DB36-T1770-2023-茶樹菇液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程-江西省

ICS65.020.20B05DB36江西省地方標準DB36/T1770—2023茶樹菇液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程Technicalregulationofproductionofliquidspawnforcyclocybecylindracea江西省市場監(jiān)督管理局DB36/T1770—2023目次前言..............................................................................II1范圍..............................................................................12規(guī)范性引用文件....................................................................13術(shù)語和定義........................................................................14生產(chǎn)廠房和設(shè)備....................................................................15生產(chǎn)原料..........................................................................26母種擴繁..........................................................................27搖瓶液體菌種生產(chǎn)..................................................................28發(fā)酵罐液體菌種生產(chǎn)................................................................39液體菌種貯存......................................................................410記錄和存檔.......................................................................41IDB36/T1770—2023前言本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由江西省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。本文件起草單位：江西農(nóng)業(yè)大學、江西天和食用菌開發(fā)有限公司。本文件起草人：霍光華、朱宏杰、余福生、邱桂根、崔朝宇、霍達、陳緒濤。IIDB36/T1770—2023茶樹菇液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程1范圍本文件規(guī)定了茶樹菇(Cyclocybecylindracea)液體菌種生產(chǎn)的術(shù)語和定義、生產(chǎn)廠房和設(shè)備、生產(chǎn)原料、母種擴繁、搖瓶液體菌種生產(chǎn)、發(fā)酵罐液體菌種生產(chǎn)、液體菌種貯存、記錄和存檔等技術(shù)內(nèi)容。本文件適用于茶樹菇液體菌種的生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB150.2壓力容器第2部分：材料GB5749生活飲用水衛(wèi)生標準GB/T12728食用菌術(shù)語GB50073潔凈廠房設(shè)計規(guī)范NY/T2375食用菌生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范3術(shù)語和定義用于生產(chǎn)和銷售的菌絲體及其生長基質(zhì)組成的液體繁殖材料，包括搖瓶液體菌種、發(fā)酵罐液體菌種。液體菌種生產(chǎn)廠房設(shè)計應(yīng)符合GB50073的規(guī)定。液體菌種生產(chǎn)場址應(yīng)建在交通方便，水源和電源充足，無有害氣體、煙霧、灰沙，遠離垃圾場、畜禽場舍等有污染的地方，且道路路面硬化、排水良好。生產(chǎn)廠房布局應(yīng)滿足以下要求：b)液體菌種生產(chǎn)車間應(yīng)包括配料間、滅菌室、冷卻室、接種室、培養(yǎng)室、發(fā)酵室、化驗室、菌種室等，并配備相應(yīng)設(shè)施設(shè)備；1DB36/T1770—2023c)地面要求防水、防滑、防腐蝕、防滲漏、易清洗；d)墻壁和天花板應(yīng)能防水、防潮、防霉、易清洗；e)廠房安裝排水管道或者排風設(shè)備，配置封閉式廢物桶，有適當?shù)呐潘露龋?.0%~1.5%）和良好的排水系統(tǒng)，排水溝應(yīng)是圓弧似的明溝；f)廠房車間入口處應(yīng)設(shè)置洗手消毒和干手設(shè)施。