2.2.2動物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體課件高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修3

第2章細(xì)胞工程第2節(jié)動物細(xì)胞工程Part2動物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體目錄/CONTENTS0102動物細(xì)胞融合技術(shù)單克隆抗體及其應(yīng)用植物體細(xì)胞雜交植物細(xì)胞融合植物組織培養(yǎng)溫故而知新：意義：打破生殖隔離，實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交育種，培育植物新品種。

溫故而知新：實(shí)驗(yàn)：人——鼠細(xì)胞熒光標(biāo)記融合實(shí)驗(yàn)501動物細(xì)胞融合技術(shù)使兩個(gè)或多個(gè)動物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。形成具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的遺傳信息的雜交細(xì)胞

細(xì)胞膜具有一定的流動性1、概念：4、結(jié)果：2、原理：3、誘導(dǎo)方式物理法：電融合法化學(xué)法：聚乙二醇（PEG)生物法：滅活病毒誘導(dǎo)法與植物原生質(zhì)體融合的方法相同——動物細(xì)胞融合特有601動物細(xì)胞融合技術(shù)5、過程:動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞增殖701動物細(xì)胞融合技術(shù)滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理滅活：指用物理或化學(xué)手段使病毒失去感染能力（不感染細(xì)胞），但是并不破壞病毒的抗原結(jié)構(gòu)（誘導(dǎo)細(xì)胞融合）。

病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。【拓展】801動物細(xì)胞融合技術(shù)正在融合的淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞7、應(yīng)用：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。6、意義：

至今，種間、屬間、科間，甚至動物和植物之間的細(xì)胞融合都已獲得成功。研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。為制造單克隆抗體開辟了新途徑。項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞融合原理步驟誘導(dǎo)方法結(jié)果意義比較動物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交細(xì)胞膜的流動性和植物細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動性酶解法去掉細(xì)胞壁后，誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合，形成雜種體細(xì)胞，再經(jīng)過植物組織培養(yǎng)形成雜種植株分散成單個(gè)細(xì)胞后誘導(dǎo)細(xì)胞融合物理方法、化學(xué)方法物理方法、化學(xué)方法、滅活病毒形成雜種植株形成雜種細(xì)胞克服遠(yuǎn)緣雜交不親和障礙課堂檢測1.關(guān)于動物細(xì)胞融合的說法錯(cuò)誤的是()A.動物細(xì)胞融合后形成的具有原來兩個(gè)或多個(gè)動物細(xì)胞遺傳信息的多核細(xì)胞稱為雜交細(xì)胞B.動物細(xì)胞融合己成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育的重要手段C.常用于誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合手段有聚乙二醇、滅活的病毒、電激等D.細(xì)胞融合技術(shù)突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能A2.關(guān)于動物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交技術(shù)的比較,下列敘述合理的是 (

)A.均可使用PEG、電激或滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合B.兩者都可以跨越種屬間的生殖隔離C.兩者都可以體現(xiàn)細(xì)胞的全能性D.在適宜條件下，均可發(fā)育成完整個(gè)體B課堂檢測121302單克隆抗體及其應(yīng)用1.定義：機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的，能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。2.抗體的分布：1）血清（主要）2）組織液及外分泌液（如乳汁中）體液免疫

抗體1）每個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性的抗體2）體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類多達(dá)百萬種以上抗體1402單克隆抗體及其應(yīng)用1抗原傳統(tǒng)抗血清（所有抗體混合）免疫

1

1234缺陷：產(chǎn)量低、純度低，特異性差。（不能無限增殖）動物體內(nèi)1抗原注射漿細(xì)胞1抗體

1B淋巴細(xì)胞增殖分化1、傳統(tǒng)抗體制備方法及缺陷

1

1502單克隆抗體及其應(yīng)用動物細(xì)胞融合雜交細(xì)胞動物細(xì)胞培養(yǎng)單克隆抗體骨髓瘤細(xì)胞

（能無限增殖）一種B淋巴細(xì)胞（只分泌一種特異性抗體）雜交瘤細(xì)胞既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生專一抗體一個(gè)極富創(chuàng)造力的方案1975年，米爾斯坦和柯勒1984年，諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎1602單克隆抗體及其應(yīng)用動物細(xì)胞融合雜交細(xì)胞動物細(xì)胞培養(yǎng)單克隆抗體骨髓瘤細(xì)胞

（能無限增殖）一種B淋巴細(xì)胞（只分泌一種特異性抗體）雜交瘤細(xì)胞既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生專一抗體單克隆抗體一個(gè)B淋巴細(xì)胞細(xì)胞群抗體克隆一個(gè)極富創(chuàng)造力的方案1702單克隆抗體及其應(yīng)用注射特定抗原從患骨髓瘤的小鼠體內(nèi)取骨髓瘤細(xì)胞的培養(yǎng)多種已免疫B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合小鼠的脾臟中獲取2、單克隆抗體的制備過程1802單克隆抗體及其應(yīng)用2雜交瘤細(xì)胞(多種)13置于選擇性培養(yǎng)基上培養(yǎng)

