醫(yī)院實驗室信息管理程序人民醫(yī)院檢驗科管理文件人民醫(yī)院質(zhì)量管理體系文件 生化標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

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生化標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程第2頁共259頁

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生

化

標(biāo)

準(zhǔn)

操

作

規(guī)

程

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主題內(nèi)容臨床標(biāo)本采集程序第3頁共259頁

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臨床標(biāo)本采集程序

1.目的：

規(guī)范臨床標(biāo)本的采集，減少實驗前的影響因素。

2.范圍：

適用于為協(xié)助疾病診斷和治療而進(jìn)行的臨床生化樣品采集活動。臨床樣本包括血液、尿

液、胸腹水等各種體液。

3.職責(zé)：

臨床生化實驗室：指導(dǎo)臨床各科室正確采集標(biāo)本，提高實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4.程序：

4.1靜脈血的采集：

4.1.1靜脈血標(biāo)本采集前病人應(yīng)注意的問題：

4.1.1.1避免劇烈運動，一般主張抽血前24小時不做劇烈運動，清晨取血，住院病人可在

起床前抽血，匆忙趕到門診的人應(yīng)至少休息15分鐘后取血。

4.1.1.2注意合理飲食。除了急診或其它特殊原因外，一般主張在禁食12小時后空腹取血,

延長空腹時間（饑餓）或餐后血液的化學(xué)成分都會變化.飲酒對實驗亦有影響。

4.1.1.3藥物的影響。很多的藥物進(jìn)入人體后可影響某些化驗項目的結(jié)果，病人在化驗前

應(yīng)盡可能停服對實驗有干擾的藥物。

4.1.2靜脈血標(biāo)本采集前醫(yī)生、護(hù)士應(yīng)注意的問題：

4.1.2.1.檢驗申請單填寫要求：檢驗申請單用鋼筆或黑筆填寫，使用正楷字，字跡清楚,

填寫完整。填寫內(nèi)容包括：受檢者姓名、性別、年齡、臨床診斷、送檢標(biāo)本、檢驗項目、標(biāo)

本采集年月日時、申請醫(yī)生及采樣者簽名。

4.1.2.2采用一次性真空采血管，多項化驗時應(yīng)首先將血注入血常規(guī)管，然后是抗凝管（注

意要正確使用抗凝劑），最后是非抗凝管。

4.1.2.3采血時的體位建議以坐位5分鐘后取血為宜，止血帶使用應(yīng)少于1分鐘，以免引

起血液淤滯，造成血管內(nèi)溶血或血液某些成分的改變。

4.1.2.4當(dāng)一側(cè)手臂輸液時應(yīng)從對側(cè)手臂取血，以降低對血糖、血鉀等實驗結(jié)果的影響。

4.1.2.5血標(biāo)本應(yīng)防止溶血，影響溶血的因素有:使用止血帶時間過長；抗凝管使用不當(dāng)或

抗凝混合時過度振蕩；容器污染；血液中泡沫注入試管；標(biāo)本放置時間過長；突然受冷或受

熱及離心力過大等。

4.1.3靜脈血標(biāo)本采集后實驗室應(yīng)注意的問題：

4.1.3.1標(biāo)本采集后應(yīng)及時分離血清，標(biāo)本應(yīng)盡快檢驗。

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主題內(nèi)容臨床標(biāo)本采集程序第4頁共259頁

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4.1.3.2標(biāo)本應(yīng)避免光直接照射。

4.1.3.3實驗室溫度應(yīng)保持在15℃—25℃,防止標(biāo)本水分蒸發(fā)，標(biāo)本濃縮。

4.1.4血脂測定標(biāo)本的采集

4.1.4.1除總膽固醇（）測定不一定用空腹血外，測定甘油三脂、脂蛋白與載脂蛋白時應(yīng)

