食品三級質(zhì)量檢驗(yàn)員培訓(xùn)筆記-微生物

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目錄：

001樓：細(xì)菌檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識-分類、形態(tài)、生理、培養(yǎng)分離

002樓：細(xì)菌檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識-生化試驗(yàn)、菌種保存

005樓入口：沙門氏菌

014樓入口：志賀氏菌-待補(bǔ)充

030樓入口：金黃色葡萄球菌

039樓入口：溶血性鏈球菌

待續(xù)。。。

細(xì)菌檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識

1、分類

細(xì)菌屬于原核細(xì)胞型微生物。

最精確的方法為遺傳學(xué)分類方法。

最常用的是經(jīng)典傳統(tǒng)分類法：按照細(xì)菌的親緣關(guān)系，界門綱目科屬種型株分類。

科：由共同情書關(guān)系的屬組成，如腸桿菌科；

屬：是種的高一級分類單位，通常包含有共同特征或關(guān)系密切的種，用以描述微生物的主要

特征，如埃希氏菌屬；

種：是分類等級的基本單位，同一種微生物形態(tài)、生理學(xué)特征和組成成分基本相同，用以描

述微生物的次要特征，如大腸埃希氏菌；

菌株或品系：同種微生物中不同來源的純培養(yǎng)物，如大腸埃希氏菌CGMCC1.3373。

2、細(xì)菌形態(tài)學(xué)及形態(tài)學(xué)檢查法

細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu)主要指細(xì)菌的大小、形狀、排列及超微結(jié)構(gòu)。細(xì)菌結(jié)構(gòu)與其生理功能、致病性、

免疫性有關(guān)。

2.1形態(tài)結(jié)構(gòu)

2.1.1基本形態(tài)3類：球菌、桿菌、螺旋菌，桿菌是最常見的形態(tài)。

2.1.2大小

測量細(xì)菌大小的單位為微米Um。球菌以直徑表示大小，桿菌以長與寬表示大小，

同一種細(xì)菌在不同情況下大小形態(tài)也有差別：涂片干燥、固定、染色時(shí)細(xì)菌收縮；快速生長

的球菌往往呈短桿狀。

菌齡與細(xì)菌大小的關(guān)系受許多因素影響，主要與代謝廢物的積累及培養(yǎng)基中滲透壓上升等因

素有關(guān)。

2.1.3結(jié)構(gòu)

基本結(jié)構(gòu)：細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、核質(zhì)；

特殊結(jié)構(gòu)：鞭毛、菌毛、莢膜、芽抱等。

菌毛是什么？-菌毛(Pilus)許多革蘭氏陰性菌菌體表面遍布的比鞭毛更為細(xì)、短、直、硬、

多的絲狀蛋白附屬器，也叫做纖毛其化學(xué)組成是菌毛蛋白菌毛與運(yùn)

（Fimbriae）o（Pilin）,

動(dòng)無關(guān)。菌毛可分為普通菌毛（Commonpilus）和性菌毛（Sexpilus）兩種。普通菌毛長0.3?l.Oum,

直徑7nm。具有粘著細(xì)胞（紅細(xì)胞、上皮細(xì)胞）和定居各種細(xì)胞表面的能力，它與某些細(xì)

菌的致病性有關(guān)。無菌毛的細(xì)菌則易被粘膜細(xì)胞的纖毛運(yùn)動(dòng)、腸蠕動(dòng)或尿液沖洗而被排除,

失去菌毛，致病力亦隨之喪失。性菌毛有的細(xì)菌還有1?4根較長的性菌毛，比普通菌毛而

粗，中空呈管狀。性菌毛由質(zhì)粒攜帶的?種致育因子（Ferilityfactor）的基因編碼，故性菌

毛又稱F菌毛。帶有性菌毛的細(xì)菌稱為F+菌或雄性菌，無性菌毛的細(xì)菌稱為F-菌或雌性菌。

F+菌體內(nèi)的質(zhì)?；蛉旧wDNA可通過中空的性菌毛進(jìn)入F-菌體內(nèi)，這個(gè)過程稱為接合

（conjugation）,細(xì)菌的毒性及耐藥性等性狀可通過此方式傳遞，這是某些腸道桿菌容易產(chǎn)

生耐藥性的原因之一。（摘自百度）

2.2形態(tài)學(xué)檢查法

分為不染色標(biāo)本檢查法和染色標(biāo)本檢查法。

不染色標(biāo)本檢查法：依靠普通顯微鏡，雖可觀察細(xì)菌大小、形態(tài)，但主要用于觀察細(xì)菌的動(dòng)

力。

觀察細(xì)菌有動(dòng)力時(shí)，應(yīng)選用新鮮的幼齡培養(yǎng)物（幼到啥程度？-對數(shù)期），并在20℃以上室

溫中進(jìn)行，同時(shí)應(yīng)掌握區(qū)別細(xì)菌真正運(yùn)動(dòng)與溶膠的布朗運(yùn)動(dòng)。常用的方法有壓滴法、懸滴法、

暗視野映光法等。

染色標(biāo)本檢驗(yàn)法：分為單染色法、復(fù)染色法、特殊染色法。

觀察細(xì)菌菌毛應(yīng)使用鞭毛染色法。

細(xì)菌學(xué)中最常用的鑒別染色法是革蘭氏染色法。

基本步驟為：涂片一干燥一固定一染色

革蘭氏染色的結(jié)果與培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)條件及操作技術(shù)等有著密切關(guān)系。酒精脫色為關(guān)鍵步

驟。

3、細(xì)菌生理學(xué)

3.1化學(xué)組成

水、蛋白質(zhì)、糖類、脂類、無機(jī)鹽、核酸、維生素，各種組成隨細(xì)菌種類、菌齡、細(xì)菌所處

環(huán)境不同而有差異。

固形成分占菌體質(zhì)量15%~25%,其中碳、氫、氧、氮四種元素占90%~97%,其他元素占3%~10%。

水分：占細(xì)菌質(zhì)量75%~85%,芽抱約40%。繁殖體內(nèi)主要是游離水，芽抱內(nèi)主要是結(jié)合水。

結(jié)合水不易蒸發(fā)，不凍結(jié)，不能作為溶劑，也不能滲透。

蛋白質(zhì)：分布在菌體各個(gè)組成部分，占菌體固形成分50%~80%。除少量白蛋白、球蛋白等

單純蛋白質(zhì)外，絕大部分與其他物質(zhì)結(jié)合成復(fù)合蛋白質(zhì)，如核蛋白、糖蛋白、脂蛋白等，其

中核蛋白含量最高。蛋白質(zhì)是維持細(xì)菌生命活動(dòng)的最基本物質(zhì)，是細(xì)菌酶類的主要組成部分。

核酸：分RNA（細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜中，約占固形成分10%）與DNA（染色體、質(zhì)粒中，占固

形成分3%左右）兩種。

糖類：占固形成分10%~30%,主要以多糖形式存在，如莢膜多糖、纖維素、淀粉、糖原等。

脂類：細(xì)菌體內(nèi)能量儲存場所。

無機(jī)鹽類：調(diào)節(jié)劑滲透壓和維持酶活性的作用。

其他：生長因子主要是B族維生素，大多數(shù)是菌體內(nèi)的輔酶成分。色素種類很多，一般都是

含氮的有機(jī)物。

3.2物理性狀

帶電現(xiàn)象：菌體蛋白質(zhì)由許多氨基酸組成。氨基酸是兼性離子，在等電點(diǎn)時(shí)，其所帶正電荷

與負(fù)電荷相等。革蘭氏陽性菌pH2~3,革蘭氏陰性菌pH4~5。一般培養(yǎng)、染色、血清學(xué)試驗(yàn)

中，多數(shù)為中性或弱堿性環(huán)境，pH值高于細(xì)菌等電點(diǎn)，均帶負(fù)電荷。環(huán)境中pH值越高所帶

負(fù)電荷越多。帶電現(xiàn)象與細(xì)菌的染色反應(yīng)、凝集反應(yīng)、抑菌、殺菌作用等都有密切關(guān)系。

多相膠體：原生質(zhì)中具有多種蛋白質(zhì)，成分結(jié)構(gòu)各不相同，為多相膠體，因此可同時(shí)進(jìn)行各

種性質(zhì)不同的生化反應(yīng)。細(xì)胞外濃度較低的化學(xué)物質(zhì)可被原生質(zhì)中的某一相選擇性的吸收濃

縮于細(xì)胞內(nèi)。

表面積：單位體積的表面積比其他大生物的表面積大。每立方厘米葡萄球菌的表面積為

60000cm2?因而細(xì)菌代謝活躍，繁殖速度很快，同樣對外界環(huán)境因素的影響也十分敏感。

布朗運(yùn)動(dòng)：在溶液中，因受到分散酶分子的撞擊，發(fā)生不移動(dòng)位置的顫動(dòng)，叫做布朗運(yùn)動(dòng)。

光學(xué)性質(zhì)：菌體呈半透明狀態(tài)，光線照射菌體時(shí)，一部分光被吸收，一部分光發(fā)生散射，所

以細(xì)菌懸液呈現(xiàn)渾濁現(xiàn)象。

滲透性:細(xì)菌的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜都有半滲透性,吸收營養(yǎng)和代謝產(chǎn)物均依賴于這種通透作用。

