DB22-T3357-2022-玉米抗鐮孢菌根腐病鑒定技術(shù)規(guī)程-吉林省

ICS65.020CCSB0522吉林省地方標(biāo)準(zhǔn)DB22/T3357—2022玉米抗鐮孢根腐病鑒定技術(shù)規(guī)范TechnicalspecificationonevaluationofmaizeresistancetoFusariumrootrot吉林省市場監(jiān)督管理廳發(fā)布DB22/T3357—2022前言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件中的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由吉林省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。本文件起草單位：吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院。本文件主要起草人：蘇前富、賈嬌、張偉、孟玲敏、白雪、王巍巍、高月波、王義生、晉齊鳴。IDB22/T3357—2022玉米抗鐮孢根腐病鑒定技術(shù)規(guī)范1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了玉米抗鐮孢根腐病鑒定技術(shù)方法和抗性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)適用于栽培玉米（ZeamaysL.）自交系和雜交種等種質(zhì)資源對玉米鐮孢根腐病抗性的人工接種鑒定及評價(jià)。2規(guī)范性引用文件本文件沒有規(guī)范性引用文件。術(shù)語和定義3下列術(shù)語和定義適用于本文件。鐮孢根腐病Fusariumrootrot由鐮孢屬的一些種（Fusariumspp.，有性態(tài)為赤霉屬Gibberellaspp.）所引起的玉米苗期根部4分離、鑒定和保存以常規(guī)組織分離法和單孢分離法（見附錄A）從田間采集的具有典型玉米根腐病癥狀的根部分離獲得純培養(yǎng)物，依據(jù)形態(tài)特征和分子鑒定結(jié)果，明確其鐮孢屬種級分類地位（見附錄B），4℃保存?zhèn)涮羧?.1保存的鐮孢菌接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基25℃暗培養(yǎng)5d～7d后，用無菌打孔器打取菌落邊緣直徑5mm的菌餅，將其接種于合成低營養(yǎng)（SN）培養(yǎng)基中150r/min搖培7d～10d，鏡檢分生孢子濃度達(dá)到1×10個/mL后，充分搖勻接種于經(jīng)高壓滅菌的高粱粒上，每120g6高粱粒接種1mL孢子懸浮液，充分混勻，25℃培養(yǎng)7d～10d后，待菌絲布滿高粱粒，陰干低溫保存?zhèn)溆?。PDA、SN和高粱粒培養(yǎng)基配方見附錄C。5鑒定圃鑒定圃應(yīng)具備良好的自然發(fā)病環(huán)境和排灌設(shè)施，周邊應(yīng)設(shè)置保護(hù)行。鑒定圃確定后不應(yīng)隨意更換。1DB22/T3357—2022試驗(yàn)設(shè)計(jì)鑒定圃中每2行(行長5m，行距0.6m～0.7m)為一個小區(qū)，隨機(jī)排列或順序排列。每30行～50行鑒定材料設(shè)1組對照材料（高抗自交系吉842、高感自交系LN810），見附錄D。種植要求根據(jù)鑒定材料生育期、土壤環(huán)境及氣候條件等適當(dāng)早播。每行播種50粒種子，精量點(diǎn)播。鑒定材料出苗率低于60%時視為該材料鑒定無效。6接種時期與方法播種時將按4.2制備的接種體與種子同時施入播種穴中，每穴約5g接種體。田間管理播種后鎮(zhèn)壓保墑，正常田間管理。播種后若遇持續(xù)干旱，應(yīng)及時澆灌，保持土壤含水量60%～70%。7調(diào)查全小區(qū)調(diào)查，以玉米主胚根2/3以上發(fā)生腐爛為發(fā)病植株。記錄每份鑒定材料的總株數(shù)和發(fā)病株數(shù),計(jì)算發(fā)病株率。按公式（1）計(jì)算發(fā)病株率：P=×100······································································（1）P——發(fā)病株率，單位為百分率（%）；n——發(fā)病株數(shù)，單位為株；N——調(diào)查總株數(shù)，單位為株。表1玉米對鐮孢根腐病抗性鑒定的病情級別劃分135發(fā)病株率10.1%～20%；發(fā)病株率20.1%～40.0%；2DB22/T3357—2022表1玉米對鐮孢根腐病抗性鑒定的病情級別劃分（續(xù)）病情級別描述發(fā)病株率40.1%～60.0%；發(fā)病株率60.1%～100%。