《植物組織培養(yǎng)》課件 模塊一-2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備和培養(yǎng)條件

單元二實(shí)驗(yàn)設(shè)備和培養(yǎng)條件技能目標(biāo)掌握組織培養(yǎng)實(shí)技能目標(biāo)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)；掌握組織培養(yǎng)常用的實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備及其使用方法；掌握調(diào)控組織培養(yǎng)的主要環(huán)境條件。123任務(wù)導(dǎo)入在進(jìn)行植物組織培養(yǎng)工作之前，首先應(yīng)對(duì)工作中需要哪些最基本的設(shè)備條件有個(gè)全面的了解，以便因地制宜地利用現(xiàn)有房屋，或新建、改建實(shí)驗(yàn)室。實(shí)驗(yàn)室的大小取決于工作的目的和規(guī)模。以工廠化生產(chǎn)為目的，實(shí)驗(yàn)室規(guī)模太小，會(huì)限制生產(chǎn)，影響效率。在設(shè)計(jì)組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室時(shí)，應(yīng)按組織培養(yǎng)程序來(lái)設(shè)計(jì)，避免某些環(huán)節(jié)倒排，引起日后工作混亂。植物組織培養(yǎng)是在嚴(yán)格無(wú)菌的條件下進(jìn)行的。要做到無(wú)菌的條件，需要一定的設(shè)備、器材和用具，同時(shí)還需要人工控制溫度、光照、濕度等培養(yǎng)條件。任務(wù)導(dǎo)入AGlimpseofPlantTissueCulture任務(wù)導(dǎo)入實(shí)驗(yàn)室設(shè)置及儀器

植物組織培養(yǎng)技術(shù)性很強(qiáng)，無(wú)菌條件很高，要求有最基本的實(shí)驗(yàn)設(shè)備條件及熟悉一般操作技術(shù)才可以進(jìn)行。去分化再分化整個(gè)操作核心是無(wú)菌操作。

要點(diǎn)：設(shè)備設(shè)施、培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件。

植物組織培養(yǎng)通常是外植體愈傷組織植株任務(wù)導(dǎo)入實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)原則：保證無(wú)菌操作，達(dá)到工作方便，防止污染。實(shí)驗(yàn)室組成：化學(xué)實(shí)驗(yàn)室[準(zhǔn)備室]、洗滌室、無(wú)菌室（接種室）、培養(yǎng)室、觀察室。任務(wù)導(dǎo)入圖1-12實(shí)驗(yàn)室布局示意圖任務(wù)講解第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室第二節(jié)設(shè)備和器材第三節(jié)培養(yǎng)條件第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室要求

環(huán)境要求：理想的植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該建立在安靜、清潔、遠(yuǎn)離污染源的地方，最好在常年主風(fēng)向的上風(fēng)方向，盡量減少污染。規(guī)模化生產(chǎn)的實(shí)驗(yàn)室最好建在交通方便的地方，便于產(chǎn)品的運(yùn)送。實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)均需考慮兩個(gè)方面的問(wèn)題：一是所從事的實(shí)驗(yàn)的性質(zhì)，即是生產(chǎn)性的還是研究性的，是基本層次的還是較高層次的；二是實(shí)驗(yàn)室的規(guī)模，規(guī)模主要取決于經(jīng)費(fèi)和實(shí)驗(yàn)性質(zhì)。第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室

