DB22-T3386-2022-小球藻發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)規(guī)范-吉林省

ICS65.150CCSB5222吉林省地方標(biāo)準(zhǔn)DB22/T3386—2022小球藻發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)規(guī)范Thetechnicalspecificationforfermentationcultureoffreshwaterchlorellavulgaris吉林省市場(chǎng)監(jiān)督管理廳發(fā)布DB22/T3386—2022前言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件中的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由吉林省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。本文件起草主要單位：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，吉林省水產(chǎn)技術(shù)推廣總站、通化師范學(xué)院。本文件主要起草人：張東鳴、陳玉珂、藺麗麗、王秋舉、郭志欣、劉洪建、趙云龍、高永生。IDB22/T3386—2022小球藻發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)規(guī)范1范圍本文件規(guī)定了小球藻（Chlorellavulgaris）發(fā)酵培養(yǎng)的儀器設(shè)備與耗材，培養(yǎng)基，培養(yǎng)，測(cè)定生物量和采收。本文件適用于淡水小球藻設(shè)施發(fā)酵培養(yǎng)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB11607漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。培養(yǎng)基中接種少量的藻種，在適宜環(huán)境條件（溫度、鹽度、光照、pH值等）下，藻液達(dá)到一定的4小球藻發(fā)酵培養(yǎng)儀器設(shè)備應(yīng)滿足下列要求：a)發(fā)酵罐,容量不低于50L；b)恒溫干燥箱，不低于2000W；1DB22/T3386—20225培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)用BG-11培養(yǎng)基，主要成分見表1。表1BG-11培養(yǎng)基組成貯存液配制體積（mL）成分含量（g）工作液體積（mL）NaNO3(+N)/NaCl(-N)K2HPO4·3H2ONa2CO330/20.61a10000.800.4050檸檬酸0.302b100檸檬酸鐵銨EDTA-Na20.3020.05100100CaCl2·2H2OMgSO4·7H2OH3BO31.8022343.752.86MnCl2·4H2OCuSO4·5H2ONa2MoO4·2H2OCo(NO3)2·6H2OZnSO4·7H2OHEPES緩沖液1.810.0790.3910.049470.222119.1510001000c406貯存液1用2mol/L的NaOH調(diào)pH到7.4～8.0；貯存液2易生菌，高壓滅菌后保存于4℃；貯存液6為保種時(shí)用，平時(shí)培養(yǎng)可不加。發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)基主要成分見表2。表22DB22/T3386—20226培養(yǎng)水質(zhì)水質(zhì)符合GB11607的要求。擴(kuò)大培養(yǎng)6.2.1藻種小球藻純度≥99.99%。6.2.2接種無菌環(huán)境下，將已無菌的600mLBG-11培養(yǎng)基裝入1L已滅菌處理的玻璃三角燒瓶中，然后將200mL密度達(dá)到10ind/mL的小球藻接種于BG-11培養(yǎng)基中。66.2.3培養(yǎng)條件pH6.5，培養(yǎng)溫度28℃，充氣量1.5L/min,培養(yǎng)時(shí)間為96h。發(fā)酵培養(yǎng)6.3.1接種在50L發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，接種量為10%，將3L擴(kuò)大培養(yǎng)的小球藻藻種接入27L發(fā)酵裝料體積30L，溫度28℃，攪拌速度150r/min~300r/min，發(fā)酵時(shí)間96h。在發(fā)酵培養(yǎng)達(dá)36h時(shí)向發(fā)酵罐內(nèi)補(bǔ)充30g/L葡萄糖；在發(fā)酵培養(yǎng)達(dá)60h時(shí)向發(fā)酵罐內(nèi)補(bǔ)充10g/L尿素，培養(yǎng)至滿96h結(jié)束。7取8mL藻液裝入10mL離心管中以8000r/min離心10min，棄上清，再用蒸餾水混懸藻泥，離心棄上清，重復(fù)三遍。將藻泥用少量蒸餾水洗入預(yù)先稱重的培養(yǎng)皿中敞口置于