BJS 201913 食品中辛基酚等5種酚類物質(zhì)的測(cè)定

附件2

食品中辛基酚等5種酚類物質(zhì)的測(cè)定

BJS201913

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚、雙酚A的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)

譜測(cè)定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰兒配方食品、畜肉、禽蛋、水產(chǎn)品、罐頭食品、植物油中辛基酚、正辛基

酚、壬基酚、正壬基酚、雙酚A的測(cè)定。

2原理

試樣中加入同位素內(nèi)標(biāo)后，經(jīng)乙腈提取，離心，取上清液經(jīng)固相萃取柱凈化，采用液相色

譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法定量。

3試劑和材料

除另行規(guī)定外，本實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。

3.1試劑

3.1.1甲醇（CH3OH）：質(zhì)譜級(jí)。

3.1.2乙腈（CH3CN）：質(zhì)譜級(jí)。

3.1.3氨水（NH4OH）：色譜級(jí)。

3.2試劑配制

0.05%氨水溶液（V/V）：取氨水（3.1.3）0.5mL用水稀釋至1000mL。

3.3標(biāo)準(zhǔn)品

辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚、雙酚A標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和辛基酚-13C6、正辛基酚-D17、

壬基酚-13C6、正壬基酚-D4、雙酚A-D4同位素內(nèi)標(biāo)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分

子式、相對(duì)分子量見(jiàn)附錄A表A.1，純度≥98%。

3.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

3.4.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（100mg/L）：分別稱取辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和雙酚A標(biāo)

準(zhǔn)物質(zhì)（3.3）10mg（精確至0.0001g），用甲醇（3.1.1）溶解，并轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，

定容至刻度，標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度為100mg/L。溶液轉(zhuǎn)移至試劑瓶中，貯存于-20℃冰箱中，有效

期12個(gè)月。

3.4.2混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（1mg/L）：分別準(zhǔn)確吸取辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和雙

酚A標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(100mg/L)(3.4.1)1mL至100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，制成

1mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，溶液轉(zhuǎn)移至試劑瓶中，置于4℃冰箱中保存，有效期3個(gè)月。

3.4.3同位素內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（100mg/L）：分別稱取辛基酚-13C6、正辛基酚-D17、壬基酚-13C6、

正壬基酚-D4、雙酚A-D4同位素內(nèi)標(biāo)（3.3）10mg（精確至0.0001g），用甲醇（3.1.1）溶解，

并轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，定容至刻度，標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度為100mg/L。溶液轉(zhuǎn)移至試劑瓶中，

貯存于-20℃冰箱中，有效期12個(gè)月。

3.4.4同位素內(nèi)標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（1mg/L）：分別準(zhǔn)確吸取辛基酚-13C6、正辛基酚-D17、壬

基酚-13C6、正壬基酚-D4、雙酚A-D4同位素內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(100mg/L)(3.4.3)各1mL至100mL

容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，制成1mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，溶液轉(zhuǎn)移至試劑瓶中，

置于4℃冰箱中保存，有效期3個(gè)月。

3.4.5同位素內(nèi)標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（100μg/L）：分別準(zhǔn)確吸取同位素內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1

mg/L)(3.4.4)各1mL至10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，制成100μg/L的混合標(biāo)

準(zhǔn)工作液。臨用時(shí)配制。

3.4.6混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確吸取混合標(biāo)準(zhǔn)中間液(1mg/L)(3.4.2)適量，加入同位素內(nèi)標(biāo)

混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（1mg/L）(3.4.4)，使辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和雙酚A濃度

分別為0.5μg/L、1μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L和50μg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。臨用

時(shí)配制。

3.5材料

固相萃取小柱（官能化聚苯乙烯/二乙烯苯萃取柱）：200mg，6mL。

4儀器和設(shè)備

4.1高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，配電噴霧（ESI）離子源。

4.2天平：感量分別為0.001g和0.0001g。

4.3渦旋混合器。

4.4離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥8000r/min。

4.5超聲波清洗器。

5分析步驟

5.1試樣制備

5.1.1乳粉、米粉：試樣混合均勻，密封并標(biāo)明標(biāo)記，于-20℃冰箱冷藏保存。

5.1.2禽蛋：取代表性試樣約200g，去殼后用組織勻漿機(jī)攪拌均勻，裝入潔凈容器中，密封并

標(biāo)明標(biāo)記，于-20℃冰箱中冷藏保存。

5.1.3水產(chǎn)品、畜肉：取代表性試樣約200g，用勻漿機(jī)勻漿均勻，裝入潔凈容器中，密封并標(biāo)