細(xì)菌具有堅(jiān)韌的細(xì)胞壁，除能耐受菌體內(nèi)部的高滲透壓外，還能保護(hù)細(xì)菌在滲透壓較低的環(huán)

境中不致破裂，但在純水中也不免吸收水分而脹裂。

3.3代謝

細(xì)菌為了生長繁殖,必須從環(huán)境中吸取營養(yǎng)物質(zhì)作為能源和基本原料,并排出不需要的產(chǎn)物,

這些生化過程稱為細(xì)菌的代謝，包括分解代謝和合成代謝。

3.3.1分解代謝及生化反應(yīng)

定義：將復(fù)雜的營養(yǎng)物質(zhì)分解為簡單的化合物，一方面提供合成菌體成分的原料，一方面從

物質(zhì)分解中獲得能量。

（1）糖類：大多數(shù)細(xì)菌能利用糖，由于各種細(xì)菌所具有的酶系統(tǒng)不同，故分解糖類的能力

也不同。基本的糖代謝過程：多糖一單糖一丙酮酸，而丙酸酮進(jìn)一步分解的后續(xù)過程則因各

種細(xì)菌而異。

1）糖發(fā)酵試驗(yàn)：經(jīng)常用于細(xì)菌的鑒別。如大腸埃希氏菌，使丙酮酸生成甲酸，并由甲酸解

氫酶分解甲酸生成C02和H2,所以分解葡萄糖時(shí)產(chǎn)酸產(chǎn)氣；而傷寒桿菌只有使丙酮酸生成

甲酸的能力，分解葡萄糖只能產(chǎn)酸不能產(chǎn)氣。

2）V-P試驗(yàn)：產(chǎn)氣桿菌能使丙酮酸脫竣，生成中性乙酰甲基甲醉。乙酰甲基甲醇在堿性溶

液中被大氣中的氧分子氧化，生成紅色化合物，這一反應(yīng)成為V-P試驗(yàn)陽性。大腸埃希氏菌

不生成乙酰甲基甲醇，故陰性。該實(shí)驗(yàn)?zāi)c道菌必做。

3）甲基紅試驗(yàn)：在上述產(chǎn)氣桿菌培養(yǎng)液中，由于2個(gè)分子的丙酮酸已變?yōu)?個(gè)分子的中性

乙酰甲基甲醉（位于有氧無氧分解的交界點(diǎn)上），生成的酸量就相應(yīng)減少，故pH值相應(yīng)較

高（PH5.4以上），用甲基紅做指示劑時(shí)，培養(yǎng)液呈現(xiàn)橘黃色，稱為甲基紅試驗(yàn)陰性。而大

腸埃希氏菌因分解丙酮酸時(shí)不產(chǎn)生乙酰甲基甲醉，產(chǎn)生的酸較多，故培養(yǎng)液的pH值下降到

4.5或更低，因此甲基紅指示劑呈紅色反應(yīng)，即陽性。

（2）蛋白質(zhì)：蛋白質(zhì)分子量大，不能被菌體直接吸收作為營養(yǎng)基質(zhì)，有必要先通過細(xì)菌的

胞外酶，如蛋白酶，把蛋白質(zhì)分解成為能透進(jìn)細(xì)胞壁與細(xì)胞膜的多肽或氨基酸，才能運(yùn)轉(zhuǎn)入

菌細(xì)胞內(nèi)被利用。細(xì)菌分解蛋白質(zhì)的過程一般為：蛋白質(zhì)一蛋白口（音“示”）一蛋白豚一

多肽f氨基酸。不同細(xì)菌分解蛋白質(zhì)的能力不同，可用明膠液化試驗(yàn)或蛋白質(zhì)消化試驗(yàn)來鑒

別細(xì)菌的種類。氨基端進(jìn)一步分解主要分三種方式進(jìn)行：脫氨基作用、脫竣基作用、其他分

解作用（生成明跺、生成硫化氫、分解尿素）。

（3）枸椽酸鹽利用試驗(yàn)：產(chǎn)氣桿菌能利用枸檬酸鹽作為碳源，因而在僅含枸檬酸鹽而不含

其他碳源的培養(yǎng)基上生長，分解枸椽酸鹽生成碳酸鹽，使培養(yǎng)基山原來的中性變?yōu)閴A性，以

嗅麝香草酚藍(lán)為指示劑可顯示出培養(yǎng)基由綠色變?yōu)樯钏{(lán)色，即枸檬酸鹽陽性。相反，大腸桿

菌不能利用枸椽酸鹽為唯一碳源，故不能在此培養(yǎng)基上生長，培養(yǎng)基顏色不變,為陰性反應(yīng)。

3.3.2合成代謝及其產(chǎn)物

（1）毒素與侵襲性酶：

細(xì)菌產(chǎn)生的內(nèi)毒素和外毒素均有強(qiáng)烈毒性，尤以外毒素為甚。

內(nèi)毒素為革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁成分，即脂多糖，其毒性存在于脂類A部分，當(dāng)菌體死亡

崩解后才游離出來。其性質(zhì)穩(wěn)定，加熱至160℃2~4h或用強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或強(qiáng)氧化劑加溫煮沸

30min才滅活。

外毒素是蛋白質(zhì)，在細(xì)菌生活過程中即可釋放出菌體。產(chǎn)生外毒素的細(xì)菌大多是革蘭氏陽性

菌，但也有少數(shù)革蘭氏陰性菌。其性質(zhì)不穩(wěn)定，易被熱（50~60℃20~120min）破壞。

某些細(xì)菌還能產(chǎn)生具有侵襲性的酶，能損傷機(jī)體組織，如產(chǎn)氣莢膜梭菌的卵磷脂酶、鏈球菌

的透明質(zhì)酸酶等。

（2）熱原質(zhì)：許多革蘭氏陰性桿菌能產(chǎn)生一種多糖，將它注入人體或動(dòng)物體內(nèi)能引起發(fā)熱

反應(yīng)，故稱熱原質(zhì)。121℃20min也不能破壞。用吸附劑和特制石棉濾板可除去輸液中的大

部分熱源質(zhì)，玻璃器皿上的熱原質(zhì)則需在250℃高溫下干烤才能破壞（時(shí)間？）。如變形桿

菌、銅綠假單胞菌（舊稱綠膿桿菌）。

（3）色素：有些細(xì)菌在一定條件下（氧氣充足、溫度適宜或暴露陽光）能產(chǎn)生各種顏色的

色素。產(chǎn)生的色素有的能溶于水而擴(kuò)散至周圍環(huán)境中，另一些色素為脂溶性不溶于水僅使菌

落本身有色。

（4）抗生素：主要是由某些微生物在代謝過程中產(chǎn)生的一種抗生物質(zhì)，能抑制或殺死某些

生物細(xì)胞（主要是微生物和腫瘤細(xì)胞）?？股刂饕煞啪€菌和真菌產(chǎn)生，由細(xì)菌產(chǎn)生的較

少，只有多黏芽泡桿菌產(chǎn)生的一組多肽類抗生素（多黏菌素）和由第一芽抱桿菌產(chǎn)生的多肽

類抗生素（桿菌肽）等少數(shù)幾種。

（5）細(xì)胞素：某系細(xì)菌種株間產(chǎn)生的一類具有抗菌作用的蛋白質(zhì)。與抗生素不同，其抗菌

范圍狹窄，僅對■產(chǎn)生與細(xì)胞素的菌株有近緣關(guān)系的細(xì)菌才有抑殺作用。由于其具有特異性,

已用于細(xì)菌種內(nèi)的分型。

（6）維生素：維生素是細(xì)菌必須的生長因子，有些細(xì)菌能自己合成，除供菌體本身所需外，

也能分泌至菌體外。人體腸道內(nèi)的大腸埃希氏菌能合成維生素B6、B12、K2等，可供人體

所需。

4、細(xì)菌的培養(yǎng)和分離技術(shù)

4.1用途

通過細(xì)菌培養(yǎng)可以研究細(xì)菌的形態(tài)、代謝活動(dòng)、生化反應(yīng)、抗原結(jié)構(gòu)及致病力等，并且對細(xì)

菌進(jìn)行鑒定。

細(xì)菌培養(yǎng)應(yīng)用于食品和環(huán)境等樣品的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)，以評價(jià)食品或環(huán)境的衛(wèi)生情況。

對患者或帶菌者體內(nèi)（代謝物）的病原菌進(jìn)行培養(yǎng)，鑒定其種屬并對病原菌進(jìn)行藥物敏感性

試驗(yàn)，從而做出確切的病原學(xué)診斷，選擇有效藥物進(jìn)行治療。

4.2培養(yǎng)所需條件

4.2.1培養(yǎng)基：細(xì)菌培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)基應(yīng)滿足細(xì)菌生長和鑒別所需要的條件，選擇相應(yīng)的

營養(yǎng)要素和基質(zhì)成分。

按其用途可分為六大類：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、營養(yǎng)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基、特殊培養(yǎng)基

和厭氧培養(yǎng)基。

現(xiàn)使用的商業(yè)化的培養(yǎng)基為干燥培養(yǎng)基，其中含有培養(yǎng)基的各種成分，使用時(shí)只要按一定比

例加入適量水分即可，具有節(jié)省制備時(shí)間、質(zhì)量穩(wěn)定、攜帶方便等優(yōu)點(diǎn)。

4.2.2細(xì)菌培養(yǎng)的其他條件

合適的酸堿度:對細(xì)菌的生長繁殖影響很大。多數(shù)病原菌最適宜的酸堿度在pH7.2~7.6之間，

個(gè)別細(xì)菌如霍亂弧菌可在堿性PH8.4~9.2環(huán)境中生長。許多細(xì)菌在培養(yǎng)過程中因分解糖類而

產(chǎn)酸，影響了本身的生長，因此有時(shí)需在培養(yǎng)基中加入磷酸氫二鉀、磷酸氫二鈉等緩沖劑,

防止溶液pH值波動(dòng)過大.

