DB21-T3286－2020-水質(zhì)5種磺胺類抗生素的測定固相萃取高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法-遼寧省

ICS13.020.40DB21Z10遼寧省地方標(biāo)準(zhǔn)DB21/T3286—2020水質(zhì)5種磺胺類抗生素的測定固相萃取/高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法遼寧省市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB21/T3286—2020目次前言..............................................................................II1適用范圍.............................................................................12規(guī)范性引用文件.......................................................................13方法原理.............................................................................14干擾和消除...........................................................................15試劑.................................................................................16儀器和設(shè)備...........................................................................27樣品.................................................................................28分析步驟.............................................................................39結(jié)果計(jì)算與表示.......................................................................510精密度和準(zhǔn)確度......................................................................611質(zhì)量保證和質(zhì)量控制..................................................................712廢物處理............................................................................7附錄A（資料性附錄）方法的精密度和準(zhǔn)確度..............................................8DB21/T3286—2020前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫》給出的規(guī)則編寫。本標(biāo)準(zhǔn)附錄A為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由大連市市場監(jiān)督管理局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由遼寧省生態(tài)環(huán)境廳歸口。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草單位：遼寧省大連生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：付曉燕、劉蓮蓮、楊碩、楊萌。本標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布實(shí)施后，任何單位和個人如有問題和意見建議，均可以通過來電和來函等方式進(jìn)行反饋，我們將及時答復(fù)并認(rèn)真處理，根據(jù)實(shí)際情況依法進(jìn)行評估及復(fù)審。歸口管理部門通訊地址：遼寧省生態(tài)環(huán)境廳（沈陽市渾南區(qū)雙園路30甲），聯(lián)系電話標(biāo)準(zhǔn)起草單位通訊地址：遼寧省大連生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心（遼寧省大連市沙河口區(qū)連山街58號），聯(lián)系電話DB21/T3286—2020水質(zhì)5種磺胺類抗生素的測定固相萃取/高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法警告：實(shí)驗(yàn)中所使用的甲醇、磺胺類抗生素屬于有毒有機(jī)物，實(shí)驗(yàn)操作時應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，溶液配制過程應(yīng)在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行。1適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測定水中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶和磺胺甲惡唑等5種磺胺類抗生素的高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于地表水、地下水、海水、工業(yè)廢水和生活污水中5種磺胺類抗生素的測定。