DB62T 2692-2021 羊傳染性胸膜肺炎防治技術(shù)規(guī)范

DB62/T2692—2021羊傳染性胸膜肺炎防治技術(shù)規(guī)范2021-09-04實(shí)施2021-09-04實(shí)施I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件代替DB62/T2692—2016《羊傳染性胸膜肺炎防治技術(shù)規(guī)范》,與DB62/T2692—2016相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動(dòng)外，主要技術(shù)變化如下：a)更改了規(guī)范性引用文件；b)更改了術(shù)語和定義；c)更新了病料采集、染色鏡檢、病原分離、間接血凝試驗(yàn)方法；d)增加了生化試驗(yàn)、間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、核酸檢測(cè)、結(jié)果判定、免疫接種、藥物預(yù)防、附錄e)刪除動(dòng)物回歸試驗(yàn)、附錄A。本文件由甘肅省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并監(jiān)督實(shí)施。本文件由甘肅省畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本文件起草單位：甘肅省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、甘肅農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院、甘肅省農(nóng)民教育培訓(xùn)工作總站、慶城縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、永登縣紅城鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村綜合服務(wù)中心、慶城縣驛馬鎮(zhèn)獸醫(yī)站。本文件主要起草人：車小蛟、鄭紅飛、張小寧、張慧君、郭賭、全妮、張嬌、趙鵬。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：——2016年首次發(fā)布為DB62/T2692—2016;——本次為第一次修訂。本文件由甘肅省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心解釋。各單位或個(gè)人在執(zhí)行本文件過程中如發(fā)現(xiàn)需要修改和補(bǔ)充之處，請(qǐng)隨時(shí)將意見和建議反饋至《羊傳染性胸膜肺炎防治技術(shù)規(guī)范》地方標(biāo)準(zhǔn)編制組(地址：甘肅省蘭州市城關(guān)區(qū)紅柳灘路41號(hào)，郵編：730046,聯(lián)系人：車小蛟，E-mail:279005698@,聯(lián)系方式,以供今后修訂時(shí)參考。僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T39915動(dòng)物飼養(yǎng)場(chǎng)防疫準(zhǔn)則NY/T1167畜禽場(chǎng)環(huán)境質(zhì)量及衛(wèi)生控制規(guī)范NY/T1168畜禽糞便無害化處理技術(shù)規(guī)范NY5027無公害食品畜禽飲用水水質(zhì)NY/T5030無公害農(nóng)產(chǎn)品獸藥使用準(zhǔn)則NY5032無公害食品畜禽飼料和飼料添加劑使用準(zhǔn)則NY5149無公害食品肉羊飼養(yǎng)獸醫(yī)防疫準(zhǔn)則NY/T5151無公害食品肉羊飼養(yǎng)管理準(zhǔn)則3術(shù)語和定義4.1流行病學(xué)工2種只感染山羊，3歲以下的山羊最易感染；而綿羊肺炎支原體可感染山羊和綿羊。易感羊群發(fā)病率可達(dá)80%～100%,病死率可達(dá)40%左右。發(fā)病急，體溫高達(dá)41℃~42℃,精神沉郁，食欲廢絕；數(shù)小時(shí)后出現(xiàn)肺炎癥狀，呼吸困難，咳嗽，12h～24h,有的突然倒地死亡；病死羊鼻孔中流34.4.4生化試驗(yàn)按照NY/T1468-2007的2.4.2內(nèi)容操作，培養(yǎng)基制作按附錄A規(guī)定的方法操作。4.5血清學(xué)試驗(yàn)4.5.1間接血凝試驗(yàn)具體操作方法按照NY/T1468-2007的3.1內(nèi)容操作。4.5.3生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)按附錄B規(guī)定的方法操作。4.5.4代謝抑制試驗(yàn)4.5.5直接免疫熒光抗體試驗(yàn)按附錄D4.5.3生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)按附錄B規(guī)定的方法操作。4.5.4代謝抑制試驗(yàn)4.5.5直接免疫熒光抗體試驗(yàn)按附錄D規(guī)定的方法操作。4.6核酸檢測(cè)4.6.1樣品DNA的提取O4.6.2PCR試驗(yàn)按附錄E規(guī)定的方法操作。4.7結(jié)果判定4.7.1符合4.1、4.2和4.3的，判定為疑似羊傳染性胸膜肺炎。4.7.2符合4.1、4.24.3的，同時(shí)符合4.4.2或4.5.1或4.5.2或4.5.3或4.5.4或4.5.5或4.6.2的，確診為羊傳染性胸膜肺炎。