適宜的溫度：一般細(xì)菌在15~40℃都能生長，但多數(shù)病原菌的最適生長溫度為36~37℃。

一定的濕度：細(xì)菌生長需要?定的水分，以利于營養(yǎng)物質(zhì)的滲透。干燥不利于細(xì)菌的生長。

必要的氣體環(huán)境：需氧菌須在有氧環(huán)境下生長，厭氧菌須在無氧條件中才能生長。牛布魯氏

菌及腦膜炎球菌初分離時(shí)，必須在培養(yǎng)環(huán)境的大氣中增加5%~10%的CO2o

4.3細(xì)菌培養(yǎng)法

根據(jù)對氧氣需求不同可分為需氧培養(yǎng)和厭氧培養(yǎng)。

根據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài)不同分為液體培養(yǎng)、固體培養(yǎng)、半固體培養(yǎng)。

4.3.1液體培養(yǎng)：不同類型的細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)不同的生長現(xiàn)象。

（1）渾濁：細(xì)菌向四周均勻擴(kuò)散，出現(xiàn)肉眼可見的不同程度的均勻渾濁生長。

（2）沉淀：少數(shù)排列成鏈狀的細(xì)菌可呈沉淀式生長，沉淀物上面的液體清澈，如鏈球菌。

（3）菌膜：專性需氧菌多生長在液體表面，形成菌膜，如枯草桿菌。

4.3.2固體培養(yǎng)

將檢材中的目標(biāo)對象菌用人工培養(yǎng)法分離出來成為純種，稱為分離培養(yǎng)。

常用的分離方法有平板劃線分離法利涂布法。

分離培養(yǎng)可使細(xì)菌在平板培養(yǎng)基表面生長。

如果接種的細(xì)菌能適當(dāng)?shù)姆珠_，經(jīng)一定時(shí)間培養(yǎng)后，便形成單?菌落。

菌落的大小、形狀、色澤、邊緣、透明度、濕潤度、溶血現(xiàn)象等特點(diǎn)則因細(xì)菌的種類和所用

培養(yǎng)基不同而異。

菌落的這些特征是識別細(xì)菌的重要依據(jù)。

當(dāng)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基表面密集生長時(shí)，多個(gè)菌落融合在一起，稱為菌苔。

4.3.3半固體培養(yǎng)

細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基中生長時(shí)，無鞭毛的細(xì)菌沿著穿刺線生長，有鞭毛的細(xì)菌，除了沿穿刺

線生長外，還可看見從穿刺線向外擴(kuò)散生長的趨勢。

因此，以穿刺法將細(xì)菌接種于半固體培養(yǎng)基中有助于鑒別細(xì)菌是否有動(dòng)力，是否有鞭毛。

細(xì)菌檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識

本帖最后由渾身是血于2011-3-1523:18編輯

5、細(xì)菌的生物化學(xué)試驗(yàn)

利用生物化學(xué)的方法來檢查這些代謝產(chǎn)物以鑒別細(xì)菌的方法稱為細(xì)菌的生物化學(xué)試驗(yàn)，簡稱

生化試驗(yàn)。

5.1糖類代謝試驗(yàn)

5.1.1糖（醇）類發(fā)酵試驗(yàn)

不同細(xì)菌含有發(fā)酵不同糖（醇）的酶，因而發(fā)酵糖（醇）的能力各不相同。即使某些能發(fā)酵

同樣的糖（醇），但其產(chǎn)物也不同，有的產(chǎn)酸產(chǎn)氣，有的產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，可根據(jù)這些特點(diǎn)來鑒

別細(xì)菌。

大致可分為：

液體發(fā)酵管：無糖肉湯或蛋白陳水中，加入1%糖（醇）類指示劑，一支小玻管，經(jīng)滅菌后

備用。若被檢細(xì)菌對營養(yǎng)要求較高時(shí)，則在試驗(yàn)前加入2%~5%無菌血清。

半固體發(fā)酵管：在液體糖（醇）發(fā)酵培養(yǎng)基中，加入0.3%~0.5%瓊脂，溶化后分裝試管，滅

菌后讓試管直立，使瓊脂凝固，做成高層培養(yǎng)基，接種細(xì)菌應(yīng)用接種針穿刺接種。

固體發(fā)酵管：此類培養(yǎng)基一般不常用，僅用于營養(yǎng)要求較高的某些細(xì)菌，在含糖類及5%~10%

血清瓊脂斜面上進(jìn)行發(fā)酵試驗(yàn)。另外固體高層糖發(fā)酵管，可用于厭氧細(xì)菌糖發(fā)酵試驗(yàn)，如產(chǎn)

氣莢膜桿菌在含糖的固體高層發(fā)酵管中出現(xiàn)洶涌發(fā)酵（產(chǎn)生大量氣體）。

雙糖（或三糖）高層斜面發(fā)酵管：這種培養(yǎng)基含有葡萄糖和乳糖（或再加蔗糖），這兩種糖

（或三種糖）混在一起，制成高層斜面（有沒有直徑與高的比例？），其中葡萄糖和乳糖（或

蔗糖）比例為1:10。

各種糖（醇）發(fā)酵管含糖（醇）的濃度，一般為0.5%~1%,有時(shí)可達(dá)2%。經(jīng)121℃20~30min

滅菌，容易水解變質(zhì)，特別是在堿性溶液中更易破壞。

故糖（醇）發(fā)酵培養(yǎng)基常用高壓蒸汽115°C15min滅菌。

應(yīng)用的糖（醇）種類很多：

單糖：葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、果糖、木膠糖、半乳糖；

雙糖：乳糖、麥芽糖、蔗糖、覃糖（啥糖？-音qin2,應(yīng)該是海藻糖）；

多糖：菊糖、肝糖、糊精、淀粉；

醇：甘露醇、衛(wèi)矛醇、山梨醇、側(cè)金盞花醇、肌醇、丙三醇（甘油）；

糖甘：水楊昔等。

最常用的指示劑有酚紅、溟麝香草酚藍(lán)、嗅甲酚紫、酸性復(fù)紅。

前兩者顏色反應(yīng)較敏感，但穩(wěn)定性差，后二者比較穩(wěn)定。特別是一些遲緩發(fā)酵的細(xì)菌，培養(yǎng)

時(shí)間長，應(yīng)用后二者指示劑。

酚紅pH6.8（黃色）~pH8.4（紅色）

5.1.2甲基紅試驗(yàn)（methylred）

甲基紅指示劑變色范圍是PH4.4（紅色）~pH6.2（黃色），產(chǎn)氣腸桿菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮

酸，但又很快將丙酮酸脫竣，轉(zhuǎn)化成醇等物質(zhì)，則培養(yǎng)液的pH值仍在6.2以上，故此時(shí)加

入甲基紅指示劑，培養(yǎng)液呈黃色，此為陰性對照菌。陽性對照菌是大腸埃希氏菌，呈現(xiàn)紅色

為陽性。

5.1.3V-P試驗(yàn)

伏-普試驗(yàn)，目的是檢查細(xì)菌是否能分解葡萄糖，產(chǎn)生乙酰甲基甲醇。

陽性對照菌是產(chǎn)氣腸桿菌，分解葡萄糖（被檢細(xì)菌接種到葡萄糖蛋白陳水中，36℃18-24h）

產(chǎn)生丙酮酸，再將丙酮酸脫竣形成乙酰甲基甲醉，在堿性條件下（乙液-40%KOH溶液），被

氧化為二乙酰，與培養(yǎng)基蛋白豚中精氨酸等所含的胭基（甲液-6%a一蔡酚酒精溶液？）結(jié)合，

通常在lOmin內(nèi)形成紅色化合物。

若不顯色，放置于50℃水浴2h,或放置于37℃培養(yǎng)箱中4h,充分搖動(dòng)，觀察培養(yǎng)液反應(yīng)

結(jié)果，不顯紅色為陰性，陰性對照菌是大腸埃希氏菌。

5.1.4ONPG試驗(yàn)

鄰硝基酚-B-D-半乳糖甘的縮寫，利用該試劑可以檢查被檢細(xì)菌有無B-半乳糖甘酶和滲透酶,

發(fā)酵乳糖的細(xì)菌具有這兩種酶。

滲透酶將乳糖分子帶入菌細(xì)胞內(nèi)，而半乳糖甘酶可將乳糖的B-半乳糖甘鏈切斷，產(chǎn)生葡

萄糖和半乳糖。

遲緩發(fā)酵乳糖的細(xì)菌，缺乏滲透酶，而ONPG滲入菌細(xì)胞內(nèi)，被B-半乳糖甘酶分解產(chǎn)生鄰

位硝基苯酚，一般在20~30min內(nèi)顯黃色，為陽性，對照菌為枸椽酸鹽桿菌和亞利桑那菌。

方法：將被檢細(xì)菌接種到1%的乳糖肉湯瓊脂培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)過夜。取菌苔接種于0.25ml