第一次篩選融合的細(xì)胞BB132BB瘤瘤瘤瘤√1902單克隆抗體及其應(yīng)用克隆化培養(yǎng)抗體檢測第二次篩選(抗原-抗體雜交技術(shù))能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞陽性細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞(多種)2002單克隆抗體及其應(yīng)用體外培養(yǎng)單克隆抗體體內(nèi)或體外培養(yǎng)能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠腹腔21【培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的方法比較】項(xiàng)目腹腔培養(yǎng)體外培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)易于控制培養(yǎng)條件（如無需提供無菌環(huán)境等），操作簡單，成本較低規(guī)模小，產(chǎn)量少可大規(guī)模培養(yǎng)，大量生產(chǎn)需要人為控制培養(yǎng)條件，成本相對較高02單克隆抗體及其應(yīng)用2302單克隆抗體及其應(yīng)用動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞培養(yǎng)給小鼠注射特定的抗原蛋白B淋巴細(xì)胞（免疫）骨髓瘤細(xì)胞雜交細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞第一次篩選第二次篩選誘導(dǎo)融合選擇培養(yǎng)基克隆化培養(yǎng)，專一抗體檢驗(yàn)體外培養(yǎng)或小鼠腹腔內(nèi)增殖特異性強(qiáng)靈敏度高可大量制備既能大量繁殖又能產(chǎn)生專一抗體知識拓展：第一次篩選獲得雜交瘤細(xì)胞①細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基喋呤阻斷。②人淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但不能分裂增殖。

③鼠骨髓瘤細(xì)胞中只有D途徑，沒有S途徑，但能不斷分裂增殖。篩選出雜交瘤細(xì)胞方法？B淋巴細(xì)胞及同型融合細(xì)胞不能無限增殖，死亡骨髓瘤細(xì)胞及同型融合細(xì)胞不能無限增殖，死亡雜交瘤細(xì)胞能無限增殖，生長二、單克隆抗體及其應(yīng)用培養(yǎng)基中加入氨基嘌呤2502單克隆抗體及其應(yīng)用陽性孔抗體檢測的方法——抗原-抗體雜交法在單克隆抗體制備過程中，兩次篩選的目的和方法是不相同的。將雜交瘤細(xì)胞群稀釋，約每孔1個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)（克隆化培養(yǎng)）一段時(shí)間后，檢測各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔多孔細(xì)胞培養(yǎng)板抗體檢測板分泌抗體能跟特定抗原結(jié)合的細(xì)胞即為所需雜交瘤細(xì)胞總結(jié)注射特定抗原的目的是獲得什么細(xì)胞？B淋巴細(xì)胞第一次篩選的目的？如何篩選？

篩選原理是？篩選出雜交瘤細(xì)胞；選擇培養(yǎng)基；在選擇培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)是？既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生抗體總結(jié)第二次篩選的目的？如何篩選？篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞；選擇抗體檢測呈____性的雜交瘤細(xì)胞用96孔板培養(yǎng)，在每一個(gè)孔中盡量只接種一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下，進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測抗體和抗原能特異性結(jié)合陽抗體檢測原理是？總結(jié)如何獲取大量所需的雜交瘤細(xì)胞？在體外條件下大規(guī)模培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔中如何獲得單克隆抗體？從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取能準(zhǔn)確地識別抗原的細(xì)微差異，與特定抗體發(fā)生特異性結(jié)合，并且可以大量的制備。單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)單克隆抗體制備過程的原理細(xì)胞膜具有一定的流動性和細(xì)胞增殖課堂檢測B3.如圖所示為雜交瘤細(xì)胞的制備示意圖。骨髓瘤細(xì)胞由于缺乏次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT-),在HAT選擇培養(yǎng)液中不能正常合成DNA，無法生長。下列敘述錯(cuò)誤的是(

)A.可用滅活的病毒誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合B.兩兩融合的細(xì)胞都能在HAT選擇培養(yǎng)液中生長C.雜交瘤細(xì)胞需進(jìn)一步篩選才能用于生產(chǎn)D.細(xì)胞膜的流動性是細(xì)胞融合的基礎(chǔ)課堂檢測4.如圖2-2-6為單克隆抗體的制備流程示意圖。下列敘述正確的是(

