伴侶動(dòng)物A型流感主動(dòng)監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范征求意見稿

1伴侶動(dòng)物A型流感病毒主動(dòng)監(jiān)測(cè)技術(shù)要求集、樣本庫建立與管理質(zhì)量、控制及結(jié)果分析的基本本標(biāo)準(zhǔn)適用于伴侶動(dòng)物中A型流感病毒的診斷、檢測(cè)GB/T42066-2022急性病毒性感染呼吸道選擇合適規(guī)格拭子，將拭子頭完全伸入采樣對(duì)象咽部，拭子24縮略語VTM：病毒載液（VirusTranRNA：核糖核酸（RibonucleicAcPCR：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymerasecDNA：互補(bǔ)脫氧核糖核酸(complementaryCt值：各反應(yīng)管內(nèi)熒光信號(hào)達(dá)到基線值時(shí)所經(jīng)歷的5.1實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)國內(nèi)伴侶動(dòng)物A型流感病毒活動(dòng)水平和流行趨勢(shì)；5.2實(shí)時(shí)追蹤A型流感病毒變異，及時(shí)發(fā)現(xiàn)新型流感病毒，并做出預(yù)警；5.3為伴侶動(dòng)物流感疫情和動(dòng)物源新型流感病毒向人類——該區(qū)域處于候鳥棲息地或候鳥遷徙路線；——該區(qū)域伴侶動(dòng)物飼養(yǎng)密度或診療密度較大。6.2.1應(yīng)監(jiān)測(cè)因呼吸道癥狀于寵物醫(yī)院就診病例和全部住院監(jiān)測(cè)，其它季節(jié)每?jī)蓚€(gè)月對(duì)監(jiān)測(cè)點(diǎn)所有伴侶動(dòng)物進(jìn)和采樣日期，填寫“監(jiān)測(cè)信息表”（見附錄C）。確保監(jiān)測(cè)信息表與監(jiān)測(cè)對(duì)象一一對(duì)應(yīng)3于各監(jiān)測(cè)點(diǎn)采集符合6.2要求的伴侶動(dòng)物咽拭子，若采樣對(duì)象有明顯呼吸道癥狀則加采鼻拭子（體型較小無法采集鼻拭子的動(dòng)物可蘸取鼻涕或不采集）。樣本采集應(yīng)使用無菌拭子，拭子采集后裝入含況填寫“監(jiān)測(cè)信息表”。的cDNA，陰性對(duì)照使用RNaseFreeWater。實(shí)時(shí)熒光PCR49結(jié)果報(bào)告5A.1.2取出玻璃瓶，倒出去核酸試劑和去核酸酶試劑后用DEPC水洗三次，高壓滅菌A.1.3配置環(huán)境應(yīng)包含生物安全柜或超凈臺(tái)，使用去核酸試劑和去核酸酶試劑擦拭后再用7.5試劑浸泡30min后使用DEPC水洗凈）分液器經(jīng)高壓滅菌的玻璃瓶置于其中，紫外照射1h。6將新合成的引物瞬時(shí)離心后依照說明書用RNaseFreeWater溶解為100μM的儲(chǔ)存液。將新合成的探針?biāo)矔r(shí)離心后，依照說明書用RNaseFreeWater溶解為100μM的儲(chǔ)存液將配制好的正向引物工作液、反向引物工作液和探針工作液按照體積比1：1：1混合，可選用商品化的“一步法”實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒說明書配制5'-TATTCGTCTCAGGGAGCAAAAG5'-ATATCGTCTCGTATTAGTAGAAACAAGGGTGNA正向引物5'-TATTCCTCTCACCCAGCAAANA反向引物5'-ATATCCTCTCCTATTAGTAGAAACAAGGATTTT將新合成的引物瞬時(shí)離心后依照說明書用RNaseFreeWater溶解為100μM的儲(chǔ)存液。7將新合成的探針?biāo)矔r(shí)離心后，依照說明書用RNaseFreeWater溶解為100μM的儲(chǔ)存液將配制好的正向引物工作液、反向引物工作液和探