生理鹽水中做成懸液。加入1滴甲苯，并充分振搖，使酶釋放。在懸液中再加入ONPG液

0.25ml,混勻，置于37℃培養(yǎng)箱或水浴箱中，分別在20min和3h后觀察培養(yǎng)液反應(yīng)結(jié)果

不出現(xiàn)黃色者為陰性，對照菌是沙門氏菌。

5.1.4氧化發(fā)酵試驗(yàn)

測定糖類的氧化或發(fā)酵及糖類未被利用的代謝類型。

氧化型：細(xì)菌在分解葡萄糖過程中，必須有氧分子參加。無氧環(huán)境中不能分解葡萄糖。

發(fā)酵型：在分解葡萄糖的過程中，可以進(jìn)行無氧降解。發(fā)酵型細(xì)菌無論在有氧或無氧的環(huán)境

中都能分解葡萄糖。

產(chǎn)堿型：不分解葡萄糖的細(xì)菌。

將待檢菌同時(shí)穿刺接種兩支HL培養(yǎng)基，其中一支培養(yǎng)基滴加無菌的液體石蠟油，高度不少

于1cm,37℃培養(yǎng)48h或更長，觀察反應(yīng)結(jié)果。

培養(yǎng)基變黃色為產(chǎn)酸。

兩支培養(yǎng)基均產(chǎn)酸為發(fā)酵型細(xì)菌，僅不加石蠟的培養(yǎng)基產(chǎn)酸的是氧化型細(xì)菌，兩支培養(yǎng)基均

不變化的為產(chǎn)堿型細(xì)菌。

5.2蛋白質(zhì)、氨基酸及含氮化物代謝試驗(yàn)

5.2.1苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)

原理：某些細(xì)菌具有苯丙疑酸脫氨酶，可使苯丙氨酸脫氨形成苯丙酮酸，苯丙酮酸與三氯化

鐵發(fā)生螯合作用，形成綠色絡(luò)合物。

方法:將被檢細(xì)菌的斜面培養(yǎng)物（先增菌）大量移種到苯丙氨酸瓊脂斜面上,37℃培養(yǎng)18-24h,

再從斜面上滴加10%三氯化鐵溶液4-5滴，使其自斜面培養(yǎng)物上緩緩流下（?多慢，快了會(huì)

怎樣？），觀察結(jié)果。

結(jié)果：溶液出現(xiàn)綠色為陽性，對照菌是變形桿菌；不變色為陰性，對照菌是產(chǎn)氣腸桿菌。

5.2.2脫竣酶試驗(yàn)

原理：某些細(xì)菌具有某種氨基酸的脫竣能，可使氨基酸脫去炭基產(chǎn)生胺和二氧化碳，胺使

pH值＞7,此時(shí)指示劑溪麝香草酚藍(lán)由綠色變?yōu)樗{(lán)色。

濱麝香草酚藍(lán)酸性顯黃色，堿性顯紫色。

方法：將被檢細(xì)菌接種到兩支脫竣酶培養(yǎng)基中，其中一支不加氨基酸，另一支加賴氨酸/精

氨酸/鳥氨酸，再在培養(yǎng)基上覆蓋一層滅菌的液體石蠟，37℃培養(yǎng)18-24h,觀察結(jié)果。

結(jié)果：兩管培養(yǎng)基均含有葡萄糖，產(chǎn)酸，浪麝香草酚藍(lán)山藍(lán)變黃。含有氨基酸的一管出現(xiàn)脫

竣基降解作用，產(chǎn)生堿性反應(yīng)，浪麝香草酚藍(lán)再由黃變藍(lán)，為陽性。

鳥氨酸陰性對照菌為陰溝腸桿菌，顯黃色。

5.2.3靛基質(zhì)（口引咪）試驗(yàn)

原理：某些細(xì)菌能分解蛋白豚中的色氨酸，產(chǎn)生靛基質(zhì)（寫I躲），靛基質(zhì)與對二甲氨基苯甲

醛結(jié)合，形成玫瑰紅色化合物。

方法：將被檢細(xì)菌接種到胰蛋白陳水培養(yǎng)基中，37c培養(yǎng)24-48h后，滴加數(shù)滴試劑于培養(yǎng)

基液面，輕輕搖動(dòng)（不可劇烈振動(dòng)），觀察結(jié)果。

結(jié)果：出現(xiàn)紅色為陽性，對照菌是大腸埃希氏菌；出現(xiàn)黃色為陰性，對照菌是產(chǎn)氣腸桿菌。

5.2.4硫化氫試驗(yàn)

原理：某些細(xì)菌能分解含硫的氨基酸（胱氨酸、半胱氨酸等），產(chǎn)生硫化氫，硫化氫與培養(yǎng)

基中的鉛鹽或鐵鹽反應(yīng)，形成黑色沉淀硫化鉛或硫化鐵。

方法：將被檢細(xì)菌以接種針穿刺接種于醋酸鉛或雙糖鐵培養(yǎng)基（哪雙糖？-乳糖+葡萄糖）中，

37℃培養(yǎng)24h,觀察結(jié)果。

結(jié)果：有黑色出現(xiàn)為陽性。

說明：在硫化氫試驗(yàn)的培養(yǎng)基加入硫代硫酸鈉的作用是還原作用，以保持培養(yǎng)基處于還原狀

態(tài)，是產(chǎn)生的硫化氫不被氧化。

產(chǎn)硫化氫較少的菌種可在試管口放置醋酸鉛試條。

5.2.5尿素酶試驗(yàn)

原理：某些細(xì)菌具有尿素酶，在含有尿素的培養(yǎng)基中，分解尿素產(chǎn)生氨，使培養(yǎng)基呈堿性,

此時(shí)培養(yǎng)基中的酚紅指示劑顯紅色。

方法：將被檢細(xì)菌接種的尿素固體斜面培養(yǎng)基上，36℃培養(yǎng)4h檢查一次，再每天檢查詼，

培養(yǎng)5天，觀察結(jié)果。

結(jié)果：出現(xiàn)紅色為陽性，對照菌為變形桿菌；變色為陰性，對照菌是大腸埃希氏菌。

5.3枸椽酸鹽利用試驗(yàn)

原理：

枸檬酸鹽培養(yǎng)基系一綜合性培養(yǎng)基，其中枸椽酸鈉為碳的唯一來源，磷酸二氫錢是氮的唯一

來源。

有的細(xì)菌能利用枸檬酸鈉為碳源，能在培養(yǎng)基上生長，并且能分解枸檬酸鹽，最后產(chǎn)生碳酸

鹽，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性。

培養(yǎng)基中的澳麝香草酚藍(lán)指示劑由綠色變?yōu)樯钏{(lán)色。

不能利用枸椽酸鹽為碳源的細(xì)菌在該培養(yǎng)基上不生長，培養(yǎng)基不變色。

方法：

將被檢細(xì)菌的菌懸液（啥是菌懸液？-挑取菌苔后，洗至生理鹽水中）接種到枸椽酸鹽培養(yǎng)

基上，37℃培養(yǎng)24h,觀察結(jié)果。

結(jié)果：

培養(yǎng)基上有菌生長，培養(yǎng)基變?yōu)樯钏{(lán)色為陽性，對照菌是產(chǎn)氣腸桿菌；若培養(yǎng)基不變色，則

繼續(xù)培養(yǎng)7天，培養(yǎng)基仍不變色者為陰性，對照菌為大腸桿菌。

5.4呼吸酶類試驗(yàn)

5.4.1氧化醐試驗(yàn)

原理：某些細(xì)菌具有氧化酶，能將二甲基對苯二胺或四甲基對苯二胺試劑氧化（先使細(xì)胞色

素C氧化，電子傳遞體）成紅色配類化合物。

方法：取白色潔凈濾紙蘸取待測菌落，加鹽酸二甲基對苯二胺溶液1滴；Ewing氏改進(jìn)法,

再加a-蔡酚溶液1滴。

結(jié)果：陽性者立即出現(xiàn)粉紅色，并逐漸加深，變?yōu)榈仙?，再到深紫色，Ewing氏改進(jìn)法陽

性于0.5min內(nèi)呈現(xiàn)鮮藍(lán)色，對照菌為綠膿桿菌（銅綠假單細(xì)胞菌）；陰性者顏色無變化,Ewing

氏法陰性為2min內(nèi)不變色，對照菌為大腸桿菌。

1%鹽酸二甲基對苯二胺溶液要避免接觸含鐵物質(zhì)，防止出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。此試劑應(yīng)少量新

鮮配制，于冰箱內(nèi)避光保存，也可購置氧化酶試條。

該實(shí)驗(yàn)用于分辨革蘭氏陰性桿菌中的腸桿菌科（陰性）與弧菌科（陽性）。

5.4.2觸酶活力試驗(yàn)

原理：具有觸酶的細(xì)菌能催化過氧化酶，放出生態(tài)氧，繼而形成氧分子，出現(xiàn)氣泡。

方法：取3%過氧化氫0.5ml,滴加到不含血液的被檢細(xì)菌瓊脂培養(yǎng)物上，或滴加到不含血液

的肉湯培養(yǎng)物中，觀察結(jié)果。

結(jié)果：培養(yǎng)物出現(xiàn)氣泡者為陽性。

說明：過氧化氫濃度過高（30%）會(huì)產(chǎn)生氣泡出現(xiàn)假陽性；血液中含有觸能，容易出現(xiàn)假陽

性。

5.4.3硝酸鹽還原試驗(yàn)