)圖2-2-6A.甲是從已免疫的小鼠脾臟中獲得的致敏T淋巴細(xì)胞B.①表示將骨髓瘤細(xì)胞去核后進(jìn)行細(xì)胞融合C.乙為融合細(xì)胞，同時(shí)具有細(xì)胞甲和骨髓瘤細(xì)胞的特性D.②表示篩選能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞D課堂檢測5.犬細(xì)小病毒(CPV)單克隆抗體(CpvMcAb)可抑制病毒對宿主細(xì)胞的侵染及病毒的復(fù)制，進(jìn)而殺滅幼犬體內(nèi)病毒。下列相關(guān)敘述，錯(cuò)誤的是()A．在Cpv、McAb的制備過程中用到了動物細(xì)胞培養(yǎng)和動物細(xì)胞融合技術(shù)B．給幼犬注射CPV后，CPV抗體檢測呈陽性，說明發(fā)生了體液免疫反應(yīng)C．經(jīng)選擇性培養(yǎng)基篩選出來的雜交瘤細(xì)胞即可直接生產(chǎn)CpvMcAbD．對雜交細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，需要無菌無毒環(huán)境，且溫度、氣體環(huán)境等要適宜C單克隆抗體應(yīng)用（1）診斷試劑——最廣泛應(yīng)用

在受精后不久，胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞就會分泌人絨毛膜促性腺激素(HCG)，是由受孕婦女體內(nèi)胎盤產(chǎn)生的一種糖蛋白類激素，在孕婦的尿液中大量存在。而在非妊娠婦女尿液中幾乎不含有?？梗ㄈ私q毛膜促性腺激素）單克隆抗體資料1

用抗人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體做成的“早早孕診斷試劑盒”，在妊娠第8天就可以作出診斷，這比原來的診斷方法提前了10d左右，可以避免孕婦在不知道妊娠的情況下因服用藥物而對胎兒造成不利影響。該方法檢測的準(zhǔn)確率在90%以上。3302單克隆抗體及其應(yīng)用1、診斷試劑——最廣泛應(yīng)用抗原-抗體雜交法抗人絨毛促性腺激素單克隆抗體在妊娠第8天就可以作出診斷，比原來診斷方法提前了10d左右，準(zhǔn)確率在90﹪以上。具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速特點(diǎn)診斷優(yōu)點(diǎn)：3、單克隆抗體的應(yīng)用3402單克隆抗體及其應(yīng)用乙肝測定試劑艾滋病檢測試劑血型檢測試劑新冠病毒檢測試劑（2）用于治療疾病和運(yùn)載藥物單克隆抗體應(yīng)用資料2

使用高效的細(xì)胞毒素類藥物進(jìn)行化療可以有效殺傷腫瘤細(xì)胞。但細(xì)胞毒素沒有特異性，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)還會對健康細(xì)胞造成傷害，這限制了它在臨床上的應(yīng)用?？贵w一藥物偶聯(lián)物（antibody-drugconjugate,ADC）通過將細(xì)胞毒素與能特異性識別腫瘤抗原的單克隆抗體結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了對腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷。ADC通常由抗體、接頭和藥物（如細(xì)胞毒素）三部分組成，它的作用機(jī)制如下圖所示?？贵w藥物接頭細(xì)胞凋亡ADC被細(xì)胞吞噬3602單克隆抗體及其應(yīng)用主要用于癌癥治療。2、運(yùn)載藥物優(yōu)點(diǎn)：位置準(zhǔn)確、療效高、副作用小單克隆抗體+接頭+藥物（如細(xì)胞毒素）=ADC（抗體-藥物偶聯(lián)物）單克隆抗體+藥物=“生物導(dǎo)彈”討論：ADC的抗體和藥物各具有什么作用？

抗體主要發(fā)揮靶向運(yùn)輸作用，即通過特異性結(jié)合靶細(xì)胞表面的抗原，將連接的藥物輸送到靶細(xì)胞；藥物發(fā)揮治療效應(yīng)，如殺傷靶細(xì)胞。3802單克隆抗體及其應(yīng)用單克隆抗體+同位素（熒光標(biāo)記）2、運(yùn)載藥物在特定組織中成像的技術(shù)，可定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病。結(jié)合熒光標(biāo)記的單克隆抗體藥物3、治療疾病醫(yī)藥領(lǐng)域，單抗類藥物占用重要地位練習(xí)與應(yīng)用

一、概念檢測1.下列有關(guān)動物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交比較的敘述，錯(cuò)誤的是（

）A.它們的原理都涉及細(xì)胞膜的流動性B.都可以用電融合法或PEG融合法誘導(dǎo)融合C.融合前都需用纖維素酶或果膠酶處理細(xì)胞D.前者主要是為了獲得細(xì)胞產(chǎn)品，后者主要是為了獲得雜種植株2.科學(xué)家以SARS病毒的核衣殼蛋白為抗原，制備出了單克隆抗體。下列相關(guān)敘述正確的是（

）A.利用該單克隆抗體可以診斷是否感染SARS病毒B.體外培養(yǎng)單個(gè)B淋巴細(xì)胞可以獲得針對SARS病毒的單克隆抗體C.將等量B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞混合，經(jīng)誘導(dǎo)后融合