當(dāng)樣品體積為100ml，濃縮定容至1.0ml，進(jìn)樣體積為10.0μl時，本方法磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶和磺胺甲惡唑的檢出限分別為0.01μg/L、0.01μg/L、0.01μg/L、0.009μg/L和0.01μg/L，測定下限分別為0.04μg/L、0.04μg/L、0.04μg/L、0.036μg/L和0.04μg/L，測定上限均為100μg/L。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T14581水質(zhì)湖泊和水庫采樣技術(shù)指導(dǎo)HJ91.1污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范（部分代替HJ/T91污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范）HJ/T91地表水和污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范HJ493水質(zhì)樣品的保存和管理技術(shù)規(guī)定3水樣經(jīng)固相萃取后，水中磺胺類抗生素經(jīng)液相色譜儀分離，用串聯(lián)質(zhì)譜儀在多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）條4當(dāng)樣品中存在基質(zhì)干擾時，可通過優(yōu)化色譜條件、稀釋樣品、減少進(jìn)樣體積以及對樣品進(jìn)行預(yù)處理5DB21/T3286—2020除非另有說明，分析時均使用符合國家標(biāo)準(zhǔn)的優(yōu)級純試劑，實(shí)驗(yàn)用水符合GB/T6682，一級。5.1甲醇（CH3OH）：液相色譜純。5.2甲酸（HCOOH）。5.3甲酸溶液：1+1000（V/V）。量取1.0ml甲酸（5.2）緩慢加入1L實(shí)驗(yàn)用水中，混勻。5.4標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)5.4.1磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲惡唑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥99%。5.4.2磺胺甲基嘧啶-13C6內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥99%。5.5標(biāo)準(zhǔn)溶液5.5.1磺胺類抗生素標(biāo)準(zhǔn)貯備液：ρ=100.0mg/L。準(zhǔn)確稱取適量的每種磺胺類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（5.4.1），用甲醇配成100.0mg/L的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，或直接購買有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，貯備液在0~4℃冷藏避光保存，可穩(wěn)定保存20天，或參照制造商的產(chǎn)品說明保存。5.5.2磺胺類抗生素標(biāo)準(zhǔn)使用液：ρ=1.00mg/L。將磺胺類抗生素標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液（5.5.1）用甲醇稀釋至1.0mg/L，現(xiàn)用現(xiàn)配。5.5.3磺胺甲基嘧啶-13C6標(biāo)準(zhǔn)貯備液：ρ=100.0mg/L。C6標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（5.4.2），用甲醇（5.1）配成100.0mg/L的標(biāo)準(zhǔn)貯備準(zhǔn)確稱取適量的磺胺甲基嘧啶-13液，或直接購買有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，貯備液在0~4℃冷藏避光保存或參照制造商的產(chǎn)品說明保存使用。5.5.4磺胺甲基嘧啶-13C6標(biāo)準(zhǔn)使用液：ρ=1.0mg/L。將磺胺甲基嘧啶-C6標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液（5.5.3）用甲醇（5.1）稀釋至1.0mg/L，現(xiàn)用現(xiàn)配。135.6氮?dú)猓杭兌取?9.9%。66.1高效液相色譜/三重四極桿質(zhì)譜儀：高效液相色譜儀具備梯度洗脫功能；三重四極桿質(zhì)譜儀配有電噴霧離子化源（ESI）。6.2色譜柱：填料為硅膠基質(zhì)C18，粒徑1.8μm，柱長100mm，內(nèi)徑2.1mm，或其他等效色譜柱。6.3固相萃取裝置。6.4濃縮裝置：K-D濃縮器、氮吹儀等性能相當(dāng)?shù)脑O(shè)備。6.5濾膜：針式有機(jī)相過濾器，孔徑0.22μm，直徑13mm，玻璃纖維、親水性聚丙烯、親水性聚四氟乙烯（PTFE）或其它等效材質(zhì)。6.6固相萃取柱：填料為二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物或同等柱效的萃取柱，規(guī)格為6ml/500mg。7DB21/T3286—2020按照GB/T14581、HJ91.1、HJ/T91、HJ/T164、HJ442和HJ493的相關(guān)規(guī)定進(jìn)行樣品的采集和保存。采集樣品時，向采樣瓶（6.8）中加入甲酸（5.2）500μl，然后采集樣品至滿瓶，擰緊螺旋蓋密封，搖勻。