3.1重組DNA技術(shù)的基本工具課件-高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修3

第3章第1節(jié)重組DNA技術(shù)的基本工具一/限制性?xún)?nèi)切核酸酶—“分子手術(shù)刀”1/DNA連接酶—“分子縫合針”2/基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體—“分子運(yùn)輸車(chē)”3/DNA粗提取和鑒定探究.實(shí)踐實(shí)現(xiàn)這一精確的操作過(guò)程至少需要三種“分子工具”，即準(zhǔn)確切割DNA分子的“分子手術(shù)刀”、將DNA片段再連接起來(lái)的“分子縫合針”和將體外重組好的DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞的“分子運(yùn)輸車(chē)”。舊知重拾1.DNA的結(jié)構(gòu)脫氧核苷酸脫氧核苷酸舊知重拾1.DNA的結(jié)構(gòu)1′2′4′5′3′磷酸基團(tuán)脫氧核糖含氮堿基舊知重拾1.DNA的結(jié)構(gòu)DNA平面結(jié)構(gòu)圖DNA立體結(jié)構(gòu)圖TCGATGGTCTCAGCTACCAGAG舊知重拾1.DNA的結(jié)構(gòu)DNA平面結(jié)構(gòu)圖①DNA的骨架：脫氧核糖和磷酸交替排列在外側(cè)②內(nèi)側(cè)：堿基配對(duì)，通過(guò)氫鍵連接③配對(duì)方式：AT、GC，A和T兩個(gè)氫鍵，G和C三個(gè)氫鍵④G、C比例越大，DNA相對(duì)越穩(wěn)定舊知重拾2.關(guān)于基因TCGATGGTCTCAGCTACCAGAGTCGATGGTCTCAGCTACCAGAG.............概念：基因通常是有遺傳效應(yīng)的DNA片段BY3’5’5’3’舊知重拾2.關(guān)于基因概念：基因通常是有遺傳效應(yīng)的DNA片段生物以DNA為遺傳物質(zhì)（RNA病毒除外）.DNA的基本組成單位相同（都是四種脫氧核苷酸）.都遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則.不同生物的DNA都具有相同的雙螺旋結(jié)構(gòu).以堿基排列順序儲(chǔ)存遺傳信息為不同來(lái)源的DNA片段拼接提供了理論依據(jù)舊知重拾3.關(guān)于基因和蛋白質(zhì)的關(guān)系舊知重拾3.關(guān)于基因和蛋白質(zhì)的關(guān)系生物都遵循中心法則：DNA能夠自我復(fù)制，復(fù)制方式相同為外源DNA在細(xì)胞中穩(wěn)定存在提供了理論依據(jù)舊知重拾3.關(guān)于基因和蛋白質(zhì)的關(guān)系生物都遵循中心法則：幾乎一切生物共用一套遺傳密碼（密碼子相同）為外源基因的表達(dá)提供了理論依據(jù)舊知重拾3.關(guān)于基因和蛋白質(zhì)的關(guān)系生物通過(guò)蛋白質(zhì)控制性狀：.

基因控制蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)直接控制生物體的性狀.