原理：某些細(xì)菌能將培養(yǎng)基中的硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，亞硝酸鹽與醋酸作用生成亞硝酸,

亞硝酸與試劑中的對氨基苯磺酸作用生成重氮苯磺酸，再與a-蔡胺結(jié)合，生成N-a一蔡胺偶

氮苯磺酸（紅色）。

方法：將被檢細(xì)菌接種于硝酸鹽培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)1~4天，每天吸取培養(yǎng)物2ml,加甲液

（對氨基苯磺酸0.8g,5mol/L醋酸100ml）和乙液（a-蔡胺0.5g,5mol/L醋酸100ml）各

數(shù)滴，同時(shí)以為接種細(xì)菌的培養(yǎng)基作對照，觀察結(jié)果。

結(jié)果：出現(xiàn)紅色為陽性。

說明：亞硝酸鹽在自然界分布很廣，容易污染試劑，硝酸鹽不純或保管不妥也可能含有亞硝

酸鹽，因此必須做空白對照；繁殖迅速而還原硝酸鹽能力強(qiáng)的細(xì)菌如果培養(yǎng)時(shí)間過久，可能

將亞硝酸鹽全部分解為氨和氮，出現(xiàn)假陰性反應(yīng)，故需每天試驗(yàn)，空白對照。

5.5毒性酶類試驗(yàn)

5.5.1溶血試驗(yàn)

原理：某些細(xì)菌在代謝過程中，產(chǎn)生溶血素，能使人或動(dòng)物的紅細(xì)胞發(fā)生溶解。

方法：

1）平板法：將被檢細(xì)菌接種到血液瓊脂平板培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24h。

2）試管法：取被檢細(xì)菌16-18h肉湯培養(yǎng)物若干，加等量經(jīng)生理鹽水洗滌三次的2%羊紅細(xì)

胞懸液，置于37℃水浴箱中，30min后觀察結(jié)果。

結(jié)果：

1）平板法：若菌落周圍出現(xiàn)透明的溶血環(huán)，為完全溶血（B溶血），菌落周圍出現(xiàn)綠色溶血

環(huán)，為不完全溶血（a溶血），無溶血環(huán)為不溶血（Y溶血）。

2）試管法：液體澄清透明為溶血，陽性。

5.5.2鏈激酶試驗(yàn)

原理：A群鏈球菌在代謝過程中，產(chǎn)生鏈激酶，能激活血液中的纖維蛋白酶原為溶纖維蛋白

酶，促使纖維蛋白凝塊溶解。

方法：取血漿0.2ml,放入滅菌小試管中，加無菌生理鹽水0.8ml,再加被檢細(xì)菌18-24h肉

湯培養(yǎng)物0.5ml,充分混勻后，再加入0.25%氯化鈣水溶液0.25ml,置于37C水浴中，觀察

結(jié)果。

結(jié)果：lOmin內(nèi)血漿先凝固，而后又開始溶解，溶解時(shí)間與鏈激能含量成正比。鏈激醐含量

多時(shí):20min內(nèi)凝固的血漿完全溶解。如無變化，應(yīng)在水浴中持續(xù)2h、24h,分別觀察結(jié)果。

血漿凝塊完全溶解者為陽性，時(shí)間越短表明毒性越強(qiáng)。24h血凝塊仍不溶解者為陰性。

5.5.3血漿凝固酶試驗(yàn)

原理：某些細(xì)菌能產(chǎn)生血漿凝固酶，分兩種，?種結(jié)合在細(xì)菌細(xì)胞壁上，遇到血漿直接作用

于血漿的纖維蛋白，使細(xì)菌凝成顆粒狀，使用玻片法；另種分泌到細(xì)菌細(xì)胞外，稱為游離

血漿凝固酶，能使血漿中的纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白，使用試管法試驗(yàn)。

方法：

1）玻片法：取生理鹽水2滴，分別滴于載玻片上，以接種環(huán)挑取被檢細(xì)菌菌落，放在2滴

生理鹽水中，研磨成濃菌懸液。在1滴懸液中加1滴未稀釋的血漿，另一滴加入1滴生理鹽

水作為對照，迅速搖動(dòng)，觀察結(jié)果。

2）試管法：取3支小試管，每支加1:4稀釋的新鮮血漿0.5ml,其中1支加被檢細(xì)菌生理鹽

水懸液或肉湯培養(yǎng)物0.5ml,另??支加陽性菌株生理鹽水懸液或肉湯培養(yǎng)物0.5ml作陽性對

照，再一支加生理鹽水或肉湯培養(yǎng)液0.5ml作陰性對照。3支試管置于37℃水浴箱中，每隔

30min觀察一次結(jié)果。

結(jié)果：

1）玻片法：若在加血漿的1滴中迅速出現(xiàn)凝固顆粒，在加生理鹽水對照的1滴中未出現(xiàn)凝

固顆粒，為陽性；若超過2min才開始出現(xiàn)凝固顆粒者不作陽性（多為非致病性）。

2）試管法：6h內(nèi)，若試驗(yàn)管和陽性對照管出現(xiàn)凝固，陰性對照管不出現(xiàn)凝固，為陽性；多

數(shù)陽性細(xì)菌在0.5-lh內(nèi)發(fā)生凝固。

5.6嗜鹽試驗(yàn)

