徐州經(jīng)濟技術(shù)開發(fā)區(qū)高級中學高中生物二學案DNA是主要的遺傳物質(zhì)三

學必求其心得，業(yè)必貴于專精學必求其心得，業(yè)必貴于專精學必求其心得，業(yè)必貴于專精活動四DNA的粗提取與鑒定實驗一、實驗原理1.DNA在NaCl溶液中的溶解度隨NaCl濃度的不同而不同。當NaCl的濃度為0．14mol/L時，DNA的溶解度最低。利用這一原理，可使溶解在NaCl溶液中的DNA析出.2.DNA不溶于酒精溶液，但是細胞中的其他許多物質(zhì)溶于酒精溶液。利用這一原理,可以進一步提取含雜質(zhì)較少的DNA。3.DNA遇二苯胺(沸水?。境伤{色；DNA還有遇甲基綠溶液被染成藍綠色的特性。上述兩種方法均可用于鑒定DNA的存在.二、材料用具雞血細胞液；鐵架臺,鐵環(huán)，鑷子，三腳架，酒精燈，石棉網(wǎng)，載玻片，玻璃棒,濾紙，滴管，量筒（100mL，1個),燒杯(100mL,1個，50mL、500mL各2個)，試管(20mL，2個)，漏斗，試管夾,紗布；體積分數(shù)為95%的酒精溶液（實驗前置于冰箱內(nèi)24h），蒸餾水,質(zhì)量濃度為0.1g/mL的檸檬酸鈉溶液，物質(zhì)的量濃度分別為2mol/L和0。015mol/L的氯化鈉溶液，二苯胺試劑三、方法步驟步驟操作方法原理制備雞血細胞液↓取0.1g提取細胞核物質(zhì)↓取20mL蒸餾水與約5～10mL的雞血細胞液混合并充分攪拌,然后用單層紗布過濾，取濾液于燒杯中溶解DNA↓取2mol/L的NaCl溶液40mL與上述濾液混合后,用玻璃棒沿一個方向攪拌1min析出DNA并濾取↓沿燒杯內(nèi)壁慢慢加入蒸餾水并輕輕攪拌,至白色絲狀粘稠物不再增加時停止加水，然后用多層紗布過濾，取紗布上的粘稠物DNA的再溶解↓用鑷子夾取紗布上的粘稠物放入20mL濃度為2mol/L氯化鈉溶液中，攪拌至完全溶解，然后用兩層紗布過濾，取其濾液放入小燒杯中提取較純凈的DNA↓取95％的、冷卻的酒精50mL與濾液混合攪拌，待出現(xiàn)絲狀物時用玻璃棒將其卷起DNA的鑒定取兩支20mL的試管，各加入物質(zhì)的量濃度為0．015mol／L的NaCl溶液5mL,將絲狀物溶解.然后放入其中一支試管中，用玻璃棒攪拌，使絲狀物溶解。然后，向兩支試管中各加入4mL的二苯胺試劑。混合均勻后，將試管置于沸水中加熱5min，等試管冷卻后，觀察并且比較兩支試管中溶液顏色的變化。四、常見問題分析

1。從雞血細胞核中提取的物質(zhì)是DNA嗎?2。怎樣提高血細胞因低滲而破裂的效率?血細胞的細胞膜對低滲溶液有一定的抵抗能力,這稱為滲透脆性.一般而言，血細胞與蒸餾水相混合而使血細胞處于極度的低滲環(huán)境之中,細胞因大量失水而致最終破裂并釋放出胞內(nèi)物（包括細胞核)。為促進細胞在低滲條件下破裂，可以輔以快速而有力的攪拌，使之受機械震蕩而更易破裂。3。怎樣才能把血細胞釋放的DNA濾入收集的濾液中？這一步較難處理，在過濾過程中常常發(fā)生因粘稠的果胨樣物質(zhì)堵塞過濾紗布的網(wǎng)眼而使后續(xù)的過濾難以完成,很多DNA沒能濾入濾液中,這是造成失敗的主要原因之一。解決的方法有：過濾時待過濾溶液倒入漏斗的速度應(yīng)緩慢,以免沉積于溶液中層的膠狀物一下就把紗布堵住，使過濾不能完成；一旦出現(xiàn)大量膠狀物使過濾不能進行下去,切忌用力擠壓而使膠狀物也濾入濾液之中,可以把膠狀物重新用適量的2molNaCl溶液進行攪拌,使其中的DNA得到溶解，然后再進行過濾。4。實驗中看到的絲狀物的粗細是不是DNA分子的直徑呢?不是。因為DNA分子直徑只有2nm.絲狀物是多個DNA分子聚在一起形成的。5。盛放雞血細胞液的容器，最好是塑料容器.雞血細胞破碎以后釋放出的DNA,容易被玻璃容器吸附，由于細胞內(nèi)DNA的含量本來就比較少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的DNA就會更少.因此,實驗過程中最好使用塑料的燒杯和試管,這樣可以減少提取過程中DNA的損失。同理,玻璃棒有吸附DNA的作用，可通過緩緩旋轉(zhuǎn)玻璃棒的方法卷起濃縮后的DNA絲狀物。6。利用DNA在濃度較低的氯化鈉溶液中溶解度小的原理,向含有DNA的濃度較高的氯化鈉溶液中加入大量(300mL)蒸