基因控制酶的合成來(lái)控制代謝過(guò)程進(jìn)而控制生物體的性狀一限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“任務(wù)一：閱讀教材P71關(guān)于限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“，回答下列問(wèn)題。1.切割DNA分子的工具是什么？2.”分子手術(shù)刀“從什么生物中分離純化出來(lái)的？3.限制性?xún)?nèi)切核酸酶識(shí)別的對(duì)象是什么？切割的化學(xué)鍵是什么？4.切割后產(chǎn)生的末端有哪些類(lèi)型？5.請(qǐng)根據(jù)限制性?xún)?nèi)切核酸酶名字猜測(cè)它可以從DNA的兩端切割DNA嗎？一1.切割DNA分子的工具是什么2.”分子手術(shù)刀“從什么生物中分離純化出來(lái)的？限制性?xún)?nèi)切核酸酶（限制酶）主要是從原核生物（細(xì)菌等）中分離純化出來(lái)的任務(wù)一：閱讀教材P71關(guān)于限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“，回答下列問(wèn)題。它能破壞外源DNA，如侵染細(xì)菌的噬菌體DNA，“限制”病毒在細(xì)菌內(nèi)的寄生，而細(xì)菌自身DNA經(jīng)過(guò)相應(yīng)的化學(xué)修飾則不會(huì)被限制酶破壞。限制酶的保護(hù)作用是細(xì)菌等進(jìn)化出的一種防御機(jī)制限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“一3.限制性?xún)?nèi)切核酸酶識(shí)別的對(duì)象是什么？切割的化學(xué)鍵是什么？能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的特定核苷酸序列并且使每一條鏈中特定部位的磷酸二酯鍵斷開(kāi)任務(wù)一：閱讀教材P71關(guān)于限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“，回答下列問(wèn)題。例如，EcoRⅠ限制酶的識(shí)別序列為從5’→3’方向的識(shí)別序列均為GAATTC，并切斷G和A之間的磷酸二酯鍵5’3’5’3’中軸線限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“一5’3’5’3’從5’→3’方向的識(shí)別序列均為GAATTC，并切斷G和A之間的磷酸二酯鍵3’5’5’3’黏性末端黏性末端當(dāng)限制酶在它識(shí)別序列的中心軸線兩側(cè)將DNA分子的兩條鏈分別切開(kāi)時(shí)，產(chǎn)生的是黏性末端；注意：限制酶切割磷酸二酯鍵后氫鍵會(huì)自動(dòng)斷裂！例如，EcoRⅠ限制酶的識(shí)別序列為任務(wù)一：閱讀教材P71關(guān)于限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“，回答下列問(wèn)題。限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“一4.切割后產(chǎn)生的末端有哪些類(lèi)型？黏性末端任務(wù)一：閱讀教材P71關(guān)于限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“，回答下列問(wèn)題。例如，SmaⅠ限制酶的識(shí)別序列為從5’→3’方向的識(shí)別序列均為CCCGGG，并切斷C和G之間的磷酸二酯鍵5’3’5’3’中軸線限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“一4.切割后產(chǎn)生的末端有哪些類(lèi)型？黏性末端任務(wù)一：閱讀教材P71關(guān)于限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“，回答下列問(wèn)題。例如，SmaⅠ限制酶的識(shí)別序列為從5’→3’方向的識(shí)別序列均為CCCGGG，并切斷C和G之間的磷酸二酯鍵5’3’5’3’平末端當(dāng)限制酶在它識(shí)別序列的中心軸線處切開(kāi)時(shí)，產(chǎn)生的是平末端。3’5’5’3’平末端限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“一任務(wù)一：閱讀教材P71關(guān)于限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“，回答下列問(wèn)題。大多數(shù)限制酶的識(shí)別序列由6個(gè)核苷酸組成。例如，EcoRⅠ、SmaⅠ限制酶的識(shí)別序列均為6個(gè)核苷酸，也有少數(shù)限制酶的識(shí)別序列由4個(gè)、8個(gè)或其他數(shù)量的核苷酸組成。