DB21∕T 3638-2022 海蜇種質(zhì)鑒定技術(shù)規(guī)范

DB21遼TechnicalRegulationforGermplasmidentificationofRhopilemaesculentum遼寧省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I本文件主要起草人：李云峰、李玉龍、周遵春、鮑相渤、陳百靈、陳井童、田梅1海蜇種質(zhì)鑒定技術(shù)規(guī)范GB/T18654.2養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗(yàn)第2部分GB/T18654.12養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗(yàn)第12部分：染色體組型刺胞動(dòng)物門（Cnidaria）、缽水母綱（Scyphomedusa5.2形態(tài)特征胃膜、口柱連為一體。傘體部表面光滑，呈半2DB21/T3638—20225.3繁殖5.3.3產(chǎn)卵類型5.4細(xì)胞遺傳學(xué)特性檢測(cè)5.4.1染色體數(shù)5.4.2核型3ST5.5分子遺傳學(xué)特征5.5.2CO1基因的引物序列PCR反應(yīng)液見附錄B表B.1。反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性5min;進(jìn)入30個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)94℃變性30s,53℃~56℃退火30s,72℃延伸30s;最后72℃延伸5min。5.5.4CO1基因序列測(cè)序TCTATCTCTTCGGCCTCACATTGGAGCTATTTTGTTGGTTGTTTTTGCTGCCATTTTTAACACGTTATTATATT4GCACACGCACCAGAAGAGACGTTCGCTCGTTCGCTCGTTCGTTTGTCTCTTGCTGTATACGTGTGGCTAGCGATAAAACAAAACAAGAAACAACTTCCAACGGTGGATCTCTTGGCTCGTGCATCGATGAAGAACGCAGCCAGCTGCGATATGTAGTGTGAATTGCAGAACCCAGCGAATCATCGAATCTTTGAACGCAAATGGCGCTCCTTGGTTCTCCATGGAGCACGTCTGTCTGAGCGTCATGGCCAATCAATCCCAATAGCACACGCTCTTCTGCAAAGAGAGGAGCATGTGGCGTTGAGGCAACACGGCGTTGATGACGGACATCAGCCATCAACTGATGC符合第5章要求，且COI基因序列測(cè)序結(jié)果與5.5.4節(jié)比對(duì)結(jié)果相似度在98%以上，判5A.2低滲：將細(xì)胞懸液于1000rpm/min離心10min，去除上清后加入0.075mol/L的KCl溶液，27℃低滲A.4解離：-20℃中取出已經(jīng)固定好的細(xì)胞懸液，離心去上清，加入預(yù)冷的50%冰醋酸1-2滴進(jìn)行解離A.5滴片：將細(xì)胞懸液在距冰凍載玻片上1m左右的高A.6染色：將載玻片置于現(xiàn)配置的10%Giemsa（pH=6.8）染缸內(nèi)染色30min，用蒸餾水沖洗干凈，或?qū)⑤d玻片用DAPI染色，封片，染色24h，-20℃A.7