明標(biāo)記，于-20℃冰箱中冷藏保存。

5.1.4植物油：試樣混合均勻，裝入潔凈容器中，密封并標(biāo)明標(biāo)記，于-20℃冰箱中冷藏保存。

5.1.5罐頭食品：取罐頭中固形物試樣約50g,用勻漿機(jī)勻漿均勻，裝入潔凈容器中，密封并標(biāo)

明標(biāo)記，于-20℃冰箱中冷藏保存。

冷藏保存后的樣品解凍后需再次經(jīng)勻漿機(jī)均質(zhì)后使用。

5.2提取

準(zhǔn)確稱取1g（精確至0.001g）樣品于15mL具塞玻璃試管中，加入0.1mL同位素內(nèi)標(biāo)混

3

合標(biāo)準(zhǔn)工作液（100μg/L）(3.4.5)和5mL乙腈（3.1.2），渦旋混勻，超聲提取15min，8000r/min

離心5min，取上層乙腈相；殘留部分再用5mL乙腈重復(fù)提取一次，合并乙腈相，置冰箱-20℃

冷凍2h，取出于8000r/min離心5min，取上清液待凈化。

5.3凈化

取固相萃取柱（3.5），使用前用18mL甲醇活化，6mL水平衡。將5.2項(xiàng)所得上清液加30

mL水稀釋,充分搖勻后以1mL/min~2mL/min的速度上樣，棄去濾液，用12mL60%甲醇水溶

液（V/V）淋洗，棄去淋洗液，再用6mL乙腈洗脫，洗脫液于50℃用氮?dú)獯抵两?。?mL

甲醇溶解殘?jiān)?，待測(cè)。

5.4空白試驗(yàn)

除不加樣品外，采用相同的分析步驟進(jìn)行操作。

5.5儀器參考條件

5.5.1色譜條件

a)分析柱：C18柱（3μm，50mm×3mm），或性能相當(dāng)者；捕集柱：C18柱（5μm，50mm

×4.6mm），或性能相當(dāng)者；捕集柱位于進(jìn)樣閥之前。

b）流動(dòng)相：A為0.05%氨水溶液（3.2），B為甲醇（3.1.1），洗脫梯度見(jiàn)表1。

c）流速：400μL/min。

d)柱溫：30℃。

e)進(jìn)樣量：10μL。

表1梯度洗脫程序表

時(shí)間（min）A(%)B(%)

07030

9595

14.5595

14.517030

187030

5.5.2質(zhì)譜條件

a)離子源：電噴霧離子源（ESI源）。

b)檢測(cè)方式：多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)（MRM）。

c)碰撞氣為高純氮?dú)猓稍餁?、霧化氣、鞘氣等均為氮?dú)饣蚱渌线m氣體，使用前應(yīng)調(diào)節(jié)相應(yīng)

參數(shù)使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測(cè)要求，毛細(xì)管電壓、干燥氣溫度、鞘氣溫度、鞘氣流量、噴嘴電壓、

碰撞能量、碎裂電壓等參數(shù)應(yīng)優(yōu)化至最佳靈敏度，監(jiān)測(cè)離子對(duì)和定量離子對(duì)等信息詳見(jiàn)附錄B。

5.6定性測(cè)定

按照超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜條件測(cè)定試樣和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，記錄試樣和標(biāo)準(zhǔn)

溶液中各化合物的色譜保留時(shí)間，當(dāng)試樣中檢出與某標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰保留時(shí)間一致的色譜峰（變

化范圍在±2.5%之內(nèi)），并且試樣色譜圖中所選擇的監(jiān)測(cè)離子對(duì)的相對(duì)豐度比與相當(dāng)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶

液的離子相對(duì)豐度比（k）的偏差不超過(guò)表2規(guī)定的范圍，可以確定試樣中檢出相應(yīng)化合物。

表2定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差

相對(duì)離子豐度（%）k＞50%50%≥k＞20%20%≥k＞10%k≤10%

允許的最大偏差（%）±20±25±30±50

5.7定量測(cè)定

5.7.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

將混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（3.4.6）分別按儀器參考條件（5.5）進(jìn)行測(cè)定，得到目標(biāo)化合物峰面

