèi)優(yōu)秀企業(yè)的積極性，阻礙行業(yè)規(guī)劃的發(fā)展進(jìn)程。在此背景下，制定和推出洗滌用酶制劑質(zhì)量規(guī)格及測試方法，對于我國洗滌行業(yè)規(guī)范含酶類洗滌用品細(xì)分領(lǐng)域的市場，指導(dǎo)行業(yè)內(nèi)企業(yè)創(chuàng)新開發(fā)新產(chǎn)品，杜絕不良企業(yè)用假冒偽劣產(chǎn)品欺騙消費者，促進(jìn)洗滌行業(yè)快速、良性、正常發(fā)展有重要的意義，同時標(biāo)準(zhǔn)的出臺對于監(jiān)管和規(guī)范含纖維素酶的洗滌用品的上市也具有重要指導(dǎo)意義。六、采