禁食（可少量飲水）至少12小時后抽血。

4.1.4.224小時內(nèi)不飲酒，以免影響甘油三脂水平。

4.1.4.3對于體檢對象抽血前應(yīng)有2周時間保持平時的飲食習(xí)慣，近期內(nèi)體重穩(wěn)定，無急

性病、外傷、手術(shù)等意外情況。

4.1.4.妊娠后期各項血脂都會增高,應(yīng)在產(chǎn)后或終止哺乳后3個月查血才能反映其基本血

脂水平。

4.1.4.5注意有無應(yīng)用影響血脂的藥物，如降血脂藥、避孕藥、嘎嗪類利尿劑、B受體阻

滯劑、免疫抑制劑、某些降壓藥、降糖藥、胰島素及其它激素制劑等，在查血以前應(yīng)根據(jù)所

用藥物的特性停止用藥數(shù)天或數(shù)周，否則應(yīng)記錄有關(guān)藥物的情況。

4.1.4.6對體檢對象及作前瞻性觀察者，應(yīng)注意采血的季節(jié)，因為血脂水平有季節(jié)性變動。

4.1.5采血操作步驟：參見《靜脈采血程序》

4.1.6真空采血管的正確使用：肝功、腎功、血脂、電解質(zhì)、體免1、風(fēng)濕三項、心肌

酶譜常規(guī)生化使用紅色管（沒有抗凝劑管）；血氨、糖化血紅蛋白、心肌損傷三項使用紫頭

管（EDTA抗凝）。

4.2動脈血標(biāo)本采集:用于血氣分析

4.2.1用一次性肝素化注射器，從患者動脈取血后，用一塊小橡皮塞針頭以隔絕空氣，并

將注射器放在手中雙手來回搓動，充分混勻。

4.2.2抽血過程中出現(xiàn)的小氣泡須在抽血后立即排出，血液不得放置過久，應(yīng)立即送檢，

塑料注射器常溫下在采血后15nlin內(nèi)完成檢測。若超時，就必須使用玻璃注射器，抽血后排

除氣泡封閉，置于4-8℃冰箱或冰水混合物中，可以穩(wěn)定lh。

4.2.3若自制肝素化注射器，應(yīng)避免注入過多的肝素溶液，使測定結(jié)果產(chǎn)生偏差。

4.2.4請注明病人體溫、Hb含量、及吸氧流速。

4.2.5采血步驟：參見《動脈采血程序》。

4.3門診常規(guī)生化檢查星期一到星期五抽取靜脈血，周末只采急診項目進(jìn)行檢測。

4.4尿液標(biāo)本的留取：

4.4.124小時尿液標(biāo)本：

4.4.1.1準(zhǔn)備清潔干燥帶蓋的廣口容器。

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臨床標(biāo)本采集程序第5頁共259頁

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4.4.1.2病人于晨7時將尿全部排盡棄去，然后開時留尿液，將24小時內(nèi)歷次所排尿液均

留于容器中，包括次日晨7小時所排最后一次尿。

4.4.1.3測量尿液總量（ml數(shù)）并記錄在化驗單匕將全部尿液混勻后取10-20ml置于清潔

干燥容器中立即送檢。

4.4.1.4若天氣炎熱，可根據(jù)檢驗要求在第一次尿液倒入后再加入適量防腐劑：甲苯（二甲

苯）：用于尿液生化檢驗，按甲苯0.5ml/100ml尿加入。

4.4.1.524小時尿中不能混入異物。

4.4.2常規(guī)尿檢查標(biāo)本：

4.4.2.1使用清潔干燥容器，住院病人以清晨第一次尿為主，門、急診患者可隨時留取新

鮮尿液10-20ml送檢。

4.4.2.2標(biāo)本應(yīng)及時送檢。

4.4.2.3尿中不能混入異物。

4.5腦脊液、漿膜腔積液：

4.5.1送檢和檢查必須及時。

4.5.2為防止凝固，加入100g/L的EDTA鈉鹽0.1ml可抗凝6ml。

5.相關(guān)文件

《靜脈采血程序》《動脈采血程序》《生化室標(biāo)本管理程序》

《不合格標(biāo)本登記表》

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生化室儀器性能評價生效日期：20120101

主題內(nèi)容

操作程序第6頁共259頁

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生化室儀器性能評價操作程序

1.目的：

為了監(jiān)測生化分析儀的技術(shù)性能，評價其精密度、準(zhǔn)確度等是否能達(dá)到有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。

2.范圍：

臨床生化分析儀器

3.評價指標(biāo)及方法：

3.1儀器精密度評價：根據(jù)美國國家實驗室標(biāo)準(zhǔn)委員會（NCCLS）EP5-A文件的要求分為如

下步驟：

3.1.1儀器熟習(xí)階段：用5天時間熟習(xí)儀器的日常操作、調(diào)試、維護(hù)和保養(yǎng)等程序。

3.1.2熟習(xí)文件階段：熟習(xí)NCCLS文件關(guān)于精密度評價的內(nèi)容，時間5天，內(nèi)容包括評價

目的、要求、方法、試驗步驟、統(tǒng)計處理、注意事項和常規(guī)質(zhì)量控制等。

3.1.3實驗設(shè)計階段：根據(jù)文件要求設(shè)計試驗方案。包括在整個實驗中，使用的試劑、校準(zhǔn)

品和質(zhì)控品等等。

3.1.4實驗室評價階段：

3.1.4.1初步的精密度試驗：

在熟習(xí)和設(shè)計工作結(jié)束后，進(jìn)行一次批內(nèi)初步試驗。方法：連續(xù)測定一個適宜的試驗物

20次。計算結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。結(jié)果：如發(fā)現(xiàn)結(jié)果與期望結(jié)果嚴(yán)重不符，應(yīng)與制造