5.1加強(qiáng)飼養(yǎng)管理增強(qiáng)羊群的抵抗力。飲水要求按照NY5027的規(guī)定執(zhí)行；飼料應(yīng)符合NY5032的要求，根據(jù)羊的生長(zhǎng)階段配制飼料，供給富含蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、維生素的飼料；飼養(yǎng)管理按照GB/T39915和NY/T5151的規(guī)定執(zhí)行；環(huán)境控制應(yīng)符合NY/T388、NY/T1167的規(guī)定。5.2嚴(yán)格羊群檢疫4建立基礎(chǔ)母羊群，堅(jiān)持自繁自養(yǎng)，羊群密度要適。加強(qiáng)檢疫工作，防止引入或遷入5.3.1每年9月份，對(duì)健康羊群進(jìn)行預(yù)防接種。5.3.2山羊傳染性胸膜肺炎滅活疫苗，預(yù)防由Mmc引起的傳染性胸膜肺炎，成年山羊每只5mL,6月齡以下羔羊每只3mL,頸背側(cè)皮下或肌內(nèi)注射，免疫期12個(gè)月。5.3.3綿羊肺炎支原體滅活疫苗，預(yù)防綿羊、山羊由Movi引起的傳染性胸膜肺炎，成年綿羊或山羊每只3mL,6月齡以下羔羊每只2mL,頸側(cè)皮下或肌內(nèi)注射，免疫期12個(gè)月。5.3.4山羊支原體肺炎滅活疫苗，可同時(shí)預(yù)羊頸部皮下注射3mL,免疫期10個(gè)月。5.3.5對(duì)身體瘦弱、體溫升高或有慢性疾病的羊不宜注射；對(duì)產(chǎn)后母羊、羔羊和從異地引進(jìn)的羊應(yīng)及時(shí)補(bǔ)免。在冬春時(shí)節(jié)、氣候驟變時(shí)，可選用中草藥進(jìn)行預(yù)防，按附錄F規(guī)定的方法操作?；蚨ㄆ诩?nèi)注射廣譜抗菌素如恩諾沙星、壯觀霉素等，使用方法按照藥品發(fā)現(xiàn)疫情及時(shí)上報(bào)，對(duì)發(fā)病羊群按NY5149的規(guī)定進(jìn)行隔離、封鎖，并做好消毒工作。對(duì)病死羊、5(規(guī)范性)培養(yǎng)基A.1改良Hartley氏消化湯培養(yǎng)基(液體培養(yǎng)基)胰蛋白胨8g,滅菌Hartley氏消化湯600mL,滅菌0.5%水解乳蛋白Hank,s液1000mL,0.4%酚紅20mL,混勻，加青霉素至200IU/mL,用3.5%NaHCO3調(diào)節(jié)pH至7.6,用單板式濾器過濾除菌后，加入無菌滅能的豬血清400mL,分裝于10mL玻璃瓶中，放入37℃普通溫箱做雜菌檢驗(yàn)，待無菌生長(zhǎng)便可使用。A.2改良Hartley氏瓊脂培養(yǎng)基(固體培養(yǎng)基)改良Hartley氏消化湯培養(yǎng)基中加入瓊脂，使其含量達(dá)1.3%～1.5%,經(jīng)121kPa高壓滅菌30min即成。A.3選擇性培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)基內(nèi)加80:1的1%醋酸鉈和青霉素200IU/mL;制作平板時(shí)加1%瓊脂。OT6(規(guī)范性)生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)B.1.1液體培養(yǎng)基：配制方法件附錄A.1;B.1.2不同支原體陽性血清：絲狀支原體絲狀亞種、絲狀支原體山羊亞種、山羊支原體山羊肺炎亞種、綿羊肺炎支原體和精氨酸支原體；B.1.3濾紙。B.2操作步驟將鑒定菌株24h培養(yǎng)液搖勻，取0.25mL滴于平板上，用L型玻棒將其均勻涂抹于培養(yǎng)平板表面后，用分別浸取了4倍稀釋的不同支原體陽性血清、直徑7mm的定性濾紙片分別貼附于平板表面，每塊平板貼3片～4片，37℃培養(yǎng)24h～48h。觀察并記錄抑菌圈大小。每株待檢菌株作3次，求平均值。B.3結(jié)果判定抑菌圈直徑2mm或以上者判為陽性。7(規(guī)范性)C.1.1選擇性培養(yǎng)基：配制方法見附錄A.3;入陽性血清1mL,充分混勻后取1mL移入第2管，照此類推至第8管。再向每管中加入上述培養(yǎng)基1mL,123456789陽性血清稀釋倍數(shù)22一一陽性血清11111111111工8(規(guī)范性)D.1試劑D.1.2標(biāo)準(zhǔn)抗羊傳染性胸膜肺炎的D.2.1熒光顯微鏡。將稀釋至工作濃度的熒光抗體，滴加在待檢標(biāo)本面上，室溫恒濕染色30min,取PBS輕洗瓊脂表面9(規(guī)范性)E.1操作步驟對(duì)所有樣品同時(shí)用絲狀支原體簇通用引物和綿羊肺炎支原體特異引物進(jìn)行檢測(cè)，每次檢測(cè)均設(shè)相絲狀支原體簇通用引物用來檢測(cè)Mccp和Mmc,退火溫度為62℃,目的條帶為548bp。MmR5'-TTGAGATTAGCTCCCCTTCACAG-3'綿羊肺炎支原體特異引物用來檢測(cè)Movi,退火溫度為55℃,目的條帶為361bp。LmF5’-TGAACGGAATATGTTLmR5’-GACTTCATCCTGCACTCTGT-3'PCR產(chǎn)物4℃保存。E.2結(jié)果判定PCR產(chǎn)物經(jīng)1%的瓊脂糖凝膠電泳，在對(duì)照成立的前提下，被檢樣品出現(xiàn)548bp(或361bp)一條帶，判定為陽性。(規(guī)范性)中藥驗(yàn)方F.1中藥驗(yàn)方1黃芩150g、前胡150g、麥冬150g、白芍150g、黃柏150g、板藍(lán)根200g、紫菀150g、神曲250g、梔子150g、柴胡150g、杏仁150g、山楂250g、連翹150g、荊芥150g、化橘紅150g、麥芽250g、金銀花150g、