限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“一限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“一限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“①每一限制酶都有各自特異性的識(shí)別序列限制性?xún)?nèi)切核酸酶（限制酶）特點(diǎn)Ⅰ.大多數(shù)限制酶識(shí)別序列6個(gè)核苷酸，也有少數(shù)限制酶的識(shí)別序列由4個(gè)、8個(gè)或其他數(shù)量的核苷酸組成為什么？限制酶的識(shí)別序列越短，酶切位點(diǎn)在基因組中的分布頻率就越高若基因組DNA的堿基序列是完全隨機(jī)排列的，4個(gè)堿基的識(shí)別序列，平均44即256個(gè)堿基就會(huì)出現(xiàn)一次一限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“一限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“①每一限制酶都有各自特異性的識(shí)別序列限制性?xún)?nèi)切核酸酶（限制酶）特點(diǎn)Ⅱ.回文結(jié)構(gòu)/回文序列回文序列特點(diǎn)：以中線為縱軸，一側(cè)核苷酸序列以橫線為軸旋轉(zhuǎn)180°后，縱軸兩側(cè)的序列成左右對(duì)稱(chēng)，稱(chēng)為旋轉(zhuǎn)對(duì)稱(chēng)。一限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“①每一限制酶都有各自特異性的識(shí)別序列限制性?xún)?nèi)切核酸酶（限制酶）特點(diǎn)Ⅱ.回文結(jié)構(gòu)/回文序列識(shí)別序列的一條鏈從左往右的堿基序列和另一條鏈從右往左的堿基序列相同即兩條鏈從5‘--3’的堿基序列相同一限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“問(wèn)題2：嘗試寫(xiě)出EcoRⅠ、BamHⅠ、SmaⅠ、AluⅠ限制酶酶切后的結(jié)果一限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“EcoRⅠ3’-CTTAA5’-GAATTC-3’G-5’讀法:5’向3’黏性末端BamHⅠ3’-CCTAG5’-GGATCC-3’G-5’黏性末端SmaⅠ3’-GGG5’-CCCGGG-3’CCC-5’平末端AluⅠ3’-TCGG5’-AGCT-3’-5’黏性末端一限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“ATGCATATGCGCGCATTATA5’3’3’5’ATGCATATGCGCGCATTATA5’3’3’5’AAAGCGCTTTA3’5’5’3’AATTGCAATA5’3’GC3’5’AGCCTTTA3’GC5’5’3’AEcoRⅠEcoRⅠATGCTTGCA5’3’3’5’A一限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“酶切后獲得的黏性末端不但互補(bǔ)而且相同，因此用相同的限制酶處理得到的黏性末端之間可以通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)關(guān)系相互“識(shí)別”ATGCATATGCGCGCATTATA5’3’3’5’3’5’5’3’ATATGCGCCATATTATA5’3’3’GCGC5’3’5’5’3’ATTGCAATA5’3’GCAGCGCTTTA3’5’A一限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“問(wèn)題3：比較BamHⅠ、BgIⅡ限制酶酶切后的結(jié)果，進(jìn)行比較。3’-CCTAG5’-GGATCC-3’G-5’3’-TCTAG5’-AGATCT-3’A-5’一限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“問(wèn)題4：BamHⅠ、BgIⅡ等幾種限制酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)均不同，但能切出相同的DNA黏性末端（序列5’-GATC-3’）3’-CCTAG5’-GGATCC-3’G-5’3’-TCTAG5’-AGATCT-3’A-5’這樣切割產(chǎn)生的黏性末端是否可以通過(guò)酶相連？黏性末端相連后，原來(lái)的限制酶是否還能對(duì)其識(shí)別并切割？