商聯(lián)系在問題得到解決后再繼續(xù)下一步正式試驗。

3.1.4.2正式精密度評價試驗：

根據(jù)設(shè)計的方案，選擇具有醫(yī)學(xué)決定水平正常和異常兩個濃度的混合血清樣本，該儀器

測定項目選定以后，對每個項目、每個濃度的樣本進(jìn)行雙份測定；每天進(jìn)行2批試驗，上、

下午各測定一次，每個項目連續(xù)測定20天。每批同時作質(zhì)控品的測定。將所測定結(jié)果進(jìn)行

統(tǒng)計學(xué)處理，計算批內(nèi)、批間精密度和總精密度。

3.1.5結(jié)果計算：

3.1.5.1批內(nèi)精密度的評價按下公式計算：

I2

X￡(Xg-Xj

9]卜]____________

SM=S

WT41

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1=總天數(shù)（20天）

j=一天內(nèi)的批數(shù)（2批）

Xi“=重復(fù)1次結(jié)果，j批在第i天

X“z=重復(fù)2次結(jié)果，j批在第i天

3.1.5.2總精密度評價按以下公式計算：

E（4-

A=、...........-

N21

S=A2-S批內(nèi)>2

1=天數(shù)（2批/天）

Xu=第i天第1批的平均結(jié)果（平均重復(fù)2次）

X,z尸第i天第2批的平均結(jié)果（平均重復(fù)2次）

B=

S天同2=B2-A2/2

1=天數(shù)（2批/天）

乂.=第i天所有結(jié)果的平均值

Xi=所有結(jié)果的平均值

SJ=S批內(nèi)2+S?2+S^2=（2B2+A2+Swr2）/2

3.1.5結(jié)論：批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差s應(yīng)為美國臨床試驗室室間質(zhì)量評價允許誤差（TE）的1/4,

天間標(biāo)準(zhǔn)差S應(yīng)為該允許誤差的1/3,對達(dá)到這樣要求的可認(rèn)為它的隨機誤差屬于可接受的

低水平。

3.2儀器準(zhǔn)確度評價：根據(jù)美國國家實驗室標(biāo)準(zhǔn)委員會（NCCLS）EP9-A2文件的要求分為

如下步驟：

3.2.2熟習(xí)文件階段：用5天時間熟習(xí)儀器的日常操作、調(diào)試、維護(hù)和保養(yǎng)等程序。

熟習(xí)NCCLS文件關(guān)于準(zhǔn)確度評價的內(nèi)容，時間5天，內(nèi)容包括評價目的、要求、方法、

試驗步驟、統(tǒng)計處理、注意事項和常規(guī)質(zhì)量控制等。

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3.2.3設(shè)計階段：根據(jù)文件要求設(shè)計試驗方案。包括在整個實驗中，使用試劑、校準(zhǔn)品

和質(zhì)控品等等。

3.2.4實驗室評價階段：根據(jù)設(shè)計的方案，分析系統(tǒng)為評價儀器+配套的試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)

控品，作為試驗方法，對比系統(tǒng)為對比儀器+與分析系統(tǒng)相同的試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品，作

為對比方法試驗，收集分析物濃度在醫(yī)學(xué)決定水平范圍內(nèi)均勻分布的當(dāng)天新鮮血清，不要使

用已知對任一實驗有干擾的樣本（如溶血），測定從低于參考范圍的低限到高于參考范圍的

高限進(jìn)行。每個項目至少選擇40份臨床樣本，每天測8個樣本，將樣本按次序排列，分別

在評價儀器和對比儀器上測試，先測試一遍，每個樣本測雙份，做雙份第2次測定時，樣本

順序全部倒過來。第一次序號為1、2、3、4、5、6、7、8,第2次序號為8、7、6、5、4、

3、2、1連續(xù)測定5天時間。將評價儀器測定結(jié)果分別與對比儀器的測定結(jié)果作好記錄進(jìn)

行比較，用SPSS統(tǒng)計軟件，作統(tǒng)計學(xué)處理，作預(yù)期偏差分析和相關(guān)回歸分析，并計算相關(guān)

性和準(zhǔn)確度分析。

3.2.5實驗數(shù)據(jù)的收集和處理：

3.2.5.1對實驗數(shù)據(jù)的初步檢查：設(shè)參比方法測定結(jié)果為x值，試驗方法測定結(jié)果為y值,

40份樣本得到80個x和y對應(yīng)結(jié)果。檢查結(jié)果有無離群值表現(xiàn)。計算每一樣本每一方法成

對結(jié)果的差值和差值的均值。以4倍的各方法的差值的均值為判斷限，各方法內(nèi)樣本的成對

差值在限值內(nèi)，說明雙份測定結(jié)果符合要求。若原始數(shù)據(jù)的40份樣本結(jié)果，有剔除的數(shù)據(jù)

應(yīng)另做實驗補上。若最大差異超過臨床允許誤差，認(rèn)真查找原因，停止繼續(xù)實驗。

3.2.5.2數(shù)據(jù)作圖：目視判斷作兩張圖。一張散點圖：Y軸：試驗方法每樣本雙份測定的

均值；X軸：對比方法每樣本雙份測定的均值。另一張作偏差圖：Y軸：每樣本兩種方法雙

份測定的均值差；X軸：對比方法每樣本雙份測定的均值，以直線X=0作為水平中線作圖。

從這兩張圖中了解線性關(guān)系、有無明顯的離群點、是否呈恒定變異等情況。若實驗結(jié)果有良

好的線性關(guān)系，則可繼續(xù)。若實驗點分布呈非線性關(guān)系，則需尋找修正點修正后方可繼續(xù)進(jìn)

行以下數(shù)據(jù)處理。

3.2.5.3相關(guān)性分析：根據(jù)以上得出的r值，用r值檢驗x取值范圍是否適當(dāng)。要求r大

于或等于0.975（或大于或等于0.95）,則認(rèn)為x范圍是適合的；若r小于0.975,再多

作實驗，擴大數(shù)據(jù)范圍。

3.2.5.4回歸分析：用直線回歸分析方法來估計斜率和截距。對40份樣本，80對（x?、牛?/p>

數(shù)據(jù)以回歸式y(tǒng)=bx+a表示這些數(shù)據(jù)的直線趨勢。理想的結(jié)果b=l、a=0,若bWl、aWO表

示兩方法間在測定樣本時的系統(tǒng)誤差。根據(jù)臨床使用要求，b接近1,a接近0,可在各個臨

床決定水平濃度Xc處，了解y方法引入后相對于x方法的系統(tǒng)誤差（SE）,SE=I（b-1）Xc+a

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3.2.5.5計算預(yù)期偏差Be及其可信區(qū)間：估算測定項目在給定的醫(yī)學(xué)決定水平Xc處的預(yù)期