4.3生產(chǎn)設(shè)備生產(chǎn)設(shè)備包括不限于以下內(nèi)容：a)液體菌種發(fā)酵罐、顯微鏡、磁力攪拌機、空氣壓縮機、高效空氣過濾器、液體菌種接種器、高壓蒸汽滅菌鍋、蒸汽鍋爐、凈化工作臺、恒溫搖床、恒溫培養(yǎng)箱、除濕機、玻璃三角瓶、玻璃平皿；b)液體菌種發(fā)酵罐、高壓蒸汽滅菌鍋和蒸汽鍋爐應(yīng)符合GB150.2的規(guī)定；c)高效空氣過濾器：對粒徑0.1μm~0.2μm粒子的補集效率在99.99%以上；d)玻璃三角瓶容積500ml、1000ml，兩者均耐121℃高溫滅菌。5生產(chǎn)原料培養(yǎng)基質(zhì)、化學投入品應(yīng)符合NY/T2375要求，生產(chǎn)用水應(yīng)符合GB5749要求且水不溶物物料需過140目篩。6母種擴繁母種選用茶樹菇試管種擴繁，即選取保存在試管斜面的茶樹菇菌塊轉(zhuǎn)接至PDA平板中央，26℃±1℃條件下培養(yǎng)，接近長滿平板時，從培養(yǎng)箱中取出作為搖瓶生產(chǎn)的菌種。馬鈴薯20%、葡萄糖2%、牛肉膏0.2%、蛋白胨0.1%、KH2PO40.1%、MgSO40.1%、余量為水，pH1)分裝：將配制好的200ml培養(yǎng)基加入500ml的玻璃三角瓶中，或400ml培養(yǎng)基加入1000ml的玻璃三角瓶中。2)滅菌：裝有培養(yǎng)基的三角瓶立即用封口膜（耐高溫組培封口膜）封口，后置于滅菌鍋中滅菌，滅菌條件：0.1Mpa、121℃滅菌25min。3)冷卻：滅菌后的培養(yǎng)基置于干凈冷卻室內(nèi)冷卻至室溫（≤28℃）。在超凈工作臺上使用直徑7mm的打孔器在平皿菌絲生長旺盛處打孔，后用無菌接種鏟接種于三角瓶培養(yǎng)基中，立即封口避免雜菌污染。2DB36/T1770—20237.4培養(yǎng)7.4.17.4.2培養(yǎng)：將接種后的三角瓶置于搖床上振蕩培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為160rpm，26±1℃下培養(yǎng)7d。培養(yǎng)期檢查：搖瓶培養(yǎng)期間應(yīng)定期檢查，及時剔除污染雜菌的三角瓶。8發(fā)酵罐液體菌種生產(chǎn)8.1前期準備8.1.1空氣過濾器檢查和滅菌8.1.1.1檢查：使用前應(yīng)檢查空氣過濾器濾芯，要求無油污、料污、無破損，外殼內(nèi)外壁要求無污物、光潔亮凈。8.1.1.2滅菌：檢查完后空氣過濾器應(yīng)高壓蒸汽滅菌，滅菌條件：0.20Mpa~0.30Mpa、溫度達125℃時，高壓蒸汽滅菌3h。8.1.2發(fā)酵罐檢查和滅菌8.1.2.1檢查：檢查罐上的所有閥門，安全閥、壓力表、要求完好，工作正常。8.1.2.2清洗：對罐體內(nèi)、外和所有閥門用流水進行沖洗，達到無死角、內(nèi)壁無任何培養(yǎng)料殘余物的潔凈程度。8.1.2.3空消：發(fā)酵罐初次使用、出現(xiàn)染菌、長期放置、更換品種時，都要求使用外源蒸汽進行滅菌；滅菌條件：發(fā)酵罐罐體內(nèi)壓力0.120Mpa~0.140Mpa、溫度達125℃時高壓蒸汽滅菌3h。a)配方I：玉米粉3%、豆柏粉0.3%、KH2PO40.05%、MgSO40.15%、余量為水，pH自然；b)配方II：豆柏粉0.8%、白砂糖2.5%、胡蘿卜粉2%、KH2PO40.1%、MgSO40.05%、消泡劑0.002%、余量為水，pH自然。將配置好的液體培養(yǎng)基原料充分溶解，加適量溫水攪拌均勻，倒入或用泵抽入發(fā)酵罐中，加水定容采用外源蒸汽對投料后的發(fā)酵罐進行實消。發(fā)酵罐罐體內(nèi)壓力0.20Mpa~0.30Mpa、溫度125℃時，容積700L發(fā)酵罐滅菌3h（其他型號罐體滅菌時間視滅菌效果作相應(yīng)調(diào)整）。實消滅菌結(jié)束后將冷水通入發(fā)酵罐夾層或者內(nèi)置冷卻系統(tǒng)中循環(huán)，使液體培養(yǎng)基降溫至24℃~26℃。降溫過程中及時向發(fā)酵罐通入無菌空氣防止罐壓回零。采用火焰保護接種方法，把火焰圈放在投料口的上方點燃，打開進料口蓋，將搖瓶液體菌種迅速投3DB36/T1770—2023入罐培養(yǎng)基中（接種量的體積比為2%~3%），迅速蓋好進料口蓋密封并移去火焰圈。8.4培養(yǎng)培養(yǎng)時控制進氣閥的無菌空氣通風量至0.5m3/h、罐壓保持在0.03Mpa~0.05Mpa、培養(yǎng)溫度26±1℃。培養(yǎng)5d后，發(fā)酵罐液體菌種達到后續(xù)表1和表2要求，供液體菌種接種器接種使用。表1感官指標項目指標菌液色澤菌液形態(tài)菌液氣味球狀菌絲體呈淡黃色，菌液呈半透明狀。菌液稍粘稠，有大量微小菌絲球（直徑≤1mm)懸浮、分布均勻。有淡淡的菇香味，無異味。表2理化和生物指標項目pH值指標6.3~6.8菌絲層在下量筒承裝液體觀察顯微鏡下菌絲形態(tài)和雜菌鑒別留存樣品無菌檢查接菌實驗菌絲粗壯，無雜菌平板有茶樹菇菌絲生長，無其他雜菌生長。液體菌種接入菌袋中，僅有茶樹菇菌絲生長，無其他雜菌生長8.5取樣及檢測8.5.1取樣取樣包括發(fā)酵罐滅菌后的空白培養(yǎng)基樣品和培養(yǎng)過程中定期從發(fā)酵罐中取出的樣品，用作鏡檢和無菌檢測。上述樣品應(yīng)置于4℃冰箱內(nèi)保存一周以上，以備檢測或復檢。檢測項目包括不限于以下內(nèi)容：1)發(fā)酵罐滅菌后的空白培養(yǎng)基樣品涂布于無菌瓊脂平板上28℃±1