3’-CCTAG5’-GGATCT-3’A-5’可以相連，有相同的黏性末端，堿基可以互補(bǔ)配對(duì)不同酶切割的DNA產(chǎn)生的相同黏性末端連接后形成的新位點(diǎn)即所謂雜交位點(diǎn)，一般不能被原來(lái)的限制酶各自識(shí)別一限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“拓展①同尾酶：不同限制酶識(shí)別不同序列，產(chǎn)生相同的黏性末端3’-CTAG5’-GATC-3’-5’3’-CCTAG5’-GGATCC-3’G-5’3’-CTAG5’-GATCC-3’G-5’Sau3AⅠBamHⅠ識(shí)別X一限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“拓展②同裂酶：不同限制酶識(shí)別相同序列，產(chǎn)生相同的黏性末端不同限制酶識(shí)別相同序列，不同位點(diǎn)切割，產(chǎn)生不同的黏性末端一限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“拓展同裂酶其實(shí)是一種酶，但是由于限制酶是根據(jù)來(lái)源命名的，如BamHⅠ和BstⅠ的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)都是GGATCC一限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“AATTC------G-----------G-----CTTAA目的基因-----G-----CTTAAAATTC------G------4個(gè)黏性末端一限制性?xún)?nèi)切核酸酶-”分子手術(shù)刀“1個(gè)片段2個(gè)片段二DNA連接酶-“分子縫合針”任務(wù)二：閱讀教材P72關(guān)于DNA連接酶-“分子縫合針”，回答下列問(wèn)題。1.DNA連接酶的作用什么？2.DNA連接酶連接形成什么化學(xué)鍵？3.E.coliDNA連接片段具有什么特點(diǎn)？4.T4DNA連接酶連接的片段具有什么特點(diǎn)？5.黏性末端和平末端的連接效率哪個(gè)高？原因是什么？1.DNA連接酶的作用什么？連接的對(duì)象具有什么特點(diǎn)？2.DNA連接酶連接形成什么化學(xué)鍵？3.E.coliDNA連接片段具有什么特點(diǎn)？連接兩個(gè)DNA片段磷酸二酯鍵互補(bǔ)的黏性末端、平末端任務(wù)二：閱讀教材P72關(guān)于DNA連接酶-“分子縫合針”，回答下列問(wèn)題。二DNA連接酶-“分子縫合針”兩個(gè)片段之間堿基能夠互補(bǔ)配對(duì)5.黏性末端和平末端的連接效率哪個(gè)高？原因是什么？黏性末端效率較高，4.T4DNA連接酶連接的片段具有什么特點(diǎn)？互補(bǔ)的黏性末端、平末端平末端沒(méi)有氫鍵的連接和維持。思考：與核酸相關(guān)酶，你知道哪些？二DNA連接酶-“分子縫合針”任務(wù)二：閱讀教材P72關(guān)于DNA連接酶-“分子縫合針”，回答下列問(wèn)題。小結(jié)：與核酸相關(guān)酶DNA（水解）酶限制性?xún)?nèi)切核酸酶二DNA連接酶-“分子縫合針”使DNA水解成基本單位--脫氧核苷酸對(duì)特定序列的特定位點(diǎn)進(jìn)行切割，可得到DNA片段，是基因工程的重要工具酶DNA聚合酶在DNA復(fù)制時(shí)利用母鏈為模板，將脫氧核苷酸連接成單鏈DNA連接酶連接被限制酶切割形成的黏性末端或平末端，是基因工程的重要工具酶解旋酶DNA復(fù)制時(shí)將DNA解旋，需要消耗能量自然形成遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則二DNA連接酶-“分子縫合針”小結(jié)：與核酸相關(guān)酶二DNA連接酶-“分子縫合針”都是催化兩個(gè)核苷酸之間形成磷酸二酯鍵不需要需要雙鏈單鏈兩個(gè)DNA片段單個(gè)核苷酸加到已存在的核苷酸片段基因表達(dá)載體構(gòu)建DNA復(fù)制（擴(kuò)增）三基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體-“分子運(yùn)輸車(chē)”任務(wù)三：閱讀教材P72關(guān)于基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體-“分子運(yùn)輸車(chē)”，回答下列問(wèn)題。1.“分子運(yùn)輸車(chē)”通常利用的是什么？2.質(zhì)粒的本質(zhì)什么？質(zhì)粒存在在哪里？3.質(zhì)粒有什么特點(diǎn)？4.作為“分子運(yùn)輸車(chē)”需要什么條件？三三基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體-“分子運(yùn)輸車(chē)”任務(wù)三：閱讀教材P72關(guān)于基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體-“分子運(yùn)輸車(chē)”，回答下列問(wèn)題。1.“分子運(yùn)輸車(chē)”常利用的是什么？質(zhì)粒2.質(zhì)粒的本質(zhì)什么？質(zhì)粒存在在哪里？補(bǔ)充：噬菌體、動(dòng)植物病毒（滅活后使用）環(huán)狀的DNA分子真核細(xì)胞核或原核細(xì)胞擬核之外3.質(zhì)粒有什么特點(diǎn)？