偏差Be,按下式計算：Bc=a+(b-l)Xc,預(yù)期偏差95%的可信區(qū)間，按下式計算：

及通1]=Be±2Sy.x

3ZZ(x.-x)2

反仇-婿或=歸―廠包)

S-=V2N-2-SyW-VN-2

Be為預(yù)期偏差Syx為回歸線標(biāo)準(zhǔn)差

3.4.5.6配對t檢驗：試驗方法測得的結(jié)果與對比方法測得的結(jié)果作配對t檢驗，求出t

和P值。若P值大于0.05,說明兩方法測定結(jié)果無顯著性差異，準(zhǔn)確性好，試驗方法符合

臨床要求，可接受。

3.2.6結(jié)論：以美國臨床實驗室修正法規(guī)時室間評估的允許誤差為判斷依據(jù)，由方法學(xué)比

較評估的系統(tǒng)誤差(SE)不大于允許誤差，認(rèn)為該儀器的系統(tǒng)誤差屬于可接受的低水平。

3.3儀器攜帶污染率：

3.3.1目的：為了監(jiān)測測定含量高的樣本后在測定含量低的樣本所產(chǎn)生的影響。

3.3.2方法：為避免測高值標(biāo)本后再測定低值標(biāo)本時所產(chǎn)生的影響，在做攜帶污染率試驗

前，先測一定數(shù)量標(biāo)本，使測定數(shù)值達(dá)到穩(wěn)定，然后取一份高值標(biāo)本，連續(xù)測定3次(。、

i2.is),隨后立即取一份低值標(biāo)本連續(xù)測定3次5、j2,j3)?o

3.3.3.結(jié)果計算：按Biouqnton法求出攜帶交叉污染率計算公式，然后算出平均攜帶污染

率。

攜帶污染率=(jrj3)/(i3T3)*100%

3.3.4結(jié)論：平均攜帶污染率根據(jù)臨床實驗要求在一般生化分析儀在2%范圍內(nèi)屬于可接受,

全直動生化分析儀要求在0.5%范圍內(nèi)可接受。

3.4儀器線性評價：

3.4.1目的：評價該儀器線性范圍。

3.4.2收集樣木：選擇與實際測定的樣本相一致的樣本作為線性評價的樣本(如病人的混

合血清)，用病人的混合樣本加入分析物作為高值樣本或臨界異常高值樣本，用臨床異常樣

本選為低值樣本。

3.4.3濃度范圍的確定：以分析項1=1的線性要求為準(zhǔn)。線性評價選擇5個不同濃度，先選擇

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低值和高值樣本各一個，低值樣本為1號，高值樣本為5號，兩者3:1混勻為2號，等份混