水樣0~4℃冷藏避光保存，48h內(nèi)完成分析。7.2試樣制備活化：用10ml甲醇（5.1）活化固相萃取柱，保證固相萃取柱柱頭浸潤。再用10ml實(shí)驗(yàn)用水活化固相萃取柱，保證固相萃取柱柱頭浸潤。上樣：水樣上樣前放置至室溫，準(zhǔn)確量取100ml水樣，水樣以3~5ml/min的流速通過固相萃取柱。淋洗：用10ml實(shí)驗(yàn)用水淋洗固相萃取柱，將在固相萃取柱上保留較弱的雜質(zhì)淋洗下來，棄去淋洗液。洗脫：用10ml甲醇（5.1）洗脫富集后的固相萃取柱，并用接收管接收甲醇洗脫液。濃縮：將上述提取溶液濃縮至低于1.0ml近干，加甲酸溶液（5.3）定容到1.0ml，最后加入內(nèi)標(biāo)使用液10.0μl，經(jīng)0.22μm濾膜（6.5）過濾，置于棕色樣品瓶（6.7）中，待測定。7.3空白試樣的制備用實(shí)驗(yàn)用水代替樣品按照試樣制備（7.2）相同操作步驟，制備空白試樣。8分析步驟柱溫：40℃；表1液相色譜流動相線性梯度洗脫程序DB21/T3286—2020正離子模式（ESI）；+離子化電壓：3000V；離子源溫度：120℃；檢測方式：MRM，多反應(yīng)監(jiān)測條件見表2。表2目標(biāo)化合物的多反應(yīng)監(jiān)測條件目標(biāo)化合物磺胺嘧啶檢測離子對（m/z）駐留時間（ms）錐孔電壓（V）碰撞電壓（V）251.0→92.0*20251.0→156.03015281628152815302030265.1→156.120265.1→108.1*磺胺甲基嘧啶磺胺二甲嘧啶磺胺間甲氧嘧啶磺胺甲惡唑353030279.1→92.2*20279.1→186.1281.1→92.1*20281.1→156.1254.0→92.2*20254.0→156.23035磺胺甲基嘧啶-13C6271.0→162.0*2028注：帶*的為定量離子對校準(zhǔn)8.2取一定量磺胺類抗生素標(biāo)準(zhǔn)使用液（5.5.2）于甲酸（5.3）水溶液中，制備至少5個濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)系列，磺胺類抗生素的質(zhì)量濃度分別為4.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L和100μg/L，每毫升標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中加入10.0μl內(nèi)標(biāo)使用液（5.5.4），貯存在棕色樣品瓶（6.7）中。將標(biāo)準(zhǔn)系列溶液按濃度由低到高的順序依次進(jìn)樣，以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中磺胺類抗生素的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，磺胺類抗生素的峰面積（或峰高）與內(nèi)標(biāo)物的峰面積（或峰高）比值和內(nèi)標(biāo)物濃度的乘積為縱坐標(biāo)，繪制校準(zhǔn)曲線。DB21/T3286—2020圖1磺胺類抗生素和內(nèi)標(biāo)物的總離子流圖（注：1：磺胺嘧啶、2：磺胺甲基嘧啶、3：磺胺甲基嘧啶-C6、4：磺胺二甲嘧啶、5：磺胺間甲氧嘧13啶、6：磺胺甲惡唑）8.3測定按照與校準(zhǔn)曲線的建立（8.1）相同的參考條件，進(jìn)樣10μl，進(jìn)行試樣（7.2）的測定。注：若樣品中磺胺類抗生素濃度過高，超出校準(zhǔn)曲線范圍，應(yīng)稀釋后測定，采用甲酸（5.3）水溶液進(jìn)行稀釋。按照與校準(zhǔn)曲線的建立（8.1）相同的參考條件，進(jìn)樣10μl，進(jìn)行空白試樣（7.3）的測定。9按照表2中確定的母離子和子離子進(jìn)行檢測，在相同實(shí)驗(yàn)條件下，試樣中磺胺類抗生素的保留時間與標(biāo)準(zhǔn)樣品中磺胺類抗生素的保留時間相對偏差的絕對值應(yīng)小于2.5%；且待測樣品中定性離子的相對豐度（Ksam）與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液中對應(yīng)的定性離子相對豐度（Kstd）進(jìn)行比較，所得偏差在表3規(guī)定的最大允許偏差范圍內(nèi)，則可判定為樣品中存在磺胺類抗生素。A=2×100%...........................................（1）DB21/T3286—2020A1——樣品中磺胺類抗生素定量離子的峰面積（或峰高）。AKstd=std2×100%..........................................（2）Astd1式中：Kstd——標(biāo)準(zhǔn)樣品中磺胺類抗生素定性離子的相對豐度，%；Astd2——標(biāo)準(zhǔn)樣品中磺胺類抗生素定性離子的峰面積（或峰高）；Astd1——標(biāo)準(zhǔn)樣品中磺胺類抗生素酸定量離子的峰面積（或峰高）。表3定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差KstdK相對于K的最大允許偏差samstdKstd＞5020＜Kstd≤5010＜Kstd≤20Kstd≤1020%25%30%50%9.2定量分析當(dāng)磺胺類抗生素采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行定量時，樣品中磺胺類抗生素的質(zhì)量濃度ρx按公式（3）計(jì)算：1Vρ1——計(jì)算磺胺類抗生素的峰面積（或峰高）與內(nèi)標(biāo)物的峰面積（或峰高）比值和內(nèi)標(biāo)物濃度的D——樣品稀釋倍數(shù)。