積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液中目標(biāo)化合物的濃度。

對(duì)照品色譜圖參見(jiàn)附錄C。

5.7.2試樣溶液的測(cè)定

將試樣溶液（5.3）按儀器參考條件（5.5）進(jìn)行測(cè)定，得到相應(yīng)的樣品溶液的色譜峰面積。

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液中組分的濃度，平行測(cè)定次數(shù)不少于兩次；樣品中各待測(cè)組分的響應(yīng)

值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性響應(yīng)范圍內(nèi)，若超出標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍，應(yīng)用甲醇（3.1.1）稀釋后進(jìn)行

分析。

6結(jié)果計(jì)算

5

結(jié)果按式（1）計(jì)算：

(cco)Vf

X…………（1）

m

式中：

X—試樣中某種組分的含量，單位為微克每千克（μg/kg）；

c—由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的樣液中某種組分的濃度，單位為納克每毫升（μg/L）；

co——由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到的過(guò)程空白樣品中某種組分的濃度，單位為微克每升（μg/L）

V—試樣溶液定容體積，單位為毫升（mL）；

m—試樣稱取的質(zhì)量，單位為克（g）；

f—稀釋因子。

計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,結(jié)果保留三位有效

數(shù)字。

7精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的20%。

8檢出限和定量限

當(dāng)稱樣量為1g，定容體積為1mL時(shí)，本方法中辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和

雙酚A的檢出限均為1.0μg/kg，定量限均為2.0μg/kg。

9其他

9.1實(shí)驗(yàn)中所用的器具均為玻璃材質(zhì)，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀的管線均為不銹鋼或聚四氟乙烯材

質(zhì)。

9.2嚴(yán)格控制試劑空白，空白值應(yīng)不得對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生明顯影響，否則扣除空白時(shí)會(huì)引起較大

的誤差。

附錄A

辛基酚等5種酚類物質(zhì)相關(guān)信息

表A.1辛基酚等5種酚類物質(zhì)英文名稱、中文名稱、分子式、CAS號(hào)、相對(duì)分子質(zhì)量

序號(hào)中文名稱英文名稱CAS登錄號(hào)分子式相對(duì)分子量

1辛基酚4-tert-Octylphenol140-66-9C14H22O206.33

2正辛基酚4-n-Octylphenol1806-26-4C14H22O206.33

3壬基酚Nonylphenol25154-52-3C15H24O220.35

4正壬基酚4-n-Nonylphenol104-40-5C15H24O220.35

5雙酚ABisphenolA80-05-7C15H16O2228.29

6辛基酚-13C64-tert-Octylphenol-13C61173020-24-0C14H22O212.28

CD(CD)CH

7正辛基酚-D4-n-Octylphenol-D1219794-55-432764223.43

1717OH

8壬基酚-13C63,6,3-Nonylphenol-13C61173020-38-6C15H24O226.40

4-n-Nonylphenol

9正壬基酚-D4358730-95-7C15H19D5O225.38

-2,3,5,6-D4,OD

10雙酚A-D4BisphenolA-3,3’,5,5’-D4347841-41-2C15H12D4O2232.31

附錄B

超高效液相-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜參考條件

質(zhì)譜參考條件

a）電離方式：電噴霧負(fù)離子模式；

b）檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；

c）離子源溫度(TEM):650℃;

d）霧化氣(Gas1):55;

e）輔助氣(Gas2):65；

f）氣簾氣(GurtainGas):20;

g）電噴霧電壓：-4500V；

h）干燥氣流速：11L/min；

i）定性離子、定量離子、碎裂電壓和碰撞能量見(jiàn)表B.1。

表B.1化合物定性、定量離子和質(zhì)譜分析參數(shù)

化合物Q1Q3DP/VCE/V

205133*-80-28

辛基酚

205117-80-80

205106*-80-28

正辛基酚

205119-80-54

219133*-80-40

4-壬基酚

219147-80-40

219106*-80-30

4-正壬基酚

219119-80-45

227212*-80-25

雙酚A

227133-80-35

辛基酚-13C6211139*-73-32

正辛基酚-D17222108*-80-28

壬基酚-13C6225.1138.9*-90-38

正壬基酚-D4223110*-80-28

雙酚A-D4231216*-80-28

*定量離子。

附錄C

超高效液相-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

B.1雙酚

AB.2雙酚A-D4

B.4

B.34-壬基酚壬基酚-13C6

B.5