勻為3號，1:3混勻為4號，2?4號樣本的濃度按下式計算：

樣本濃度=C|V,+C5V5

V,+V5

C,代表1號低色什令小凌V）代表所取1號低值樣本體積

c5代表5號高值樣本濃度v5代表所取5號低值樣本體積

3.4.4.評價方法：5個不同濃度的樣本，分析當(dāng)天完成。一天內(nèi)作2次測定，第一次從低

濃度到高濃度樣，每個實驗樣品作3次重復(fù)測定；第二次從高濃度到低濃度，每個實驗樣品

作3次重復(fù)測定。記錄所有的結(jié)果作數(shù)據(jù)處理。

3.4.5結(jié)果的統(tǒng)計學(xué)處理：根據(jù)實驗樣品的配制稀釋關(guān)系，計算出各實驗樣品內(nèi)含分析物

的濃度，為這些樣品的預(yù)期值。將這些樣品再經(jīng)測定方法檢測，得到個檢測值。按以上實驗

要求，對每個樣本作6次重復(fù)測定，得6個實測值，它們和預(yù)期值形成6對預(yù)期值、實測值。

采用直線回歸方程對數(shù)據(jù)作統(tǒng)計，以預(yù)期值作橫坐標(biāo)，實測值作縱坐標(biāo)，得直線回歸Y=bx+a。

3.4.6結(jié)論：若b很接近1,a近于0,說明儀器的線性范圍較好，能滿足臨床要求，在線

性范圍內(nèi)測定值和預(yù)期值相關(guān)良好，相關(guān)系數(shù)大于0.975,線性評價處于可接受范圍。

4.支持性文件

NCCLS(EP5-A)文件

NCCLS(EP9-A2)文件

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生化室試劑性能評價生效日期：20120101

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生化室試劑性能評價操作程序

1.目的：

為了監(jiān)測生化試劑的性能指標(biāo)，評價試劑分析結(jié)果的準(zhǔn)確性、精密性等，確保檢質(zhì)量。

2.范圍：

臨床生化實驗室生化試劑

3.評價指標(biāo)及方法：

3.1試劑精密度評價：根據(jù)美國國家實驗室標(biāo)準(zhǔn)委員會（NCCLS）EP5-A文件的要求分為如下

步驟：

3.1.1試劑盒熟習(xí)階段：用5天時間熟習(xí)試劑盒，包括以下內(nèi)容：使用說明書、測定原理、

試劑組成、適用儀器、樣本要求、測定定驟、計算公式、注意事項、儲存條件和有效期、參

考范圍、參考文獻(xiàn)、生產(chǎn)許可證、衛(wèi)藥準(zhǔn)字號、生產(chǎn)廠商、通訊地址、生產(chǎn)商電話號碼。

3.1.2熟習(xí)文件階段：熟習(xí)NCCLS文件關(guān)于精密度評價的內(nèi)容，時間5天，內(nèi)容包括評價

目的、要求、方法、試驗步驟、統(tǒng)計處理、注意事項和常規(guī)質(zhì)量控制等。

3.1.3實驗設(shè)計階段：根據(jù)文件要求設(shè)計試驗方案。包括在整個實驗中，使用的試劑、校

準(zhǔn)品和質(zhì)控品。

3.1.4實驗室評價階段：

3.1.4.1初步的精密度試驗：

在熟習(xí)和設(shè)計工作結(jié)束后，進(jìn)行一次批內(nèi)初步試驗。方法：連續(xù)測定一個適宜的試驗物

20次。計算結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。結(jié)果：如發(fā)現(xiàn)結(jié)果與期望結(jié)果嚴(yán)重不符，應(yīng)與制造

商聯(lián)系在問題得到解決后再繼續(xù)下一步正式試驗。

3.1.4.2正式精密度評價試驗：

根據(jù)設(shè)計的方案，選擇具有醫(yī)學(xué)決定水平正常和異常兩個濃度的混合血清樣本，該儀器

測定項目選定以后，對每個項目、每個濃度的樣本進(jìn)行雙份測定；每天進(jìn)行2批試驗，上、

下午各測定一次，每個項目連續(xù)測定20天。每批同時作質(zhì)控品的測定。將所測定結(jié)果進(jìn)行

統(tǒng)計學(xué)處理，計算批內(nèi)、批間精密度和總精密度。

3.1.5結(jié)果計算：

3.1.5.1批內(nèi)精密度的評價按下公式計算：

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I2

EE(X「X/

1-1j-1

Sm內(nèi)=Swr

41

1=總天數(shù)（20天）

j=一天內(nèi)的批數(shù)（2批）

Xim=重復(fù)1次結(jié)果，j批在第i天

Xw=重復(fù)2次結(jié)果，j批在第i天

3.1.5.2總精密度評價按以下公式計算:

E~4P

1=天數(shù)（2批/天）

*”.=第i天第1批的平均結(jié)果（平均重復(fù)2次）

X,z=第i天第2批的平均結(jié)果（平均重復(fù)2次）

E區(qū).-X..）2

B=4----------------------

NI-1

S^2=B2-A72

1=天數(shù)（2批/天）

X-=第i天所有結(jié)果的平均值

Xi二所有結(jié)果的平均值

222

S總2=S批內(nèi)2+S批間2+S天間2二（2B+A+Swr）/2

3.1.5結(jié)論：批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差s應(yīng)為美國臨床試驗室室間質(zhì)量評價允許誤差（TE）的1/4,

天間標(biāo)準(zhǔn)差s應(yīng)為該允許誤差的1/3,對達(dá)到這樣要求的可認(rèn)為它的隨機誤差屬于可接受的

低水平。

3.2試劑準(zhǔn)確度評價：根據(jù)美國國家實驗室標(biāo)準(zhǔn)委員會（NCCLS）EP9-A2文件的要求分為

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如下步驟：

3.2.1熟習(xí)文件階段：用5天時間熟習(xí)試劑盒，包括以下內(nèi)容：使用說明書、測定原理、試

劑組成、適用儀器、樣本要求、測定定驟、計算公式、注意事項、儲存條件和有效期、參考

范圍、參考文獻(xiàn)、生產(chǎn)許可證、衛(wèi)藥準(zhǔn)字號、生產(chǎn)廠商、通訊地址、生產(chǎn)商電話號碼。

3.2.2熟習(xí)文件階段：熟習(xí)NCCLS文件關(guān)于準(zhǔn)確度評價的內(nèi)容，時間5天，內(nèi)容包括評價目

的、要求、方法、試驗步驟、統(tǒng)計處理、注意事項和常規(guī)質(zhì)量控制等。

3.2.3設(shè)計階段：根據(jù)文件要求設(shè)計試驗方案。包括在整個實驗中，使用的試劑、校準(zhǔn)品和

質(zhì)控品。

3.2.4實驗室評價階段：根據(jù)設(shè)計的方案，分析系統(tǒng)為評價試劑+配套的儀器、校準(zhǔn)品、質(zhì)

控品，作為試驗方法，對比系統(tǒng)為對比試劑+與分析系統(tǒng)相同的儀器、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品，作

