DBS13 009-2017 食品安全地方標(biāo)準(zhǔn) 小麥粉中偶氮甲酰胺的測(cè)定-高效液相色譜法

DBS13——高效液相色譜法河北省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)發(fā)布DBS13/009—2017本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009規(guī)定的格式編寫。本標(biāo)準(zhǔn)由河北省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)于2017年11月8日首次發(fā)布。1DBS13/009—2017食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)小麥粉中偶氮甲酰胺的測(cè)定—高效液相色譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了小麥粉中偶氮甲酰胺的高效液相色譜測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于小麥粉中偶氮甲酰胺含量的檢測(cè)。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T5009.1食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法理化部分總則GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。3原理樣品中的偶氮甲酰胺用丙酮進(jìn)行提取，經(jīng)濃縮、脫脂、過濾后，高效液相色譜法測(cè)定，外標(biāo)法定量。4試劑和材料除另有規(guī)定外，試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水符合GB/T6682一級(jí)水要求。4.1乙腈：色譜純。4.2丙酮：色譜純。4.3正己烷：色譜純。4.4磷酸。4.5磷酸氫二鉀（K2HPO4·3H2O）。4.6辛烷磺酸鈉。4.7標(biāo)準(zhǔn)品：偶氮甲酰胺（C2H6N6O2，CAS號(hào)：123-77-3）純度大于或等于99%。4.8色譜柱1：C18柱，柱長(zhǎng)250mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5μm，或相當(dāng)者。4.9色譜柱2：氰基（CN）柱，柱長(zhǎng)250mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5μm，或相當(dāng)者。4.1010mmol/L辛烷磺酸鈉-5mmol/L磷酸氫二鉀溶液：稱取1.08g辛烷磺酸鈉（4.60.57g磷酸氫二鉀（4.5）加水溶解并定容至500mL，用磷酸（4.4）溶液調(diào)節(jié)pH至3.5。4.115mmol/L磷酸氫二鉀溶液：稱取0.57g磷酸氫二鉀（4.5）加水溶解并定容至500mL。DBS13/009—201724.12標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取適量偶氮甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品（4.7），用5mmol/L磷酸氫二鉀溶液（4.11）或水溶解并配制成含偶氮甲酰胺100mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，現(xiàn)用現(xiàn)配。注：使用色譜柱1用5mmol/L磷酸氫二鉀溶液（4.11）溶解，使用色譜柱2用水4.13基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確移取一定體積的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（4.12），用空白樣品處理液稀釋成濃度適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配。4.14微孔濾膜：0.45μm，水系。5儀器和設(shè)備5.1高效液相色譜儀：配有紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器。5.2高速離心機(jī)。5.3超聲波振蕩器。5.4旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。%.1渦旋混合器。5.5離心管。5.6分析天平：感量分別為0.01g和0.1mg。6分析步驟6.1樣品制備試驗(yàn)前應(yīng)將獲取的樣品充分混勻，樣品制備方法按GB/T5009.1執(zhí)行。6.2樣品處理稱取小麥粉樣品2g（精確至0.01g）于50mL具塞離心管中，加入15mL丙酮（4.2）超聲振蕩提取15min，在7000r/min下離心5min，將上清液轉(zhuǎn)移至50mL濃縮瓶中，再用10mL丙酮重復(fù)提取一次，合并提取液于濃縮瓶中，于常溫下減壓濃縮至干。殘?jiān)?mL5mmol/L磷酸氫二鉀溶液（4.11）或水超聲渦旋5min復(fù)溶。再加入3mL正己烷（4.3）脫脂，靜置分層后，取下層溶液過0.45μm水系微孔濾膜（4.14濾液供高效液相色譜儀分析。6.3高效液相色譜參考條件色譜條件可以參照以下用于任何一種色譜柱的測(cè)定。6.2.1用于色譜柱1測(cè)定的條件a)色譜柱：C18柱，柱長(zhǎng)250mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5μm，或相當(dāng)者；b)流動(dòng)相：10mmol/L辛烷磺酸鈉-5mmol/L磷酸氫二鉀溶液（A4.10）-乙腈（B80+20，v+v；c)流速：0.5mL/min；DBS13/009—20173d)檢測(cè)波長(zhǎng)：245nm；e)進(jìn)樣量：20μL；f)柱溫：30℃。6.2.2用于色譜柱2測(cè)定的條件a)色譜柱：CN柱，柱長(zhǎng)250mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5μm，或相當(dāng)者；b)流動(dòng)相：水（A）-乙腈（B80+20，v+v；c)流速：0.8mL/min；d)檢測(cè)波長(zhǎng)：245nm；e)進(jìn)樣量：20μL；f)柱溫：30℃。6.4空白試驗(yàn)除不加樣品外，均按上述測(cè)定步驟進(jìn)行。6.5測(cè)定在儀器最佳狀態(tài)下測(cè)定基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣品溶液，保證所測(cè)樣品中待測(cè)物的響應(yīng)值均在線性范圍內(nèi)，如果超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍，應(yīng)用5mmol/L磷酸氫二鉀溶液（4.11）或水對(duì)樣品溶液進(jìn)行適當(dāng)稀釋。以待測(cè)物的峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量?；|(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣品溶液的測(cè)定應(yīng)在4h內(nèi)完成。7結(jié)果計(jì)算樣品中偶氮甲酰胺的含量按式（1）計(jì)算，計(jì)算結(jié)果需扣除空白值：X…………….(1)式中：X–樣品中被測(cè)物含量，單位為毫克每千克（mg/kgC–由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的樣品溶液中被測(cè)物的濃度，單位為毫克每升（mg/LV–樣品溶液定容體積，單位為毫升（mL計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。8檢出限和定量限小麥粉中偶氮甲酰胺的檢出限為1.5mg/kg，定量限為5mg/kg。4附錄A(資料性附錄)0