原理：在高于3%的氯化鈉培養(yǎng)基上不生長或生長不好，但能在無言培養(yǎng)基上生長的，稱為

非嗜鹽菌，如腸桿菌科。能在3%-6%氯化鈉培養(yǎng)基上生長，但在無鹽培養(yǎng)基上不生長，稱為

嗜鹽菌，如副溶血性弧菌。在無鹽和高鹽培養(yǎng)基上均能生長，但長得不茂盛，稱為耐鹽菌,

如葡萄球菌、銅綠假單細(xì)胞菌。

方法:取被檢細(xì)菌分別接種到1支無鹽葡萄糖蛋白陳水和一支5%-6%氯化鈉葡萄糖蛋白陳水

中，37℃培養(yǎng)6-24h,觀察生長情況。

結(jié)果：培養(yǎng)物出現(xiàn)渾濁生長為陽性。

6、菌種保存

6.1普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基保存法

將細(xì)菌的普通瓊脂斜面培養(yǎng)物放于4℃冰箱或室溫10-16℃冷暗處保存。

用這種方法只可保存數(shù)天，只作暫時(shí)保存用。

6.2半固體培養(yǎng)基穿刺保存法

用穿刺接種法將細(xì)菌培養(yǎng)物接種于半固體培養(yǎng)基內(nèi)，37℃培養(yǎng)18-24h后，加一層厚度約為

1cm的無菌液體石蠟，置于室溫中保存。腸道桿菌及葡萄球菌等用這種方法一般可保存3-6

個(gè)月。傳代移種時(shí)，將半固體菌種管傾斜，使液體石蠟流至一邊，再取少量菌苔移種于新的

培養(yǎng)基（液體培養(yǎng)基復(fù)蘇能力比固體強(qiáng)）。將蘸有少量液體石蠟的接種環(huán)浸于95%酒精中片

刻，再燒灼滅菌，以免直接在酒精燈下燒灼時(shí)，液體石蠟四濺，引起污染。

6.3冷凍干燥保存法

即將要保存的微生物樣品先經(jīng)過低溫預(yù)凍，然后在低溫狀態(tài)下進(jìn)行減壓干燥（升華干燥）。

此法保存菌種時(shí)間長，如沙門氏菌等腸桿菌科菌種能保存20年之久。

沙門氏菌

本帖最后由渾身是血于2011-4-1811:32編輯

1、簡介：

通過人或動(dòng)物的消化道傳播，

在各類食物中毒案例中排前兩位，

主要并發(fā)癥為腸胃炎、敗血癥，

常見的被污染食品為：

肉制品：美國約20%,日本約10.3%,英國約9.9%

蛋制品：3.9%~43.7%,取決于蛋殼污染程度

蔬菜：歐美生食較多

污染的原因：

生前帶菌交叉污染

帶菌者污染

患病者污染

水源污染

2、生物學(xué)特性：

腸桿菌科，沙門氏菌屬，6個(gè)亞屬l~VI,亞屬川稱為亞利桑那菌。

沙門氏菌為革蘭氏陰性菌，短桿菌，無芽抱，無莢膜，周生鞭毛，有動(dòng)力（也有無動(dòng)力的變

種），

需氧兼性厭氧，35℃~37℃為最適生長溫度，pH6.8~7.8為最適，

能在營養(yǎng)瓊脂上生長，菌落直徑2~3mm,圓形或卵形，無色半透明，液體培養(yǎng)基中混合均

勻生長。

不發(fā)酵乳糖、蔗糖，不液化明膠，不能分解蛋白質(zhì)，也不產(chǎn)生靛基質(zhì)，不分解尿素，有規(guī)律

的發(fā)酵葡萄糖并產(chǎn)生氣體。

與埃希氏菌屬的主要區(qū)別在硫化氫反應(yīng)和乳糖反應(yīng)。

對熱及外界環(huán)境抵抗力中等，60℃20-30min即被殺死，普通水中不易繁殖但可存活2~3周，

自然環(huán)境糞便中生存1~2月，干燥墊草中生存8~20周，冰箱中生存3-4月，-5℃存活10月；

對化學(xué)藥品抵抗力較弱，對氯霉素敏感，5%苯酚5min即可殺死，膽鹽、煌綠及孔雀綠抑制

作用大但對腸桿菌抑制作用弱，可用以制備選擇性培養(yǎng)基。

3、抗原構(gòu)造和分類：

菌體抗原，記為O抗原，多糖-類脂-蛋白質(zhì)復(fù)合物，加熱至100℃2.5h不能被破壞，也不能

被乙醇和0.1%石碳酸破壞，多糖決定O抗原特異性，用于分群。

鞭毛抗原，記為H抗原，蛋白質(zhì)，不耐熱，60℃15min或乙醇處理后被破壞，沙門H抗原

有兩種，第一相特異相，第二相非特異相，用于分型。

表面抗原，要求掌握Vi抗原，糖脂，60℃30min或100℃5min即可破壞，可阻止O抗原與

0抗體的特異性凝集反應(yīng)，但Vi抗原被破壞后O抗體仍可和相應(yīng)的?？乖?。

4、變異性

4.1S-R初次分離菌株一般是光滑型，經(jīng)長期人工傳代培養(yǎng)，菌體特意多糖抗原喪失，在鹽水

中自凝。

4.2H-0有鞭毛的細(xì)菌失去鞭毛的變異。

4.3位相變異雙相H抗原的沙門氏菌變成只有其中某一相H抗原的單相菌。

沙門氏菌血清學(xué)分型時(shí)，如遇到單相菌，特別是只有第二相時(shí)，需反復(fù)分離和誘導(dǎo)出第相

方可鑒定。

4.4V-W失去Vi抗原

5、檢驗(yàn)原理

食品中沙門氏菌含量較少，且常由于食品加工過程使其受到損傷而處于瀕死狀態(tài)，所以對某

些加工食品（哪些不要？-一般生鮮蛋或肉類）必須經(jīng)過前增菌處理，即無選擇性的培養(yǎng)基

使其恢復(fù)活力，再進(jìn)行選擇性增菌，是沙門增殖，其他大多數(shù)細(xì)菌收到抑制。

利用沙門的生化特征，借助于三糖鐵、靛基質(zhì)、尿素、KCN、賴氨酸等試驗(yàn)可與腸道其他菌

屬相鑒別。

通過菌種特殊的抗原結(jié)構(gòu)（O抗原為主），可以把他們分辨出來。

復(fù)活（前增菌）一培養(yǎng)（選擇性增菌）一分離（平板劃線分離培養(yǎng)）一鑒定（生化鑒定/血

清鑒定）

6、操作步驟

6.1前增菌

25g（ml）檢樣放入225ml緩沖蛋白陳水BPW（BufferedPeptoneWater）均質(zhì)（上課時(shí)強(qiáng)調(diào)

了拍打式均質(zhì)器的優(yōu)越性），36c±1℃培養(yǎng)8~18h（時(shí)間按照什么來定？-一般?天不到18

小時(shí)）。

酸性或堿性樣品需用lmol/ml無菌氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)pH至6.8+0.2,用試紙測量。

6.2增菌

搖動(dòng)增菌培養(yǎng)物，移1ml轉(zhuǎn)種于10ml四硫磺酸鈉煌綠TTB增菌液中,42℃±培養(yǎng)18~24h。

適合除傷寒副傷寒沙門氏菌培養(yǎng)。淺黃色。

同時(shí)，移1ml轉(zhuǎn)種于10ml亞硒酸鹽胱氨酸SC增菌液中，36℃±1℃培養(yǎng)18~24h。適合傷寒

副傷寒沙門氏菌培養(yǎng)。

亞硒酸氫鈉對革蘭氏陰性菌G-有毒，磷酸鹽中和毒性，促沙抑大，亞硒酸鹽還原時(shí).，pH±

升，乳糖分解產(chǎn)酸，磷酸鹽緩沖，維持培養(yǎng)基中性。煮沸，流動(dòng)蒸汽滅菌，不能高壓滅菌。

淺棕色？待查。

6.3分離

6.3.1亞硫酸鈕（BS）瓊脂平板：強(qiáng)選擇性，強(qiáng)烈抑制大腸類，略抑制沙門，需延長培養(yǎng)時(shí)

間，無乳糖指示系統(tǒng)，有硫化氫指示系統(tǒng)。還原亞硫酸銹為硫化鈍，產(chǎn)物為黑色或褐色，亞

屬川有金屬光澤。滅菌方式為煮沸3次。本身為綠色。

用接種環(huán)取增菌液1環(huán)，劃線接種，36℃±1℃培養(yǎng)40~48h。

典型菌落為黑色或褐色，亞利桑那菌為黑色有金屬光澤。

6.3.2三種平板任選其一，用接種環(huán)取增菌液1環(huán)，劃線接種，36℃±1℃培養(yǎng)18~24h。

木糖賴氨酸脫氧膽鹽XLD：分解乳糖粉紅色？待確認(rèn)。產(chǎn)生硫化氫，黑色中心周邊無色。

HE瓊脂：分解乳糖為黃色，不分解乳糖為藍(lán)綠色或藍(lán)色。

科瑪嘉沙門氏菌顯色平板：沙門氏為紫紅色，埃希氏菌為藍(lán)色。

6.4生化試驗(yàn)及初步血清學(xué)鑒定

6.4.1初步鑒定

平板上挑取2~5個(gè)典型或可疑菌落，分別接種三糖鐵TSI（表面劃s,內(nèi)部穿刺）和賴氨酸

脫竣酶（和營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基？偶上課的時(shí)候沒聽到--b-營養(yǎng)瓊脂要同時(shí)做），36℃±1℃培養(yǎng)

18~24h,必要時(shí)延長到48小時(shí)（按照什么延長？）。

三糖鐵陰性為絳紅色，陽性為黃色，

大腸發(fā)酵乳糖，令三糖鐵斜面和底層變?yōu)辄S色。

大腸？具有某種氨基酸的脫竣酶，可使氨基酸脫去竣基產(chǎn)生氮和二氧化碳，氨使pH>7,此

時(shí)指示劑浪麝香草酚藍(lán)顯藍(lán)色（偏紫色），酸性為黃色。

因此可排除三糖鐵瓊脂內(nèi)斜面產(chǎn)酸（陽性）、底層產(chǎn)酸（陽性）、賴氨酸脫竣酶試驗(yàn)陰性（藍(lán)

色？）的菌株。

其他反應(yīng)結(jié)果均有沙門氏菌屬的可能，也均有不是的可能。

三糖鐵反映結(jié)果中+（-）和+/-的表達(dá)意義有什么區(qū)別？-+（-）表示有可能陽性也有可能陰性,+/-

為大多數(shù)陽性小部分陰性

6.4.2生化試驗(yàn)

初步鑒定的同一批菌落，接種尿素瓊脂PH7.2和胰蛋白豚水（靛基質(zhì)）、氟化鉀培養(yǎng)基，36℃

±1℃培養(yǎng)18~24h,必要時(shí)延長到48小時(shí)。

靛基質(zhì)試驗(yàn)（口引跺）：

埃希氏菌能分解蛋白陳中的色氨酸，產(chǎn)生的靛基質(zhì)與對二甲氨基苯甲醛結(jié)合，形成紅色化合

物。

將被檢細(xì)菌接種到胰蛋白陳水培養(yǎng)基中，培養(yǎng)后滴加數(shù)滴試劑（啥試劑？）于培養(yǎng)基液面，

輕輕搖動(dòng)，觀察結(jié)果。

出現(xiàn)紅色為陽性，出現(xiàn)黃色為陰性。陽性對照是埃希氏菌，陰性對照是產(chǎn)氣腸桿菌。

尿素酶試驗(yàn)：

某些細(xì)菌具有尿素酶，如變形桿菌，在含有尿素的培養(yǎng)基中，能分解尿素，產(chǎn)生氨，使培養(yǎng)

基呈堿性，此時(shí)培養(yǎng)基中酚紅指示劑顯糾色。

把被檢細(xì)菌接種到尿素固體斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)4h檢查一次，再每天檢查??次，培養(yǎng)5天，

觀察結(jié)果。

出現(xiàn)紅色為陽性，陽性對照菌是變形桿菌，陰性對照菌是大腸埃希氏菌。

氟化鉀試驗(yàn)：沒說，偶確定沒說。。。

反應(yīng)序號A1：硫化氫陽性，靛基質(zhì)陰性，尿素瓊脂陰性，氟化鉀陰性，賴氨酸脫竣酶陽性

為典型反應(yīng)，判定為沙門氏菌屬。尿素、氟化鉀、賴氨酸脫竣基三項(xiàng)中有兩項(xiàng)異常，為非沙

門氏菌。

反應(yīng)序號A2：硫化氫陽性，靛基質(zhì)陽性，尿素瓊脂陰性，氟化鉀陰性，賴氨酸脫竣酶陽性，

需補(bǔ)做甘露醉和山梨酥試驗(yàn)。沙門氏菌靛基質(zhì)陽性變體兩項(xiàng)都是陽性，但需要結(jié)合血清學(xué)鑒

定結(jié)果進(jìn)行判定。

方法不知道。

反應(yīng)序號A3：硫化氫陰性，靛基質(zhì)陰性，尿素瓊脂陰性，氟化鉀陰性，賴城酸脫竣酶多數(shù)