為對比方法試驗，收集分析物濃度在醫(yī)學(xué)決定水平范圍內(nèi)均勻分布的當(dāng)天新鮮血清，不要使

用己知對任一實驗有干擾的樣本（如溶血），測定從低于參考范圍的低限到高于參考范圍的

高限進(jìn)行。每個項目至少選擇40份臨床樣本，每天測8個樣本，將樣本按次序排列，分別

在評價儀器和對比儀器上測試，先測試一遍，每個樣本測雙份，做雙份第2次測定時，樣本

順序全部倒過來。第一次序號為1、2、3、4、5、6、7、8,第2次序號為8,7、6、5、4、

3、2、1。連續(xù)測定5天時間。將評價儀器測定結(jié)果分別與對比儀器的測定結(jié)果作好記錄進(jìn)

行比較，用SPSS統(tǒng)計軟件，作統(tǒng)計學(xué)處理，作預(yù)期偏差分析和相關(guān)回歸分析，并計算相關(guān)

性和準(zhǔn)確度分析。

3.2.5實驗數(shù)據(jù)的收集和處理：

3.2.5.1對實驗數(shù)據(jù)的初步檢查：設(shè)參比方法測定結(jié)果為x值，試驗方法測定結(jié)果為y值,

40份樣本得到80個x和y對應(yīng)結(jié)果。檢查結(jié)果有無離群值表現(xiàn)。計算每一樣本每一方法成

對結(jié)果的差值和差值的均值。以4倍的各方法的差值的均值為判斷限，各方法內(nèi)樣本的成對

差值在限值內(nèi)，說明雙份測定結(jié)果符合要求。若原始數(shù)據(jù)的40份樣本結(jié)果，有剔除的數(shù)據(jù)

應(yīng)另做實驗補上。若最大差異超過臨床允許誤差，認(rèn)真查找原因，停止繼續(xù)實驗。

3.2.5.2數(shù)據(jù)作圖：目視判斷作兩張圖。一張散點圖：Y軸：試驗方法每樣本雙份測定的

均值；X軸：對比方法每樣本雙份測定的均值。另一張作偏差圖：Y軸：每樣本兩種方法雙

份測定的均值差；X軸：對比方法每樣本雙份測定的均值，以直線X=0作為水平中線作圖。

從這兩張圖中了解線性關(guān)系、有無明顯的離群點、是否呈恒定變異等情況。若實驗結(jié)果有良

好的線性關(guān)系，則可繼續(xù)。若實驗點分布呈非線性關(guān)系，則需尋找修正點修正后方可繼續(xù)進(jìn)

行以下數(shù)據(jù)處理。

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3.2.5.3相關(guān)性分析：根據(jù)以上得出的r值，用r值檢驗x取值范圍是否適當(dāng)。要求r大

于或等于0.975（或/大于或等于0.95）,則認(rèn)為x范圍是適合的；若r小于0.975,再多

作實驗，擴大數(shù)據(jù)范圍。

3.2.5.4回歸分析：用直線回歸分析方法來估計斜率和截距。對40份樣本，80對（x小皿）

數(shù)據(jù)以回歸式y(tǒng)=bx+a表示這些數(shù)據(jù)的直線趨勢。理想的結(jié)果b=l、a=0,若bWl、aWO表

示兩方法間在測定樣本時的系統(tǒng)誤差。根據(jù)臨床使用要求，b接近1,a接近0,可在各個臨

床決定水平濃度Xc處，了解y方法引入后相對于x方法的系統(tǒng)誤差（SE）,SE=|（b-1）Xc+a

I?

3.2.5.5計算預(yù)期偏差Be及其可信區(qū)間：估算測定項目在給定的醫(yī)學(xué)決定水平Xc處的預(yù)

期偏差Be,按下式計算：Bc=a+（b-l）Xc,預(yù)期偏差95%的可信區(qū)間，按下式計算：

?*及岫］=&±2沙/屆+y二

_IzXGj&J或="（%"

S-=V2N-2—SyW-VN.2

Be為預(yù)期偏差Syx為回歸線標(biāo)準(zhǔn)差

3.4.5.6配對t檢驗：試驗方法測得的結(jié)果與對比方法測得的結(jié)果作配對t檢驗，求出t

和P值。若P值大于0.05,說明兩方法測定結(jié)果無顯著性差異，準(zhǔn)確性好，試驗方法符合

臨床要求，可接受。

3.2.6結(jié)論：以美國臨床實驗室修正法規(guī)對室間評估的允許誤差為判斷依據(jù)，由方法學(xué)比

較評估的系統(tǒng)誤差（SE）不大于允許誤差，認(rèn)為該儀器的系統(tǒng)誤差屬于可接受的低水平。

3.3試劑穩(wěn)定性評價：

3.3.1目的：觀察試劑的穩(wěn)定性

3.3.2方法：將試劑密閉避光貯存在2?8℃和放在室溫下25℃,用該試劑（如凍干試劑復(fù)