實(shí)驗(yàn)室設(shè)置的基本原則是：科學(xué)、高效、經(jīng)濟(jì)和實(shí)用。一個(gè)植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室必須滿足3個(gè)基本的需要：實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備（培養(yǎng)基制備、器皿洗滌、培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿滅菌）、無(wú)菌操作和控制培養(yǎng)。此外，還可根據(jù)所從事的實(shí)驗(yàn)要求來(lái)考慮輔助實(shí)驗(yàn)室及其各種附加設(shè)施，使實(shí)驗(yàn)室更加完善。第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室一、洗滌室洗滌室用于完成玻璃器皿等儀器的清洗、干燥和貯存。室內(nèi)應(yīng)配備大型水槽，最好是不銹鋼水槽。為防止碰壞玻璃器皿，可鋪墊橡膠。上下水道要暢通。備有塑料筐，用于運(yùn)輸培養(yǎng)器皿。備有干燥架，用于放置干燥涮凈的培養(yǎng)器皿。視頻1-4洗滌第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室二、準(zhǔn)備室準(zhǔn)備室要求明亮、通風(fēng)。在準(zhǔn)備室內(nèi)要完成培養(yǎng)基制備。負(fù)責(zé)母液、培養(yǎng)基的配制、分裝、包扎和高壓滅菌等工作。第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室（1）大型中央工作臺(tái)（2）藥品柜（3）普通冰箱（4）電子分析天平和托盤天平（5）電蒸餾水器（6）磁力攪拌器（7）電爐或電飯鍋、鋁鍋。（8）酸度計(jì)（pH計(jì)）（9）高壓滅菌鍋（10）光照培養(yǎng)箱或人工氣候箱（11）烘箱干燥洗凈的玻璃器皿，也可用于干熱滅菌。用于干燥需保持80-100℃；進(jìn)行干熱滅菌需保持150℃，達(dá)1-3h。第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室圖1-13準(zhǔn)備室設(shè)備（a）第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室電子分析天平電子精密天平圖1-14準(zhǔn)備室設(shè)備（b）第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室圖1-15準(zhǔn)備室設(shè)備（c）第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室三、無(wú)菌室（接種室）主要用于植物材料的消毒、接種、試管苗的轉(zhuǎn)接以及一切需要進(jìn)行無(wú)菌操作的技術(shù)程序。主要設(shè)備：紫外燈、超凈工作臺(tái)、酒精燈、接種器械（接種鑷子、剪刀、解剖刀、接種針）等。接種室宜小不宜大，一般7～8平米，要求地面、天花板及四壁盡可能密閉光滑，易于清潔和消毒。配置拉動(dòng)門，以減少開(kāi)關(guān)門時(shí)的空氣擾動(dòng)。接種室要求1～2盞紫外燈，用以照射滅菌。最好安裝一小型空調(diào)，使室溫可控，這樣可使門窗緊閉，減少與外界空氣對(duì)流。接種室應(yīng)設(shè)有緩沖間，進(jìn)入無(wú)菌操作室前在此更衣?lián)Q鞋，以減少進(jìn)出時(shí)帶入接種室雜菌。緩沖間最好也安一盞紫外燈。第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室圖1-16無(wú)菌室設(shè)備（a）第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室圖1-17無(wú)菌室設(shè)備（b）第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室圖1-18無(wú)菌室設(shè)備（c）第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室圖1-19無(wú)菌室設(shè)備（d）第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室圖1-20無(wú)菌室設(shè)備（e）第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室超靜工作臺(tái)圖1-21無(wú)菌室設(shè)備（f）第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室電子滅菌器電子火焰滅菌器圖1-22無(wú)菌室設(shè)備（g）第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室工作臺(tái)面圖1-23無(wú)菌室設(shè)備（h）第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室視頻1-5接種室操作第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室四、培養(yǎng)室培養(yǎng)室是將接種的材料進(jìn)行培養(yǎng)生長(zhǎng)的場(chǎng)所。培養(yǎng)室的大小可根據(jù)需要而定。其設(shè)計(jì)以充分利用空間和節(jié)省能源為原則。培養(yǎng)架大多由金屬制成，一般設(shè)5層，最低一層離地高約10cm，其他每層間隔30cm左右，培養(yǎng)架即高1.7m左右。培養(yǎng)架長(zhǎng)度都是根據(jù)日光燈的長(zhǎng)度而設(shè)計(jì)，如采用40W日光燈，則長(zhǎng)1.3m，30W的長(zhǎng)lm，寬度一般為60cm。第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)室最重要的因子是溫度，一般保持在20-27℃左右，安裝空調(diào)機(jī)。由于熱帶植物和寒帶植物等不同種類要求不同溫度，最好不同種類有不同的培養(yǎng)室。室內(nèi)濕度也要求恒定，相對(duì)濕度以保持在70％-80％為好（視情況），可安裝加濕器（除濕機(jī)）?？刂迫展庹諘r(shí)間可安裝定時(shí)開(kāi)關(guān)鐘，一般需要每天光照10-16h。現(xiàn)代組培實(shí)驗(yàn)室大多設(shè)計(jì)為采用天然太陽(yáng)光照作為主要能源，這樣不但可以節(jié)省能源，而且組培苗接受太陽(yáng)光生長(zhǎng)良好，馴化易成活。圖1-24培養(yǎng)室設(shè)備（a）第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室圖1-25培養(yǎng)室設(shè)備（b）第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室圖1-26培養(yǎng)室設(shè)備（c）第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室圖1-27培養(yǎng)室設(shè)備（d）第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室圖1-28培養(yǎng)室設(shè)備（e）第二節(jié)設(shè)備和器材一、玻璃器皿二、器械用具視頻1-6玻璃器皿圖1-29玻璃器皿圖1-30器械用具第二節(jié)設(shè)備和器材視頻1-7組織培養(yǎng)設(shè)施設(shè)備第三節(jié)培養(yǎng)條件培養(yǎng)條件：光照、溫度、濕度、氣體成分一、溫度1.一般控制在25±2oC。