雙鏈、一個(gè)至多個(gè)酶切位點(diǎn)、自我復(fù)制4.作為“分子運(yùn)輸車(chē)”需要什么條件？三三基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體-“分子運(yùn)輸車(chē)”任務(wù)三：閱讀教材P72關(guān)于基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體-“分子運(yùn)輸車(chē)”，回答下列問(wèn)題。4.作為“分子運(yùn)輸車(chē)”需要什么條件？Ⅰ、能夠在受體細(xì)胞中自我復(fù)制或整合到受體DNA上目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定地存在（復(fù)制）復(fù)制的原點(diǎn)：質(zhì)粒含有控制環(huán)狀質(zhì)粒在細(xì)菌細(xì)胞中復(fù)制的基因，稱(chēng)為復(fù)制原點(diǎn)（Ori）三三基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體-“分子運(yùn)輸車(chē)”任務(wù)三：閱讀教材P72關(guān)于基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體-“分子運(yùn)輸車(chē)”，回答下列問(wèn)題。4.作為“分子運(yùn)輸車(chē)”需要什么條件？Ⅱ、具有多個(gè)酶切位點(diǎn)，以便與外源基因連接目的：多個(gè)酶切位點(diǎn)以便連接外源基因三三基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體-“分子運(yùn)輸車(chē)”任務(wù)三：閱讀教材P72關(guān)于基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體-“分子運(yùn)輸車(chē)”，回答下列問(wèn)題。4.作為“分子運(yùn)輸車(chē)”需要什么條件？Ⅲ、具有特殊的標(biāo)記基因目的：便于重組DNA的篩選標(biāo)記基因通常有①抗生素的抗性基因如：抗氨芐青霉素基因（ampr）、抗四環(huán)素基因（tetr)②熒光蛋白基因如：綠色熒光蛋白基因（GFP）、紅色熒光蛋白基因（RFP）三基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體-“分子運(yùn)輸車(chē)”任務(wù)三：閱讀教材P72關(guān)于基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體-“分子運(yùn)輸車(chē)”，回答下列問(wèn)題。4.作為“分子運(yùn)輸車(chē)”需要什么條件？Ⅲ、具有特殊的標(biāo)記基因目的：便于重組DNA的篩選③生化標(biāo)記基因如：lacZ(β半乳糖苷酶基因）④營(yíng)養(yǎng)缺陷型基因如：合成某些氨基酸標(biāo)記基因通常有①抗生素的抗性基因②熒光蛋白基因三基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體-“分子運(yùn)輸車(chē)”含目的基因的DNA片段導(dǎo)入三基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體-“分子運(yùn)輸車(chē)”載體攜帶目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的成功率不高，因此需要篩選出導(dǎo)入目的基因的受體細(xì)胞存活并增殖死亡在含有抗生素的培養(yǎng)基上，能夠生存的是被導(dǎo)入了載體的受體細(xì)胞三基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體-“分子運(yùn)輸車(chē)”任務(wù)三：閱讀教材P72關(guān)于基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體-“分子運(yùn)輸車(chē)”，回答下列問(wèn)題。在進(jìn)行基因工程操作中，真正被用作載體的質(zhì)粒，都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進(jìn)行人工改造的。例如：酶切位點(diǎn)、抗性基因、復(fù)制原點(diǎn)等。三基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體-“分子運(yùn)輸車(chē)”三基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體-“分子運(yùn)輸車(chē)”膠帶膠帶三基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體-“分子運(yùn)輸車(chē)”討論：?jiǎn)栴}1：剪刀和膠條分別代表哪種“分子工具”？剪刀代表限制酶；膠帶代表DNA連接酶。