溶后）在不同時間（開瓶后、復(fù)溶后和在儀器試劑倉內(nèi)）分別測定穩(wěn)定性好、均勻性好的樣

品（如質(zhì)控血清）各參數(shù)，穩(wěn)定觀察12個月，記錄測定結(jié)果。

3.3.3根據(jù)測定結(jié)果，計算出均值、cv值，根據(jù)時間和測定結(jié)果相關(guān)性分析和方差分析來

分析試劑的穩(wěn)定性。

3.3.4結(jié)論：根據(jù)臨床實驗要求，試劑2C?8c避光密閉儲存穩(wěn)定12個月，開蓋試劑在

試劑倉內(nèi)至少可穩(wěn)定2周。

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3.4試劑線性評價：

3.4.1目的：它是評價該試劑檢測線性范圍。

3.4.2收集樣本：作為線性評價的樣本應(yīng)與實際測定的樣本相一致(如血清)，可用病人的

混合樣本加入分析物作為高值樣本或臨異常高值樣本，用臨床異常低值樣本選為低值樣本。

3.4.3濃度范圍的確定：應(yīng)以分析項目的線性要求為準(zhǔn)。線性評價應(yīng)有5個不同濃度，可

選擇低值和高值樣本各一個，低值樣本為1號，高值樣本為5號，然后兩者3：1混勻為2號，

等份混勻為3號，1：3混勻為4號，2?4號樣本的濃度按下式計算：

C1V1+C5V5

樣本濃度=----------

V1+V5

C,代表1號低值樣本濃度V,代表所取1號低值樣本體積

Cs代表5號高值樣本濃度%代表所取5號低值樣本體積

3.4.4評價方法：5個不同濃度的樣本，分析要求當(dāng)天完成。建議一天內(nèi)作2次測定，第

一次從低濃度到高濃度，每個實驗樣品作3次重復(fù)測定；第二次從高濃度到低濃度，每個實

驗樣品作3次重復(fù)測定。綜合所有的結(jié)果作數(shù)據(jù)處理。

3.4.5結(jié)果的統(tǒng)計學(xué)處理：根據(jù)實驗樣品的配制稀釋關(guān)系，可以計算出各實驗樣品內(nèi)含分

析物的濃度，為這些樣品的預(yù)期值。將這些樣品再經(jīng)測定方法檢測，得到檢測值。按以上實

驗要求，對每個樣品作6次重復(fù)測定，得6個實測值，它們和預(yù)期值形成6對預(yù)期值、實測

值。采用直線回歸方式采用直線回歸方程對數(shù)據(jù)作統(tǒng)計，以預(yù)期值作橫坐標(biāo)，實測值作縱坐

標(biāo)，得直線回歸Y=bx+a。

3.4.6結(jié)論：若b很接近1,a近于0,說明試劑的線性范圍較好，能滿足臨床要求，在線

性范圍內(nèi)測定值和預(yù)期值相關(guān)良好，相關(guān)系數(shù)大于0.975,線性評價處于可接受范圍。

3.5試劑干擾試驗：

3.5.1目的：評價試劑盒是否受非分析物的影響及影響程度。

3.5.2干擾物的試驗濃度：內(nèi)源性干擾物應(yīng)為臨床樣本中可能出現(xiàn)的最高濃度。藥物和某

些代謝產(chǎn)物以治療量10倍的濃度進(jìn)行實驗。

3.5.3確定干擾的標(biāo)準(zhǔn)：以配對t檢驗0.05判斷允許范圍。

3.5.4實驗方法：采用配對t檢驗，選擇一份樣本一分為二，一份加入凝似干擾物作為測

定樣本(T),另一分不加作為對照樣本(C),如加入的干擾物為液體，對照樣本應(yīng)加同樣體

積的水，配制成5種濃度，最高濃度樣本為T,最低濃度樣本為C,5個系列濃度為：C、(3C+T)

/4、(C+T)/2、(C+3T)/4,做系列干擾值=X「X"列出所有結(jié)果供分析，計算95%可信區(qū)間：

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%95可信范圍=(XT-XC)±1.96*

S為方法批內(nèi)不精密度n為重復(fù)次數(shù)定量稀釋，各樣僅干擾物濃度不一，其它均相同,

所有樣品一起隨機排列在一批內(nèi)進(jìn)行，測定按下列順序C1、T1、C2、T2、C3、T3、C4、T4…….Cn、

Tn,重復(fù)測定3次，計算平均值。

3.5.5干擾分析：對測定和對照組各自進(jìn)行X和S的計算

3.5.6配對t檢驗：測定樣本和對照樣本作配對t檢驗，算出t值和p值大小。若p值大

于0.05,說明無顯著干擾，該試劑不受非分析物的影響；若p值小于0.01,說明有顯著干

擾，該試劑受非分析物的影響。

3.5.7結(jié)論：干擾值在對照組1.96s（95%可信限）范圍內(nèi)為無顯著干擾，可滿足臨床實驗

要求，若該試劑受非分析物干擾，可根據(jù)不同濃度測定的干擾值作直線回歸，分析濃度和干

擾的關(guān)系，最佳可信區(qū)間在干擾物濃度的中間水平。

3.6試劑回收試驗：

3.6.1目的：是測定比例系統(tǒng)誤差。

樣品的制備：制備樣品時，樣品中加入標(biāo)準(zhǔn)液后，總的濃度必在測定方法的分析范圍內(nèi)，

制作高、中、低不同濃度的樣本作回收試驗，計算平均回收率。加入標(biāo)準(zhǔn)液后，實驗樣品中

被測濃度要達(dá)到醫(yī)學(xué)上具有決定意義的濃度。加入標(biāo)準(zhǔn)液的體積在整個樣品中要少，在10%

以內(nèi)。

低值基礎(chǔ)樣品：血清2ml+蒸儲水0.1ml;

高值分析樣品：血清2ml+高值分析純品標(biāo)準(zhǔn)液0.1ml;

中值分析樣品：血清2ml+中值分析純品標(biāo)準(zhǔn)液0.1ml.