當(dāng)測定結(jié)果小于1mg/L時，保留至小數(shù)點(diǎn)后三位；當(dāng)測定結(jié)果大于或等于1mg/L時，保留三位有效數(shù)字。3家實(shí)驗(yàn)室分別對磺胺類抗生素的加標(biāo)濃度為0.050μg/L和0.500μg/L的地表水、廢水和海水進(jìn)DB21/T3286—2020地表水實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在5.9%~10%、4.3%~12%之間，實(shí)驗(yàn)室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在1.5%~4.2%、0.6%~1.6%之間，重復(fù)性限分別在0.009μg/L~0.011μg/L、0.065μg/L~0.078μg/L之間，再現(xiàn)性限分別在0.009μg/L~0.012μg/L、0.065μg/L~0.078μg/L之間。廢水實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在5.0%~10%、3.4%~8.4%之間，實(shí)驗(yàn)室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在1.3%~4.5%、0.7%~2.9%之間，重復(fù)性限分別在0.009μg/L~0.011μg/L、0.066μg/L~0.077μg/L之間，再現(xiàn)性限分別在0.010μg/L~0.011μg/L、0.066μg/L~0.077μg/L之間。海水實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在5.1%~10%、4.3%~7.4%之間，實(shí)驗(yàn)室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在0.6%~4.1%、0.3%~1.3%之間，重復(fù)性限分別在0.008μg/L~0.0010μg/L、0.070μg/L~0.079μg/L之間，再現(xiàn)性限分別在0.008μg/L~0.010μg/L、0.071μg/L~0.079μg/L之間，具體見附錄A中表A.1。10.2準(zhǔn)確度3家實(shí)驗(yàn)室分別對磺胺類抗生素的加標(biāo)濃度為0.050μg/L和0.500μg/L的地表水、廢水和海水進(jìn)行了6次重復(fù)測定，其中地表水加標(biāo)回收率范圍在80.2%~87.3%、86.8%-90.7%之間；廢水加標(biāo)回收率范圍在79.1%~87.9%、84.1%-93.8%之間；海水加標(biāo)回收率范圍在81.8%~87.9%、88.2%-92.1%之間，具體見附錄A中表A.2。11質(zhì)量保證和質(zhì)量控制校準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)r≥0.995，否則應(yīng)重新繪制校準(zhǔn)曲線；每批樣品（≤20個）應(yīng)測定一個曲線中每批樣品應(yīng)至少測定10%的平行雙樣，樣品數(shù)量少于10個時，應(yīng)至少測定一個平行雙樣，平行雙樣每批樣品應(yīng)至少測定5%的基體加標(biāo)樣品，樣品數(shù)量少于20個時，應(yīng)至少測定一個基體加標(biāo)樣品，加實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)生的廢液和廢物應(yīng)分類收集和保管，委托有資質(zhì)的單位進(jìn)行處理。DB21/T3286—2020附錄A（資料性附錄）方法的精密度和準(zhǔn)確度三家實(shí)驗(yàn)室分別對2種不同濃度的樣品進(jìn)行了測定。精密度和準(zhǔn)確度結(jié)果見表A.1和表A.2。表A.1方法的精密度精密度統(tǒng)計(jì)結(jié)果實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（%）實(shí)驗(yàn)室間加標(biāo)濃度重復(fù)性限r(nóng)（μg/L）再現(xiàn)性限樣品類型化合物名稱相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（μg/L）R（μg/L）（%）0.0500.5000.0500.5000.0500.5000.0500.5000.0500.5000.0500.5000.0500.5000.0500.5000.0500.5000.0500.5000.0500.5000.0500.5000.0500.5000.0500.5006.5~104.6~5.76.7~103.60.73.90.84.21.31.50.64.01.62.72.61.32.93.01.74.50.71.81.03.70.33.61.14.10.61.60.60.0090.0650.0100.0780.0110.0730.0090.0660.0090.0740.0100.0760.0100.0770.0100.0690.0090.0770.0110.0660.0090.0730.0090.0770.0080.0710.0090.0790.0090.0650.0100.0780.0120.0730.0090.0660.0100.0740.0100.0770.0100.0790.0100.0690.0100.0770.0110.0660.0090.0730.0090.0770.0080.0710.0090.079磺胺嘧啶磺胺甲基嘧啶磺胺二甲嘧啶5.7~7.27.8~12地表水5.2~6.35.9~9.64.3~5.86.2~9.85.5~6.77.2~9.53.4~7.25.1~9.63.5~8.45.8~10磺胺對甲氧嘧啶廢水海水DB21/T3286—20200.0500.5006.0~104.11.30.0100.0100.070磺胺甲惡唑4.9~6.