2.2.2動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體課件高二下學(xué)期生物人教版（2019）選擇性必修3

課前提問：1.動(dòng)物細(xì)胞工程有哪些技術(shù)？2.動(dòng)物細(xì)胞融合的原理及完成的標(biāo)志？3.誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法？4.什么是雜交瘤細(xì)胞？5.雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)？6.什么是單克隆抗體？A細(xì)胞B細(xì)胞A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體正在融合的原生質(zhì)體雜種細(xì)胞愈傷組織雜種植株去壁去壁融合再生出細(xì)胞壁脫分化再分化植物體細(xì)胞雜交技術(shù)馬的細(xì)胞A天鵝的細(xì)胞B飛馬？A細(xì)胞B細(xì)胞雜交細(xì)胞一動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)實(shí)例：1970年，人—鼠細(xì)胞熒光標(biāo)記融合實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)表明：細(xì)胞膜具有流動(dòng)性一.動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。1、概念：3、原理：細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性4、誘導(dǎo)方法物理法：電融合法化學(xué)法：聚乙二醇融合法一、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)生物法：滅活病毒誘導(dǎo)法2、結(jié)果：融合后的細(xì)胞具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的遺傳信息滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理是動(dòng)物細(xì)胞融合實(shí)質(zhì)及完成的標(biāo)志：細(xì)胞核的融合4.意義：（1）研究遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和培育生物

新品種等重要手段（2）為制造單克隆抗體開辟了新途徑5.應(yīng)用：一、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能第2章第2節(jié)人教版選擇性必修3第2課時(shí)

動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體12

闡明動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的概念，舉例說出誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法。概述單克隆抗體的制備過程。學(xué)習(xí)目標(biāo)使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。1、概念：3、原理：細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性4、誘導(dǎo)方法物理法：電融合法化學(xué)法：聚乙二醇融合法一、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)生物法：滅活病毒誘導(dǎo)法2、結(jié)果：融合后的細(xì)胞具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的遺傳信息二、單克隆抗體1.定義：體液免疫

抗體抗體2.抗體的分布：機(jī)體產(chǎn)生的，專門應(yīng)對(duì)抗原的蛋白質(zhì)。①血清（主要）②組織液及外分泌液（如乳汁中）早期獲得抗體的方法動(dòng)物體內(nèi)特定抗原漿細(xì)胞抗體（血清）反復(fù)注射缺點(diǎn)：制備的抗體產(chǎn)量低，純度低，特異性差?？贵w不純多種二、單克隆抗體及其應(yīng)用單克隆抗體遺憾：體外培養(yǎng)時(shí)，一個(gè)B淋巴細(xì)胞不能無限增殖一個(gè)B淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞群克隆獲得大量的單一抗體單一抗體二B淋巴細(xì)胞抗體產(chǎn)生能產(chǎn)生抗體，但不能大量增殖骨髓瘤細(xì)胞能大量增殖，但不能產(chǎn)生抗體二B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞特點(diǎn)：既能大量增殖，

又能產(chǎn)生抗體雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體的制備過程獲得多種B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合注射特定抗原培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合單克隆抗體的制備過程目的：獲得能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞1234誘導(dǎo)融合后會(huì)出現(xiàn)哪些不同細(xì)胞？多種B淋巴細(xì)胞二單克隆抗體及其應(yīng)用用特定的抗原對(duì)小鼠進(jìn)行免疫，并從該小鼠的脾中得到能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞。抗原1從小鼠脾臟中獲取B淋巴細(xì)胞B細(xì)胞1B細(xì)胞2B細(xì)胞3B細(xì)胞4……等多種B細(xì)胞

培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合融合后會(huì)出現(xiàn)哪些不同細(xì)胞？B細(xì)胞1骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞1B細(xì)胞2B細(xì)胞3B細(xì)胞4骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞2雜交瘤細(xì)胞3雜交瘤細(xì)胞4B細(xì)胞B細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞B細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞融合的雜交瘤細(xì)胞融合的具有同種核的細(xì)胞未融合的細(xì)胞第一次篩選的目的：篩選出雜交瘤細(xì)胞方法：用特定的選擇培養(yǎng)基知識(shí)拓展：第一次篩選獲得雜交瘤細(xì)胞的原理①細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基蝶呤阻斷。②人淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但不能分裂增殖。

