DB36T-日本血吸蟲水體感染性監(jiān)測 哨鼠監(jiān)測法

ICSFORMTEXTFORMTEXT點擊此處添加中國標準文獻分類號FORMTEXT?????DBFORMTEXT36DBFORMTEXT36/FORMTEXTXXXXX—FORMTEXTXXXXFORMTEXT?????日本血吸蟲水體感染性監(jiān)測哨鼠監(jiān)測法InfectivitymonitoringofSchistosomajaponicuminwater-Sentinelmonitoringmethod（送審稿）（本稿完成日期：2023-4-27）FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX發(fā)布FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX實施FORMTEXT江西省市場監(jiān)督管理局???發(fā)布DB36/XXXXX—XXXX日本血吸蟲水體感染性監(jiān)測哨鼠監(jiān)測法1范圍本標準規(guī)定了哨鼠監(jiān)測法開展水體日本血吸蟲感染性的監(jiān)測方法。本標準適用于各級疾病預防控制機構(gòu)對可疑水體日本血吸蟲感染性的監(jiān)測。2術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標準。2.1哨鼠Sentinelmice用于測定自然水體是否感染日本血吸蟲的實驗用小白鼠。2.2哨鼠監(jiān)測法Sentinelmicemethod將哨鼠浮放于自然水體中一定時間，經(jīng)過飼養(yǎng)一定時間進行哨鼠解剖查蟲的水體血吸蟲感染性監(jiān)測技術(shù)。2.3日本血吸蟲schistosomiasisjaponicum凡寄生于脊椎動物血管內(nèi)的吸蟲被稱為血吸蟲，隸屬扁形動物門，吸蟲綱、復殖目、裂體科、裂體屬。在我國寄生于人畜（獸）并致人畜（獸）共患的血吸蟲屬日本血吸蟲，引起日本血吸蟲病。2.4日本血吸蟲尾蚴Schistosomajaponicumcercaria日本血吸蟲幼蟲發(fā)育過程中的一個階段，為血吸蟲的感染期。尾蚴屬于叉尾型，蚴體由長圓形的軀干和細長的尾部組成，有口吸盤及\o"腹吸盤（頁面不存在）"腹吸盤，腸道分兩支；大小為280～360μm×60～95μm。2.5水體感染性Waterinfectivity指含有日本血吸蟲尾蚴的水體，其感染性以哨鼠感染率和哨鼠蟲負荷表示。3縮略語下列縮略語適用于本文本。GPS：全球定位系統(tǒng)(GlobalPositioningSystem)4規(guī)范性引用文件下列文件對于本標準的應用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本標準；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標準。GB14925實驗動物環(huán)境及設施GB19489實驗室生物安全通用要求GB/T35892實驗動物福利倫理審查指南5實驗器材5.1儀器設備小型木架、哨鼠籠、電動哨鼠監(jiān)測船、伸縮桿、飼養(yǎng)籠。5.2試劑材料5.2.1異氟烷、生理鹽水（0.9%的\t"/item/%E7%94%9F%E7%90%86%E7%9B%90%E6%B0%B4/_blank"氯化鈉溶液）5.2.2解剖剪、眼科攝、玻璃培養(yǎng)皿5.2.3其他手套、小鼠飼料6監(jiān)測方法6.1哨鼠投放采用鼠籠法，每點放置20只哨鼠，雌雄各半（雌鼠25±3g、雄鼠28±3g），每籠10只。每籠間隔10～20m，要求哨鼠腹部、四肢以及尾部接觸水體，見附錄A。6.2水體感染性測定步驟6.2.1選擇監(jiān)測點，根據(jù)環(huán)境類型和大小，確定監(jiān)測點及其數(shù)量，并根據(jù)環(huán)境選擇不同哨鼠載具，見附錄B。記錄放置哨鼠時氣溫、水溫及水的流速和監(jiān)測點等相關(guān)信息并進行GPS定位。6.2.2在監(jiān)測點上游和下游各500m范圍內(nèi)進行緩慢拖曳，保持勻速，拖曳時速≤3Km/hr，防止哨鼠嗆水。6.2.3每天于10:00-14:00測定4小時，連續(xù)測定2天。6.2.4現(xiàn)場測定時，觀察哨鼠狀態(tài)，記錄哨鼠丟失或死亡數(shù)量。見附錄B6.3哨鼠飼養(yǎng)將存活的哨鼠帶回實驗室飼養(yǎng)35±2天，見附錄C1。6.4哨鼠解剖將哨鼠麻醉后采用斷髓法處死小鼠，解剖觀察小鼠肝臟是否有肉芽腫、成蟲，肝門靜脈和腸系膜是否有血吸蟲成蟲。所有檢出的血吸蟲在解剖鏡下觀察，區(qū)別雌雄蟲、雌雄合抱并記數(shù)，見附錄C2。6.5統(tǒng)計指標計算哨鼠感染率和哨鼠蟲荷數(shù)，見附錄D。

