《植物組織培養(yǎng)》課件 模塊一-2 實驗設備和培養(yǎng)條件

單元二實驗設備和培養(yǎng)條件技能目標掌握組織培養(yǎng)實技能目標驗室的設計；掌握組織培養(yǎng)常用的實驗儀器設備及其使用方法；掌握調(diào)控組織培養(yǎng)的主要環(huán)境條件。123任務導入在進行植物組織培養(yǎng)工作之前，首先應對工作中需要哪些最基本的設備條件有個全面的了解，以便因地制宜地利用現(xiàn)有房屋，或新建、改建實驗室。實驗室的大小取決于工作的目的和規(guī)模。以工廠化生產(chǎn)為目的，實驗室規(guī)模太小，會限制生產(chǎn)，影響效率。在設計組織培養(yǎng)實驗室時，應按組織培養(yǎng)程序來設計，避免某些環(huán)節(jié)倒排，引起日后工作混亂。植物組織培養(yǎng)是在嚴格無菌的條件下進行的。要做到無菌的條件，需要一定的設備、器材和用具，同時還需要人工控制溫度、光照、濕度等培養(yǎng)條件。任務導入AGlimpseofPlantTissueCulture任務導入實驗室設置及儀器

植物組織培養(yǎng)技術性很強，無菌條件很高，要求有最基本的實驗設備條件及熟悉一般操作技術才可以進行。去分化再分化整個操作核心是無菌操作。

要點：設備設施、培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件。

植物組織培養(yǎng)通常是外植體愈傷組織植株任務導入實驗室設計原則：保證無菌操作，達到工作方便，防止污染。實驗室組成：化學實驗室[準備室]、洗滌室、無菌室（接種室）、培養(yǎng)室、觀察室。任務導入圖1-12實驗室布局示意圖任務講解第一節(jié)實驗室第二節(jié)設備和器材第三節(jié)培養(yǎng)條件第一節(jié)實驗室實驗室要求

環(huán)境要求：理想的植物組織培養(yǎng)實驗室應該建立在安靜、清潔、遠離污染源的地方，最好在常年主風向的上風方向，盡量減少污染。規(guī)?；a(chǎn)的實驗室最好建在交通方便的地方，便于產(chǎn)品的運送。實驗室的建設均需考慮兩個方面的問題：一是所從事的實驗的性質(zhì)，即是生產(chǎn)性的還是研究性的，是基本層次的還是較高層次的；二是實驗室的規(guī)模，規(guī)模主要取決于經(jīng)費和實驗性質(zhì)。第一節(jié)實驗室