③鼠骨髓瘤細(xì)胞中只有D途徑，沒有S途徑，但能不斷分裂增殖。篩選出雜交瘤細(xì)胞方法？B淋巴細(xì)胞及同型融合細(xì)胞：不能無限增殖，死亡骨髓瘤細(xì)胞及同型融合細(xì)胞：不能無限增殖，死亡雜交瘤細(xì)胞：能無限增殖，生長(zhǎng)培養(yǎng)基中加入氨基蝶呤（HAT培養(yǎng)基）單克隆抗體的制備過程特定培養(yǎng)基

抗原抗體雜交獲得多種B淋巴細(xì)胞第一次篩選：篩選雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)＋第二次篩選：篩選產(chǎn)生目的抗體的雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合第二次篩選第一次篩選得到的雜交瘤細(xì)胞（多種）多孔板單克隆抗體的制備過程方法：克隆化培養(yǎng)和

抗體檢測(cè)二單克隆抗體及其應(yīng)用將第一次篩選后得到的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)并稀釋每一個(gè)孔中盡量只接種一個(gè)雜交瘤細(xì)胞。二單克隆抗體及其應(yīng)用二單克隆抗體及其應(yīng)用二單克隆抗體及其應(yīng)用抗原1二單克隆抗體及其應(yīng)用抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性第二次篩選第一次篩選得到的雜交瘤細(xì)胞（多種）多孔板單克隆抗體的制備過程方法：克隆化培養(yǎng)和

抗體檢測(cè)原理：抗體與抗原特異性結(jié)合目的：獲得足夠數(shù)量的能分

泌特定抗體的雜交瘤

細(xì)胞抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性的雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn)：既能迅速大量增殖又能產(chǎn)生特定的抗體單克隆抗體的制備過程特定培養(yǎng)基

抗原抗體雜交獲得多種B淋巴細(xì)胞大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞第一次篩選：篩選雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)＋第二次篩選：篩選產(chǎn)生目的抗體的雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性的雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖腹水培養(yǎng)液?jiǎn)慰寺】贵w的制備過程體外培養(yǎng)注射抗原多種B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合誘導(dǎo)融合多種細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞多輪次的克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性的雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)注射到腹腔單克隆抗體從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲得大量的單克隆抗體第一次篩選第二次篩選單克隆抗體的制備過程動(dòng)物細(xì)胞融合、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)1.應(yīng)用到的細(xì)胞工程技術(shù):單克隆抗體的制備過程2.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)（1）能準(zhǔn)確地識(shí)別抗原的細(xì)微差異（3）可以大量制備。（2）與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合三.單克隆抗體的應(yīng)用在受精后不久，胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞就會(huì)分泌人絨毛膜促性腺激素（HCG），在孕婦的尿液中大量存在。而在非妊娠婦女尿液中幾乎不含有。1.診斷試劑抗人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體二單克隆抗體及其應(yīng)用抗體-藥物偶聯(lián)物（ADC）細(xì)胞凋亡①ADC被細(xì)胞吞噬②⑤ADC抗體藥物接頭實(shí)現(xiàn)了對(duì)腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷。三.單克隆抗體的應(yīng)用2.運(yùn)載藥物將細(xì)胞毒素與能特異性識(shí)別腫瘤抗原的單克隆抗體結(jié)合思考

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討論討論1：ADC的抗體和藥物各具有什么作用？抗體主要發(fā)揮靶向運(yùn)輸作用，即通過特異性結(jié)合靶細(xì)胞表面的抗原，將連接的藥物輸送到靶細(xì)胞；抗體-藥物偶聯(lián)物（ADC）三.單克隆抗體的應(yīng)用2.運(yùn)載藥物藥物發(fā)揮治療效應(yīng)，如殺傷靶細(xì)胞