陽性，少數(shù)陰性，補(bǔ)做ONPG,陰性為沙門氏菌，賴氨酸脫竣醐基本陽性，只有甲型副傷寒

沙門陰性。

ONPG即O-nitrophenyl-B-D-galactopyranside鄰硝基酚-B-D-半乳糖甘。發(fā)酵乳糖的細(xì)菌有兩

類酶，滲透酶和B-半乳糖甘酶，滲透酶將乳糖分子帶入菌細(xì)胞內(nèi)，B-半乳糖甘酶可將乳糖

的B-半乳糖甘鏈切斷，產(chǎn)生葡萄糖和半乳糖。遲緩發(fā)酵乳糖的細(xì)菌缺乏滲透酶，ONPG滲入

細(xì)胞內(nèi)，被B-半乳糖甘酶分解產(chǎn)生鄰位硝基苯酚，顯黃色。將被檢細(xì)菌接種到1%的乳糖肉

湯瓊脂培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)過夜，取菌苔接種于0.25ml生理鹽水中做成懸液，加入1滴甲

苯，并充分震搖，使酶釋放。在懸液中再加入ONPG液0.25ml,混勻，置于37℃培養(yǎng)箱或

水浴箱中，分別在20min和3h后觀察培養(yǎng)液反映結(jié)果。呈黃色為陽性，一般在20~30min

即顯黃色，不出現(xiàn)黃色為陰性。陽性對照菌為枸緣酸鹽桿菌、亞利桑那菌，陰性對照菌是沙

門氏菌。

6.4.3自動(dòng)鑒定方法

根據(jù)初步鑒定結(jié)果，從營養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落，用生理鹽水制備成濃度適當(dāng)?shù)木鷳乙?/p>

（多少濃度適當(dāng)？），使用API20E生化鑒定試劑盒或VITEK全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)進(jìn)行鑒定。

6.5A-F多價(jià)診斷血清凝集試驗(yàn)

當(dāng)圖片染色和生化反應(yīng)都疑為沙門氏時(shí)，應(yīng)用沙門氏屬A-F群多價(jià)0診斷血清進(jìn)行凝集試驗(yàn)，

同時(shí)用生理鹽水作對照。

6.5.1抗原準(zhǔn)備

1.2%~1.5%瓊脂培養(yǎng)物作為玻片凝集試驗(yàn)的抗原。

0血清不凝集時(shí)，將菌株接種在2%~3%瓊脂培養(yǎng)基上再檢查，挑取菌苔于1ml生理鹽水中

做成濃菌液，酒精燈火焰上煮沸后在檢查。檢查是否Vi抗原作用。

H抗原發(fā)育不良時(shí)，將菌株接種在0.55%~0.65%半固體瓊脂平板中央，菌落蔓延生長時(shí)，在

其邊緣部分取菌檢查，或?qū)⒕晖ㄟ^裝有0.3%~0.4%半固體瓊脂的小玻管1~2次，自遠(yuǎn)端取

菌培養(yǎng)后在檢查。（如何通過小玻管？-穿刺）

6.5.2多價(jià)菌體抗原。鑒定

在玻片上劃出兩個(gè)約lcmX2cm區(qū)域，挑取1環(huán)待測菌，各放（需確定標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)作）1/2環(huán)于

玻片上的每一個(gè)區(qū)域上部，在其中一個(gè)區(qū)域下部加入一滴生理鹽水，作為對照。再用無菌接

種環(huán)或針分別將兩個(gè)區(qū)域菌落研成乳狀液。將玻片傾斜，搖動(dòng)混合1分鐘，并對著黑暗背景

觀察，任何程度的凝集現(xiàn)象皆為陽性反應(yīng)。

6.5.3多價(jià)鞭毛抗原H鑒定

與菌體抗原類同。

7、檢查結(jié)果

綜合生化試驗(yàn)和A-F多價(jià)診斷血清凝集結(jié)果，報(bào)告：25g（ml）樣品檢出或未檢出沙門氏菌，

必要時(shí)將菌株送至專業(yè)檢驗(yàn)檢疫部門進(jìn)一步血清學(xué)鑒定。

志賀氏菌

本帖最后由渾身是血于2010-12-1317:39編輯

1、生物學(xué)特性

革蘭氏陰性短桿菌，長2~3um,寬0.5~0.7um,無芽泡，無莢膜，無鞭毛，不運(yùn)動(dòng)，鞭毛

是與沙門氏菌的顯著不同點(diǎn)。

兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，營養(yǎng)瓊脂上生長良好，培養(yǎng)18~24h,圓形菌落，微凸，光滑，

濕潤，無色半透明，邊緣整齊，直徑約2mm（宋內(nèi)氏扁平粗糙）。最適溫度37℃,最適pH

值7.2~7.4,肉湯培養(yǎng)基中均勻渾濁生長，不形成沉淀。

不發(fā)酵乳糖（宋內(nèi)氏遲緩發(fā)酵），發(fā)酵葡萄糖一般不產(chǎn)氣（福氏6型微量產(chǎn)氣），不產(chǎn)生硫化

氫。

主要鑒別特征為不運(yùn)動(dòng)，對各種糖的利用力較差，并且在含糖培養(yǎng)基內(nèi)不形成氣體。

1.1抗原構(gòu)造與分型

0抗原和K抗原，無H抗原。?？乖欠诸愐罁?jù)，有群特異性和型特異性兩種。根據(jù)生化反

應(yīng)和0抗原不同，將志賀氏菌分為4個(gè)血清群和40+血清型。?？乖?00℃60min不受破壞。

K抗原能阻斷0抗原與相應(yīng)抗血清的凝集作用。加熱至100℃保持60min可消除K抗原的阻

礙作用。

1.2抵抗力

對理化因素抵抗力弱，外界環(huán)境中宋氏最強(qiáng)，福氏次之，痢疾最弱。潮濕土壤中存活34天，

37℃水中20天，冰中3個(gè)月，20℃糞便11天，日光直射30min可殺死，56~60℃19min即

可殺死，1%酒碳酸中浸泡15-30min可殺死，高濃度膽汁可抑制生長，對磺胺、鏈霉素、氯

霉素敏感，但易產(chǎn)生耐藥性。

2、實(shí)驗(yàn)原理

樣品在GN增菌液中增菌6~8h后，HE或SS及麥康凱或EMB選擇性平板進(jìn)行分離，三糖鐵

初步生化試驗(yàn)，半固體培養(yǎng)基動(dòng)力試驗(yàn)，如三糖鐵上：斜面陰性，底層陽性，不產(chǎn)氣，硫化

氫陰性，無動(dòng)力，可疑為志賀氏菌。

3、操作步驟

3.1增菌

25g檢樣加入裝有225mlGN增菌液的500ml廣口瓶內(nèi)（必要性確認(rèn)），打碎研碎乳化，于

36℃培養(yǎng)6~8h,當(dāng)培養(yǎng)液出現(xiàn)輕微渾濁時(shí)終止培養(yǎng)。

志賀氏菌在常溫存活期較短，24h內(nèi)檢驗(yàn)，保存在冰箱，更長時(shí)間應(yīng)放低溫冰箱。GN抑菌

效果差，時(shí)間過長易使雜菌繁殖。

3.2分離培養(yǎng)

取增菌液1環(huán)，HE或SS平板，麥康凱或EMB平板，各劃一個(gè)平板，36℃±1℃培養(yǎng)18~24h,

志賀氏菌在這些培養(yǎng)基上生成無色透明不發(fā)酵乳糖的較小菌落。

3.3初步生化試驗(yàn)

挑取平板上可疑菌落，接種三糖鐵瓊脂和葡萄糖半固體各一管。2~5個(gè)菌落。36℃±1℃培

養(yǎng)18~24h,分別觀察結(jié)果。

棄去：

三糖鐵瓊脂斜面上蔓延生長的培養(yǎng)物；

18~24h內(nèi)發(fā)酵乳糖、蔗糖的培養(yǎng)物；

不分解葡萄糖和只生長在半固體表面的培養(yǎng)物；

產(chǎn)氣的培養(yǎng)物；

有動(dòng)力的培養(yǎng)物；（怎么算有動(dòng)力？這我沒聽到-出現(xiàn)放射性生長為有動(dòng)力）

產(chǎn)生硫化氫的培養(yǎng)物。

其他的做血清學(xué)分型和進(jìn)一步生化試驗(yàn)。

3.4血清學(xué)分型

挑取三糖鐵培養(yǎng)物，做玻片凝集試驗(yàn)。

4種志賀氏菌多價(jià)血清檢查，不凝集一煮沸后再檢查；凝集一用Al、A2、B群多價(jià)、D群血

清分別試驗(yàn)。（?）

B群福氏一群和型因子血清分別檢查。（??）

福氏先用群因子血清檢查，再根據(jù)群因子血清出現(xiàn)凝集的結(jié)果，依次選用型因子血清檢查。

（???）

4種多價(jià)血清不凝集的菌株，用鮑氏多價(jià)1,2,3,分別檢查，并進(jìn)一步用1~15各型因子血清檢

查。

鮑氏不凝集，用痢疾志賀氏菌3-12型多價(jià)血清及各型因子血清檢查。

3.5進(jìn)一步生化試驗(yàn)