問(wèn)題2：插入DNA片段能稱(chēng)得上一個(gè)基因嗎？不能，因?yàn)榛虻拈L(zhǎng)度一般在100個(gè)堿基以上三三拓展：目的基因與運(yùn)載體連接的酶切問(wèn)題分析思考：目的基因是要與運(yùn)載體結(jié)合的，那如何處理質(zhì)粒？用相同的限制酶切割目的基因與運(yùn)載體。產(chǎn)生相同的末端，便于連接。EcoRⅠ酶切后EcoRⅠ酶切后拓展：目的基因與運(yùn)載體連接的酶切問(wèn)題分析重組質(zhì)粒的形成：（1）單酶切割法：思考：將被同一種限制酶切的質(zhì)粒和目的基因片段混合，加入DNA連接酶，兩兩連接的產(chǎn)物有幾種？EcoRⅠ酶切后EcoRⅠ酶切后×拓展：目的基因與運(yùn)載體連接的酶切問(wèn)題分析重組質(zhì)粒的形成：（1）單酶切割法：?jiǎn)我幌嗤ば阅┒舜嬖谝韵聠?wèn)題:目的基因雙向插入載體（即正向或反向）容易出現(xiàn)目的基因的自身環(huán)化和載體的自身環(huán)化拓展：目的基因與運(yùn)載體連接的酶切問(wèn)題分析重組質(zhì)粒的形成：（2）雙酶切割法：使用兩種不同的限制酶切同一種DNA分子切割產(chǎn)生的DNA片段的兩個(gè)末端是不同優(yōu)點(diǎn)：定向插入目的基因練習(xí)獲取目的基因和切割載體時(shí)，通常使用同種限制酶，目的是為了

。但是使用該方法的缺點(diǎn)是容易發(fā)生

以及

，為了避免上述情況發(fā)生，可采取的措施是

。產(chǎn)生相同的黏性末端，便于連接目的基因、質(zhì)粒的自身環(huán)化目的基因與質(zhì)粒的反向連接分別使用兩種限制酶取切割目的基因和運(yùn)載體練習(xí)練習(xí)練習(xí)氨芐青霉素抗性基因四環(huán)素抗性基因能夠切下目的基因不破壞目的基因至少保留一個(gè)完整的標(biāo)記基因，便于篩選DNA粗提取和鑒定任務(wù)四：閱讀教材P74-75關(guān)于DNA粗提取與鑒定”，回答下列問(wèn)題。1.DNA和蛋白質(zhì)如何分開(kāi)？2.DNA如何鑒定？3.你能歸納DNA提取的步驟嗎？4.研磨后取上清液還是沉淀？5.上清液加入預(yù)冷95%酒精的目的是？DNA粗提取和鑒定任務(wù)四：閱讀教材P74-75關(guān)于DNA粗提取與鑒定”，回答下列問(wèn)題。1.DNA和蛋白質(zhì)如何分開(kāi)？2.DNA如何鑒定？3.你能歸納DNA提取的步驟嗎？DNA、RNA、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等的物理性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)不同DNA不溶于酒精，某些蛋白質(zhì)溶于酒精，初步分離DNA和蛋白質(zhì)DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，能溶于2mol/l的NaCl溶液中DNA+二苯胺試劑藍(lán)色沸水浴取材過(guò)濾分離鑒定DNA粗提取和鑒定不同生物的組織中DNA含量不同。在選取材料時(shí)，應(yīng)本著DNA含量高、材料易得、便于提取的原則。新鮮洋蔥（也可以選擇香蕉、菠菜、菜花或豬肝等作為實(shí)驗(yàn)材料，提取DNA的方法可能稍有不同）用洋蔥做材料，為什么要充分研磨？充分研磨，可以破壞細(xì)胞壁，裂解細(xì)胞，釋放DNA。豬血和雞血，哪個(gè)適合用作提取DNA的材料？操作時(shí)如何防止血液凝固？豬血（哺乳動(dòng)物的成熟紅細(xì)胞）無(wú)細(xì)胞核，不適合；雞血中紅細(xì)胞有核DNA，且核DNA的量較多，適合。雞血中加入檸檬酸鈉，可防止血液凝固。P117DNA粗提取和鑒定SDS（十二烷基疏酸鈉）可使蛋白質(zhì)變性與DNA分離EDTA（乙二胺四乙酸）DNA酶抑制劑，可防止細(xì)胞破碎后DNA降解DNATris（三羥甲基氨基甲烷）提供緩沖體系，使DNA在緩沖體系中呈穩(wěn)定狀態(tài)研磨液DNA粗提取和鑒定任務(wù)四：閱讀教材P74-75關(guān)于DNA粗提取與鑒定”，回答下列問(wèn)題。注意：（1）研磨時(shí)間不宜太長(zhǎng)防止研磨時(shí)產(chǎn)生的熱量影響DNA的提取量（2）上清液中除DNA之外，可能含有哪些雜質(zhì)？可能含有核蛋白、多糖等雜質(zhì)4.研磨后取上清液還是沉淀？上清液(1)研磨的目的破碎細(xì)胞，使核物質(zhì)容易溶解在研磨液中(2)研磨時(shí)間不宜太長(zhǎng)防止研磨時(shí)產(chǎn)生的熱量影響DNA的提取量(3)有條件的可以在材料處理的過(guò)程中加入纖維素酶、果膠酶研磨效果好（有利于充分研磨）(4)研磨不宜太用力（3)低溫放置幾分鐘的作用可抑制核酸水解酶的活性，進(jìn)而抑制DNA降解；抑制DNA分子運(yùn)動(dòng)，使DNA易形成沉淀析出；低溫有利于增加DNA的柔韌性，減少其斷裂；任務(wù)四：閱讀教材P74-75關(guān)于DNA粗提取與鑒定”，回答下列問(wèn)題。5.上清液加入預(yù)冷