798抗性評價(jià)有效性判別當(dāng)鑒定圃中高感對照材料達(dá)到表1中的9級，該批次材料苗期根腐病鑒定結(jié)果視為有效。評價(jià)8.2.1依據(jù)鑒定材料發(fā)病程度（病情級別）確定其抗性水平，評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)見表2。表2玉米對鐮孢根腐病抗性的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)病情級別抗性高抗Highlyresistant（HR）抗Resistant（R）13579中抗Moderatelyresistant（MR）感Susceptible（S）高感Highlysusceptible（HS）表3年玉米抗鐮孢根腐病鑒定記錄表編號接種鐮孢菌分離物編號：接種日期：評價(jià)技術(shù)負(fù)責(zé)人（簽字）：3DB22/T3357—2022重復(fù)鑒定鑒定材料若初次鑒定表現(xiàn)為高抗、抗、中抗，翌年進(jìn)行重復(fù)鑒定。評價(jià)結(jié)論綜合兩年評價(jià)結(jié)果，抗性以記載的最高病情級別為準(zhǔn)，并依此結(jié)果對鑒定材料進(jìn)行評價(jià)，形成評價(jià)結(jié)論。4DB22/T3357—2022附錄A（資料性）鐮孢菌分離方法A.1常規(guī)組織分離法切取小塊病健交界處組織，經(jīng)表面消毒和滅菌水清洗過后，在適宜的培養(yǎng)基和生長條件下培育純菌絲的一種簡易方法。A.2單孢分離法用滅菌水將SN培養(yǎng)基培養(yǎng)的鐮孢菌分生孢子懸浮液稀釋為1×10個/mL的溶液，然后吸取2003μL溶液均勻涂布于PDA培養(yǎng)基上，25℃黑暗培養(yǎng)24h后，挑取萌發(fā)的單個分生孢子于新的PDA培養(yǎng)基中，25℃暗培養(yǎng)。5DB22/T3357—2022附錄B（資料性）玉米鐮孢根腐病病原菌B.1學(xué)名和形態(tài)描述B.1.1禾谷鐮孢（無性態(tài)）/玉蜀黍赤霉菌（有性態(tài)）無性態(tài)學(xué)名：FusariumgraminearumSchwabe有性態(tài)學(xué)名：Gibberellazeae（Schwein.）Petch無性態(tài)特征：大型分生孢子呈鐮刀狀，有隔膜3個～7個，頂端鈍圓或略微收縮，基部有明顯的足細(xì)胞，具有3個～4個分隔的分生孢子大小為（25μm～40μm）×（2.5μm～4μm），具有5個～7個分隔的分生孢子大小為（48μm～50μm）×（3μm～3.5μm）（圖B.1）；小型分生孢子極少或無，無厚垣孢子。有性態(tài)特征：子囊殼卵圓狀，直徑約140μm～250μm；子囊長棒狀，（60μm～85μm）×（8μm～11μm），內(nèi)含8個子囊孢子，（19μm～24μm）×（3μm～4μm）。圖B.1禾谷鐮孢的菌落形態(tài)和分生孢子形態(tài)擬輪枝鐮孢（無性態(tài)）/藤倉赤霉（有性態(tài)）無性態(tài)特征：小型分生孢子念珠狀串生，無色，單胞，（5μm～12μm）×（2μm～3μm）（圖B.1）；大型分生孢子較少，無色，鐮刀狀，略彎，兩端尖，3個～5個分隔，（15μm～60μm）×（2μm～5μm）。有性態(tài)特征：較少形成，子囊殼球狀，直徑220μm～300μm；子囊長棒狀，內(nèi)含8個子囊孢子；子囊孢子大?。?4μm～18μm）×（4.5μm～6μm）。6DB22/T3357—2022圖B.2擬輪枝鐮孢的菌落形態(tài)和分生孢子形態(tài)B.2鐮孢菌的分子鑒定特異性檢測：針對鐮孢菌脫氧核糖核酸（Deoxyribonucleic,DNA）中屬和種的特異性序列，用特異性引物進(jìn)行擴(kuò)增。特異性引物、擴(kuò)增產(chǎn)物大小及擴(kuò)增所需要的退火溫度見表B.1。表B.1禾谷鐮孢、擬輪枝鐮孢和鐮孢屬的特異性引物7DB22/T3357—2022附錄C（資料性）鐮孢菌培養(yǎng)基配方C.1PDA培養(yǎng)基馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（Potatodextroseagarmedium，PDA）：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂18g～20g，蒸餾水1000mL。C.2SN培養(yǎng)基合成低營養(yǎng)培養(yǎng)基（SpeziellerN?hrstoffarmer，SN）：磷酸二氫鉀1g，硝酸鉀1g，七水硫酸鎂0.5g，氯化鉀0.5g，葡萄糖0.2g，蔗糖0.2g，蒸餾水1000mL。C.3高粱粒培養(yǎng)基高