附錄A（規(guī)范性）A.1哨鼠監(jiān)測法操作流程A.1.1哨鼠裝籠：取2只哨鼠測定籠和20只不同性別小白鼠（雌雄各10只），打開籠蓋，用鑷子夾住哨鼠尾部，在每只測定籠中加入哨鼠10只（每格2只），關(guān)上籠蓋并扎緊籠口，防止拖放途中籠口張開哨鼠外逃。A.1.2哨鼠籠投放：上午10點開始將裝有哨鼠的籠放置到監(jiān)測點擬測定的水面，調(diào)整哨鼠籠浮起高度，以哨鼠四肢、腹部、尾部接觸到水體為宜。2個測定籠水體間隔為10～20m。A.1.3哨鼠籠回收：下午2點收回測定籠，打開蓋子用鑷子夾住哨鼠尾部，取出后放入哨鼠飼養(yǎng)籠中，放在陽光下通風處使哨鼠體毛快速干燥；并在飼養(yǎng)籠上貼好標簽，做好拖放地點標記和編號。A.1.4重復測定2天。A.1.5哨鼠運輸：喂食后運回實驗室飼養(yǎng)，運輸中飼養(yǎng)籠取下飼水瓶，并防止運輸車輛的車廂溫度過高而導致哨鼠死亡。每個監(jiān)測點哨鼠回收率需達到90%，飼養(yǎng)時的死亡率（28天內(nèi))小于10%，如死亡率高于10%需重做（以點為單位）。附錄B（規(guī)范性）B.1溝渠環(huán)境哨鼠監(jiān)測步驟B.1.1選擇哨鼠籠作為載具，每一籠中放入10只哨鼠，用5～10m的繩綁在哨鼠籠一端。B.1.2在投放點先進行浮力測定，將裝滿哨鼠的籠子放入水中，根據(jù)哨鼠是否嗆水，調(diào)節(jié)好適宜的浮力后進行測定。B.1.3在監(jiān)測點上游和下游各500m范圍內(nèi)進行拖曳，拖曳時速≤3Km/hr。B.2湖面環(huán)境哨鼠監(jiān)測步驟B.2.1選擇哨鼠監(jiān)測船作為載具，在投放點先進行浮力測定，根據(jù)哨鼠是否嗆水，確定每一格柵的放入數(shù)量，監(jiān)測點處于礁石、淤泥較多的環(huán)境，應在監(jiān)測船上捆綁長繩以防止螺旋槳進泥等導致哨鼠船無法移動時能順利收回哨鼠船。B.2.2利用遙控控制哨鼠船選擇上下游各500m，沿岸1～5m的范圍內(nèi)來回移動，移動時速≤10Km/h。附錄C（規(guī)范性）C.1哨鼠飼養(yǎng)C.1.1飼養(yǎng)鼠籠準備：選用聚乙烯塑料制作的專用哨鼠飼養(yǎng)籠，規(guī)格為：45cm×35cm×20cm；C.1.2飼養(yǎng)條件：飼養(yǎng)室保持溫度18～29℃，相對濕度40～70%；C.1.3實驗室飼養(yǎng)：哨鼠運回實驗室后核對標簽及編號，清點哨鼠數(shù)量，觀察小鼠狀況，做好記錄；飼養(yǎng)期間一周更換墊料、清潔飼養(yǎng)籠1～2次、每天早晚各添加適量的飼料和水1次，同時觀察和記錄哨鼠死亡情況；C.1.4飼養(yǎng)期間死亡記錄：28d內(nèi)飼養(yǎng)時的死亡率應小于10%。飼養(yǎng)超過28天的哨鼠死亡，應及時進行解剖查蟲。C.2哨鼠解剖C.2.1哨鼠麻醉后采取斷髓法處死哨鼠；C.2.2用圖釘將小鼠四肢固定于小木板上，將小木板放入小瓷盤中，用蘸水棉球濕潤小鼠腹部皮毛；C.2.3用眼科攝子將哨鼠腹部皮膚提起，用解剖剪剪開哨鼠腹壁，打開腹腔；C.2.4觀察肝門靜脈、腸系膜靜脈中有無血吸蟲成蟲；C.2.5小剪刀剪斷小鼠門靜脈,用5ml注射器取抗凝液，針頭刺入小鼠心臟，緩慢注入抗凝液（如果門靜脈和肝內(nèi)有血吸蟲成蟲，蟲體將從門靜脈斷口處沖洗出來）；C.2.6觀察門靜脈斷口處是否有血吸蟲成蟲沖洗出來；如發(fā)現(xiàn)血吸蟲成蟲，收集蟲體，解剖鏡下觀察并區(qū)分雌、雄蟲、雌雄合抱并計數(shù)；C.2.7將小鼠肝臟和腸組織剪下，放入盛有生理鹽水的培養(yǎng)皿中，剝離腸系膜；C.2.8觀察小鼠肝臟有無蟲卵沉著引起的肉芽腫；若發(fā)現(xiàn)可疑肝臟組織結(jié)節(jié)，取肝臟表面的肉芽腫（或可疑肝組織）于載玻片上，用另一載玻片壓片，顯微鏡下觀察有無血吸蟲卵沉積，發(fā)現(xiàn)血吸蟲蟲卵則判定為陽性；C.2.9分別取哨鼠腸系膜放于潔凈玻璃板上，取另一潔凈玻璃板壓片，置于于陽光或燈光下肉眼觀察，若在腸系膜中發(fā)現(xiàn)血吸蟲成蟲，則判定為陽性，取成蟲計數(shù)后置于95%酒精或無水乙醇保存。附錄DD.哨鼠感染率和哨鼠蟲荷數(shù)計算哨鼠感染率=陽性哨鼠數(shù)/解剖哨鼠數(shù)*100%哨鼠蟲荷數(shù)=檢出蟲數(shù)總和/解剖哨鼠數(shù)參?考?文?獻周曉農(nóng).血吸蟲