實驗室設置的基本原則是：科學、高效、經(jīng)濟和實用。一個植物組織培養(yǎng)實驗室必須滿足3個基本的需要：實驗準備（培養(yǎng)基制備、器皿洗滌、培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿滅菌）、無菌操作和控制培養(yǎng)。此外，還可根據(jù)所從事的實驗要求來考慮輔助實驗室及其各種附加設施，使實驗室更加完善。第一節(jié)實驗室一、洗滌室洗滌室用于完成玻璃器皿等儀器的清洗、干燥和貯存。室內(nèi)應配備大型水槽，最好是不銹鋼水槽。為防止碰壞玻璃器皿，可鋪墊橡膠。上下水道要暢通。備有塑料筐，用于運輸培養(yǎng)器皿。備有干燥架，用于放置干燥涮凈的培養(yǎng)器皿。視頻1-4洗滌第一節(jié)實驗室二、準備室準備室要求明亮、通風。在準備室內(nèi)要完成培養(yǎng)基制備。負責母液、培養(yǎng)基的配制、分裝、包扎和高壓滅菌等工作。第一節(jié)實驗室（1）大型中央工作臺（2）藥品柜（3）普通冰箱（4）電子分析天平和托盤天平（5）電蒸餾水器（6）磁力攪拌器（7）電爐或電飯鍋、鋁鍋。（8）酸度計（pH計）（9）高壓滅菌鍋（10）光照培養(yǎng)箱或人工氣候箱（11）烘箱干燥洗凈的玻璃器皿，也可用于干熱滅菌。用于干燥需保持80-100℃；進行干熱滅菌需保持150℃，達1-3h。第一節(jié)實驗室圖1-13準備室設備（a）第一節(jié)實驗室電子分析天平電子精密天平圖1-14準備室設備（b）第一節(jié)實驗室圖1-15準備室設備（c）第一節(jié)實驗室三、無菌室（接種室）主要用于植物材料的消毒、接種、試管苗的轉(zhuǎn)接以及一切需要進行無菌操作的技術程序。主要設備：紫外燈、超凈工作臺、酒精燈、接種器械（接種鑷子、剪刀、解剖刀、接種針）等。接種室宜小不宜大，一般7～8平米，要求地面、天花板及四壁盡可能密閉光滑，易于清潔和消毒。配置拉動門，以減少開關門時的空氣擾動。接種室要求1～2盞紫外燈，用以照射滅菌。最好安裝一小型空調(diào)，使室溫可控，這樣可使門窗緊閉，減少與外界空氣對流。接種室應設有緩沖間，進入無菌操作室前在此更衣?lián)Q鞋，以減少進出時帶入接種室雜菌。緩沖間最好也安一盞紫外燈。第一節(jié)實驗室圖1-16無菌室設備（a）第一節(jié)實驗室圖1-17無菌室設備（b）第一節(jié)實驗室圖1-18無菌室設備（c）第一節(jié)實驗室圖1-19無菌室設備（d）第一節(jié)實驗室圖1-20無菌室設備（e）第一節(jié)實驗室超靜工作臺圖1-21無菌室設備（f）第一節(jié)實驗室電子滅菌器電子火焰滅菌器圖1-22無菌室設備（g）第一節(jié)實驗室工作臺面圖1-23無菌室設備（h）第一節(jié)實驗室視頻1-5接種室操作第一節(jié)實驗室四、培養(yǎng)室培養(yǎng)室是將接種的材料進行培養(yǎng)生長的場所。培養(yǎng)室的大小可根據(jù)需要而定。其設計以充分利用空間和節(jié)省能源為原則。培養(yǎng)架大多由金屬制成，一般設5層，最低一層離地高約10cm，其他每層間隔30cm左右，培養(yǎng)架即高1.7m左右。培養(yǎng)架長度都是根據(jù)日光燈的長度而設計，如采用40W日光燈，則長1.3m，30W的長lm，寬度一般為60cm。第一節(jié)實驗室培養(yǎng)室最重要的因子是溫度，一般保持在20-27℃左右，安裝空調(diào)機。由于熱帶植物和寒帶植物等不同種類要求不同溫度，最好不同種類有不同的培養(yǎng)室。室內(nèi)濕度也要求恒定，相對濕度以保持在70％-80％為好（視情況），可安裝加濕器（除濕機）?？刂迫展庹諘r間可安裝定時開關鐘，一般需要每天光照10-16h?，F(xiàn)代組培實驗室大多設計為采用天然太陽光照作為主要能源，這樣不但可以節(jié)省能源，而且組培苗接受太陽光生長良好，馴化易成活。圖1-24培養(yǎng)室設備（a）第一節(jié)實驗室第一節(jié)實驗室圖1-25培養(yǎng)室設備（b）第一節(jié)實驗室圖1-26培養(yǎng)室設備（c）第一節(jié)實驗室圖1-27培養(yǎng)室設備（d）第一節(jié)實驗室圖1-28培養(yǎng)室設備（e）第二節(jié)設備和器材一、玻璃器皿二、器械用具視頻1-6玻璃器皿圖1-29玻璃器皿圖1-30器械用具第二節(jié)設備和器材視頻1-7組織培養(yǎng)設施設備第三節(jié)培養(yǎng)條件培養(yǎng)條件：光照、溫度、濕度、氣體成分一、溫度1.一般控制在25±2oC。

2.植株種類及外植體的不同，其最適溫度也是不同的。如百合20℃；月季24℃；番茄28℃。第三節(jié)培養(yǎng)條件二、光照

★影響細胞的增殖、組織和器官的分化。

★愈傷組織的誘導有的在光照下有促進作用；光照強，幼苗生長健壯；光照弱，幼苗生長弱小，容易徒長。第三節(jié)培養(yǎng)條件三、濕度

主要受到培養(yǎng)基含水量和封口膜透性的影響。如培養(yǎng)基過硬，則不利于外植體接觸和插入培養(yǎng)基，導致生長遲緩；封口膜過于透氣，也會使瓶內(nèi)濕度下降。第三節(jié)培養(yǎng)條件四、pH值1.培養(yǎng)基適宜PH值5-6.5，一般為5.8，調(diào)

整用0.1M的NaOH和HCl溶液。2.pH影響培養(yǎng)基的硬度。

pH

＞6.5培養(yǎng)基會變硬；

pH

＜5.0培養(yǎng)基不易凝固。3.滅菌之前，培養(yǎng)基的pH要比標準提高

0.2－0.3個單位。第三節(jié)培養(yǎng)條件表1-1不同植物的最適PH值杜鵑月季越桔胡蘿、石刁柏蠶豆桃番茄、葡萄4.05.84.56.05.57.05.7第三節(jié)培養(yǎng)條件五、氣體（必要條件）

1.培養(yǎng)瓶內(nèi)氧氣的充足與否與封口材料有關?？捎妹奕蛱刂频姆饪谒芰稀Ｍ庾詈玫氖敲奕?，但棉塞易使培養(yǎng)基干燥，夏季易引起污染。常用封口膜：聚丙烯耐高溫薄膜第三節(jié)培養(yǎng)條件五、氣體（必要條件）

2.培養(yǎng)基內(nèi)氧氣充足與否與培養(yǎng)基的種類和培養(yǎng)方式有關?！艄腆w培養(yǎng)基可加進活性炭來增加通氣度，以利于發(fā)根?！粢后w培養(yǎng)時，可考慮采取振蕩培養(yǎng)的方式，以增加通氣性。任務小結(jié)

組培實驗室包括洗滌室、準備室、無菌室（接種室）、培養(yǎng)室四部分；