3.6.3方法：將被分析的純品標(biāo)準(zhǔn)液加入病人樣品中，制成高、中、低不同濃度的分析樣品，

然后用兩種分析方法分別測定3次，計算均值，根據(jù)兩者測定結(jié)果的差值計算回收率。

3.6.4回收率的計算：

加入濃度=標(biāo)準(zhǔn)濃度X標(biāo)準(zhǔn)液量（ml）

血清量ml+標(biāo)準(zhǔn)液量ml

回收濃度=分析樣品測得濃度一基礎(chǔ)樣品測得濃度

回收濃度

回收率（%）=______________X100%

加入濃度

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生化室試劑性能評價生效日期：20120101

主題內(nèi)容

操作程序第17頁共259頁

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3.6.5結(jié)論：理想的結(jié)果期望回收率達(dá)到100%,但實際測得的回收率有一定的比例誤差,

根據(jù)臨床實驗要求，平均回收率的標(biāo)準(zhǔn)誤差小于允許誤差，可接受。

4.支持性文件

NCCLS(EP5-A)文件

NCCLS(EP9-A2)文件

成都市第二人民醫(yī)院檢驗科生化文件編號：CDEY-LAB-SH-CZ04

SOP版本/修訂號:B/0

主題內(nèi)容生效日期：20120101

生化室校準(zhǔn)程序第18頁共259頁

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生化室校準(zhǔn)程序

1.目的

1.1保證測定值的誤差在允許范圍內(nèi)；

1.2實現(xiàn)測定結(jié)果的溯源性。

2.范圍

適用于AU2700、強生干式(VTR0S350)全自動生化分析儀。

3.職責(zé)

3.1操作者：負(fù)責(zé)校準(zhǔn)的實施和記錄。

3.2室組長：負(fù)責(zé)安排校準(zhǔn)，檢查校準(zhǔn)記錄。

3.3質(zhì)量負(fù)責(zé)人：負(fù)責(zé)檢查并監(jiān)督校準(zhǔn)記錄。

4.名詞概念

4.1校準(zhǔn)：在一定條件下的一系列操作來確定檢測儀器和檢測系統(tǒng)所指示的量值，或者某一

物質(zhì)，或者參考物質(zhì)所代表的值，與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)所認(rèn)識量之間的關(guān)系。

4.2校準(zhǔn)物/校準(zhǔn)品：準(zhǔn)備用于建立一個或多個定量值的任何物質(zhì)。

4.3溯源性：通過一條具有規(guī)定不確定度的不間斷比較鏈，使測量結(jié)果或測量標(biāo)準(zhǔn)的真值能

夠與規(guī)定的參考標(biāo)準(zhǔn)，通常是國家標(biāo)準(zhǔn)或國際標(biāo)準(zhǔn)聯(lián)系起來的一種特性。

5.校準(zhǔn)程序

5.1儀器校準(zhǔn)條件：

5.1.1儀器光路系統(tǒng)經(jīng)過光路保養(yǎng)或更換光源等重要部件后。

5.1.2儀器經(jīng)過大保養(yǎng)后。

5.1.3挪動儀器的安裝地點。

5.1.4更換試劑批號。

5.1.5室內(nèi)質(zhì)控失控。

5.2校準(zhǔn)品

5.2.1校準(zhǔn)品種類：見附表。

5.2.2AU2700校準(zhǔn)品準(zhǔn)備:

5.2.2.1校準(zhǔn)品的準(zhǔn)備：具體見附表，生化采用的定標(biāo)品種類相對較多，有干粉的、液體的。

干粉的定標(biāo)品按照其要求進(jìn)行復(fù)溶，復(fù)溶后在規(guī)定時間內(nèi)進(jìn)行定標(biāo)，所剩的分裝凍存，穩(wěn)定

的項目可以使用凍存的進(jìn)行定標(biāo)，不穩(wěn)定的項目可以使用其對結(jié)果進(jìn)行粗略的驗證。液體的

標(biāo)準(zhǔn)品在按照其規(guī)定保存溫度中進(jìn)行保存至效期，每次定標(biāo)前需按規(guī)定于室溫中放置相應(yīng)時

間，以保證校準(zhǔn)結(jié)果的可靠性。失效的標(biāo)準(zhǔn)品不能用于定標(biāo)校正。

文件編號：CDEY-LAB-SH-CZ04

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主題內(nèi)容生效日期：20120101

生化室校準(zhǔn)程序第19頁共259頁

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5.2.2.2定標(biāo)液的位置：藍(lán)色樣本架的1號位置放蒸儲水，黃色架子用于試劑項目定標(biāo)架，

各個項目的位置由專業(yè)組長或質(zhì)量管理員設(shè)置，具體參見附表，如需改變定標(biāo)品或定標(biāo)位置

需經(jīng)過專業(yè)組長決定。

5.2.3強生干式生化儀(VTR0S350)校準(zhǔn)品準(zhǔn)備

5.2.3.1現(xiàn)在我室采用的是強生配套的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行定標(biāo)，總共包括四套標(biāo)準(zhǔn)品，分別為KIT1

(BUN,Ca,CREA,GLU,M