血清學(xué)分型的同時(shí)，做葡糖糖鏤、西蒙氏檸檬酸鹽和賴氨酸、鳥樹酸脫竣酶、PH7.2尿素、

氟化鉀生長，水楊甘和七葉背的分解。

志賀氏菌的培養(yǎng)物均為陰性結(jié)果（宋內(nèi)氏、鮑氏13型鳥氨酸陽性），氧化酶陰性，革蘭氏陰

性。

已判定為志賀氏菌屬的培養(yǎng)物，進(jìn)一步做50g/L乳糖、甘露糖、棉籽糖、甘油發(fā)酵、靛基質(zhì)

試驗(yàn)。

金黃色葡萄球菌

本帖最后由渾身是血于2010-12-1415:03編輯

葡萄球菌的菌落顏色?般分為三種：金黃色、白色、檸檬色。

《伯杰氏鑒定細(xì)菌學(xué)手冊》（第8版）按照生理化學(xué)組成將其分為：金黃色葡萄球菌、表皮

葡萄球菌、腐生葡萄球菌。

腐生一般為非致病菌，表皮偶爾致病，金葡是引起人類疾病的主要葡萄球菌。

金葡菌除了可引起皮膚組織炎癥外，還可以產(chǎn)生腸毒素，

腸毒素是一種外毒素，有耐熱性，加熱至100℃30min不被破壞，要使其完全破壞需煮沸2h。

引起人類食物中毒，毒素型食物中毒（還有其他哪些類別的食物中毒？）。

金葡菌對人的健康是一種潛在危險(xiǎn)，所以檢查食品中的金黃色葡萄球菌及數(shù)量具有重要的實(shí)

際意義。

1、生物學(xué)特性

球形，直徑為0.4~1.2um,致病性葡萄球菌般較非致病性菌小，且各個(gè)菌體大小及排列

也較整齊。

多個(gè)平面不規(guī)則分裂，堆積成為葡萄串裝排列，

液體培養(yǎng)基中生長，常呈雙球或短鏈裝排列。

無鞭毛無芽抱，一般不形成莢膜，易被堿性染料著色，革蘭氏陽性，

衰老、死亡、或被白細(xì)胞吞噬后轉(zhuǎn)為革蘭氏陰性G-,對青霉素有抗藥性的菌株也為G-。

營養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基上生長良好，

需氧兼性厭氧，最適生長溫度37℃,最適pH值7.4。

耐鹽性強(qiáng)，10~15%氯化鈉培養(yǎng)基中能生長，

20~30%的二氧化碳環(huán)境中培養(yǎng)，可產(chǎn)生大量毒素。

肉湯培養(yǎng)基中生長迅速，37℃培養(yǎng)24h,呈均勻渾濁生長，延長培養(yǎng)時(shí)間，管底出現(xiàn)少量沉

淀，搖動(dòng)時(shí)易消散。

營養(yǎng)瓊脂上培養(yǎng)24~48h后，形成的菌落圓形凸起，邊緣整齊，表面光滑濕潤有光澤，不透

明，菌落直徑2mm,也有部分4~5mm,

可產(chǎn)生脂溶性色素，不溶于水，故只限于培養(yǎng)物，不外滲至培養(yǎng)基中。

22c或含糖類、牛乳及血清的培養(yǎng)基中色素形成最好。

在血瓊脂平板上形成的菌落較大，多數(shù)致病性菌株可產(chǎn)生溶血毒素，使菌落周圍產(chǎn)生透明溶

血圈（B溶血）。

觸媒反應(yīng)（需具體了解）陽性，厭氧條件下能分解甘露醇，甲基紅試驗(yàn)陽性。

葡萄球菌抵抗力較強(qiáng)，是不形成芽抱的細(xì)菌中的最強(qiáng)者，

干燥膿汁或血液中可存活數(shù)月，

80℃30min才能殺死，煮沸可迅速殺死,5%石碳酸lg/L汞（紫藥水兒?）中10~15min死亡。

對某些染料較敏感，1：100000~1：200000稀釋的龍膽紫溶液能抑制其生長。

對磺胺類藥物敏感較低。

對青霉素、紅霉素、慶大霉素高度敏感，很多菌株對青霉素有耐藥性。

△葡萄球菌的致病力取決于細(xì)菌產(chǎn)生的毒素和酶的能力，主要有：

1）溶血毒素

多數(shù)致病菌能產(chǎn)生，根據(jù)其對動(dòng)物細(xì)胞的溶血范圍、抗原性、溶血時(shí)所需溫度的不同，可

分為a、B、Y、6四種。

以a溶血素為主（先前說多數(shù)致病菌產(chǎn)生透明溶血圈B溶血，有何關(guān)聯(lián)？）。

2）殺白細(xì)胞素

可溶性物質(zhì)，有抗原性，能破壞白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。

致病和非致病性葡萄球菌均能被吞噬細(xì)胞吞噬，致病性葡萄球菌產(chǎn)生殺白細(xì)胞素，不僅不

被破壞，反能在吞噬細(xì)胞內(nèi)生長繁殖。

3）腸毒素

能引起人、貓、猴的急性腸胃炎，分6型，具有不同的血清學(xué)特性，A型引起的食物中毒

最多，B型、C型次之。

是一種可溶性蛋白質(zhì)，耐熱，100C30min不被破壞，不受胰蛋白酶影響。

4）血漿凝固酶

令含有枸緣酸鈉或肝素抗凝劑的兔血漿或人血漿發(fā)生凝固的酶。

大多數(shù)致病性產(chǎn)生，非致病性一般不產(chǎn)生。因此血漿凝固酶是鑒別葡萄球菌有無致病性的

重要指標(biāo)。

較耐熱，100°C30min或高壓消毒后仍保存部分活性，但易被蛋白分解酶破壞。

5）溶纖維蛋白酶

一種激酶（百度說“一般指從一個(gè)三磷酸核甘轉(zhuǎn)移磷酸基至受體分子的酶，受體分子通過

這個(gè)磷酸基的轉(zhuǎn)移獲得能量而被激活（變得更不穩(wěn)定），所以很多的激酶需要從NTP轉(zhuǎn)移磷

酸基”），可激活血漿蛋白原為血漿蛋白酶，是人、犬、豚鼠、家兔餓已經(jīng)凝固的纖維蛋白溶

解。

初次培養(yǎng)后，聚落周圍若出現(xiàn)一個(gè)不透明圈，表示產(chǎn)生凝固酶，繼續(xù)培養(yǎng)，不透明圈消失，

這是溶纖維蛋白酶作用的結(jié)果。

6）透明質(zhì)酸酶

透明質(zhì)酸有高度黏稠性，是機(jī)體結(jié)締組織中基質(zhì)的主要成分。

透明質(zhì)酸酶水解透明質(zhì)酸后，結(jié)締組織細(xì)胞間失去黏性，呈疏松狀態(tài)，有利于細(xì)菌和毒素

在機(jī)體內(nèi)擴(kuò)散，因此又稱擴(kuò)散因子。

7）脫氧核糖核酸酶

組織細(xì)胞及白血球崩解時(shí)，釋放出核酸，能增加組織滲出物的黏性，而該的能迅速分解之，

有利于細(xì)菌在組織中的擴(kuò)散。

脫氧核糖核酸酚是鑒定葡萄球菌毒力的又?指標(biāo)。

2、檢驗(yàn)原理

金葡耐鹽性強(qiáng)適宜生長鹽濃度為5%~7.5%,10%~15%能生長,可利用其選擇增菌,抑制雜菌。

金葡可產(chǎn)生溶血素，血平板上生長菌落周圍有溶血環(huán)。

可產(chǎn)生卵磷脂酶，分解卵磷脂，產(chǎn)生甘油酯和可溶性磷酸膽鹽，所以在BP平板上生長菌落

為黑色，周圍有渾濁帶，外層有一透明圈。

金葡菌可產(chǎn)生血漿凝固酶，可令血漿中的血漿蛋白酶原（酶原還是原？）變成血漿蛋白酶,

使血漿凝固，這是鑒定致病性金葡的重要指標(biāo)。

3、操作步驟（今年考2008版，10版只要求了解）

3.1取25g/ml樣品加入225ml磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000~10000r/min

均質(zhì)lmin-2min（或用拍打器）,制成1:10樣品勻液。

3.2取5ml勻液，接種于50ml7.5%氯化鈉肉湯（呈渾濁生長）或10%氯化鈉胰酪陳大豆肉

湯培養(yǎng)基（有時(shí)液體澄清，菌量多時(shí)渾濁生長）內(nèi)，36℃±1℃培養(yǎng)18~24h。

3.3取一環(huán)分別接種baird-parker平板（36℃±1℃培養(yǎng)18~24h）和血平板（36℃±1℃培養(yǎng)

18~24h或45~48h）。

3.4取可疑菌落做涂片染色、觀察溶血、血漿凝固酶試驗(yàn)

3.4.1BP瓊脂上菌落直徑為2~3mm,顏色呈灰色到黑色，邊緣淡色，周圍為一渾濁帶，外層

有一透明圈。血平板上菌落較大，圓形、光滑凸起、濕潤、白色或金黃色，周圍有完全透明

溶血圈。革蘭氏陽性球菌，排列成葡萄球狀，無芽抱、無莢膜，直