2.植株種類及外植體的不同，其最適溫度也是不同的。如百合20℃；月季24℃；番茄28℃。第三節(jié)培養(yǎng)條件二、光照

★影響細(xì)胞的增殖、組織和器官的分化。

★愈傷組織的誘導(dǎo)有的在光照下有促進(jìn)作用；光照強(qiáng)，幼苗生長(zhǎng)健壯；光照弱，幼苗生長(zhǎng)弱小，容易徒長(zhǎng)。第三節(jié)培養(yǎng)條件三、濕度

主要受到培養(yǎng)基含水量和封口膜透性的影響。如培養(yǎng)基過(guò)硬，則不利于外植體接觸和插入培養(yǎng)基，導(dǎo)致生長(zhǎng)遲緩；封口膜過(guò)于透氣，也會(huì)使瓶?jī)?nèi)濕度下降。第三節(jié)培養(yǎng)條件四、pH值1.培養(yǎng)基適宜PH值5-6.5，一般為5.8，調(diào)

整用0.1M的NaOH和HCl溶液。2.pH影響培養(yǎng)基的硬度。

pH

＞6.5培養(yǎng)基會(huì)變硬；

pH

＜5.0培養(yǎng)基不易凝固。3.滅菌之前，培養(yǎng)基的pH要比標(biāo)準(zhǔn)提高

0.2－0.3個(gè)單位。第三節(jié)培養(yǎng)條件表1-1不同植物的最適PH值杜鵑月季越桔胡蘿、石刁柏蠶豆桃番茄、葡萄4.05.84.56.05.57.05.7第三節(jié)培養(yǎng)條件五、氣體（必要條件）

1.培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)氧氣的充足與否與封口材料有關(guān)?？捎妹奕蛱刂频姆饪谒芰?。通氣最好的是棉塞，但棉塞易使培養(yǎng)基干燥，夏季易引起污染。常用封口膜：聚丙烯耐高溫薄膜第三節(jié)培養(yǎng)條件五、氣體（必要條件）

2.培養(yǎng)基內(nèi)氧氣充足與否與培養(yǎng)基的種類和培養(yǎng)方式有關(guān)?！艄腆w培養(yǎng)基可加進(jìn)活性炭來(lái)增加通氣度，以利于發(fā)根。◆液體培養(yǎng)時(shí)，可考慮采取振蕩培養(yǎng)的方式，以增加通氣性。任務(wù)小結(jié)

組培實(shí)驗(yàn)室包括洗滌室、準(zhǔn)備室、無(wú)菌室（接種室）、培養(yǎng)室四部分；