pcr實(shí)驗(yàn)室考試題目及答案VIP

pcr實(shí)驗(yàn)室考試題目及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.PCR反應(yīng)的基本步驟不包括（）A.變性B.復(fù)性C.延伸D.轉(zhuǎn)錄答案：D2.Taq酶的特點(diǎn)是（）A.耐高溫B.耐低溫C.催化效率低D.易失活答案：A3.PCR引物設(shè)計(jì)時(shí)，其長(zhǎng)度一般為（）A.5-10bpB.15-30bpC.30-50bpD.50-100bp答案：B4.以下哪種物質(zhì)不是PCR反應(yīng)體系的成分（）A.dNTPB.模板DNAC.限制性內(nèi)切酶D.引物答案：C5.PCR實(shí)驗(yàn)中，防止污染的關(guān)鍵是（）A.實(shí)驗(yàn)器材消毒B.試劑質(zhì)量C.分區(qū)操作D.操作人員技能答案：C6.熒光定量PCR技術(shù)不能用于（）A.基因表達(dá)分析B.病原體核酸定量C.基因克隆D.病毒載量監(jiān)測(cè)答案：C7.進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，通常使用的緩沖液是（）A.Tris-HClB.PBSC.檸檬酸鈉D.硼酸緩沖液答案：A8.PCR反應(yīng)中，復(fù)性溫度一般比引物Tm值低（）A.1-2℃B.3-5℃C.5-10℃D.10-15℃答案：B9.逆轉(zhuǎn)錄PCR可用于（）A.擴(kuò)增基因組DNAB.擴(kuò)增RNAC.擴(kuò)增線粒體DNAD.擴(kuò)增葉綠體DNA答案：B10.以下關(guān)于PCR循環(huán)數(shù)說(shuō)法正確的是（）A.循環(huán)數(shù)越多越好B.一般25-35個(gè)循環(huán)C.循環(huán)數(shù)與產(chǎn)物量無(wú)關(guān)D.固定為40個(gè)循環(huán)答案：B二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.PCR技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域包括（）A.疾病診斷B.法醫(yī)鑒定C.基因克隆D.物種進(jìn)化研究答案：ABCD2.影響PCR反應(yīng)的因素有（）A.模板質(zhì)量B.引物濃度C.Mg2?濃度D.反應(yīng)溫度答案：ABCD3.PCR實(shí)驗(yàn)室分區(qū)包括（）A.試劑準(zhǔn)備區(qū)B.樣本制備區(qū)C.擴(kuò)增區(qū)D.產(chǎn)物分析區(qū)答案：ABCD4.以下屬于PCR引物設(shè)計(jì)原則的是（）A.長(zhǎng)度合適B.避免形成引物二聚體C.GC含量適中D.特異性強(qiáng)答案：ABCD5.熒光定量PCR常用的熒光化學(xué)物質(zhì)有（）A.SYBRGreenIB.FAMC.ROXD.TAMRA答案：ABCD6.PCR產(chǎn)物的檢測(cè)方法有（）A.瓊脂糖凝膠電泳B.聚丙烯酰胺凝膠電泳C.測(cè)序D.熒光定量檢測(cè)答案：ABCD7.逆轉(zhuǎn)錄PCR需要的酶有（）A.逆轉(zhuǎn)錄酶B.Taq酶C.限制性內(nèi)切酶D.DNA連接酶答案：AB8.以下哪些操作可防止PCR實(shí)驗(yàn)室污染（）A.定期清潔消毒B.不同區(qū)域?qū)Ｓ闷鞑腃.佩戴口罩手套D.實(shí)驗(yàn)后及時(shí)清理答案：ABCD9.PCR技術(shù)中引物的作用是（）A.提供3'-OH末端B.引導(dǎo)DNA合成方向C.識(shí)別模板D.提高反應(yīng)效率答案：ABC10.熱啟動(dòng)PCR的優(yōu)點(diǎn)有（）A.減少非特異性擴(kuò)增B.提高擴(kuò)增效率C.降低引物二聚體形成D.增加模板穩(wěn)定性答案：ABC三、判斷題（每題2分，共20分）1.PCR技術(shù)可以擴(kuò)增任意長(zhǎng)度的DNA片段。（）答案：錯(cuò)誤2.Taq酶沒(méi)有3'→5'外切酶活性，因此保真性較差。（）答案：正確3.引物濃度越高，PCR反應(yīng)效果越好。（）答案：錯(cuò)誤4.PCR實(shí)驗(yàn)室不需要進(jìn)行嚴(yán)格的通風(fēng)換氣。（）答案：錯(cuò)誤5.熒光定量PCR能對(duì)基因進(jìn)行絕對(duì)定量和相對(duì)定量分析。（）答案：正確6.逆轉(zhuǎn)錄PCR是先將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增。（）答案：正確7.實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)PCR產(chǎn)物條帶模糊，一定是模板質(zhì)量問(wèn)題。（）答案：錯(cuò)誤8.PCR反應(yīng)體系中，Mg2?濃度對(duì)反應(yīng)無(wú)影響。（）答案：錯(cuò)誤9.進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，不同批次的試劑可以隨意混用。（）答案：錯(cuò)誤10.PCR技術(shù)只能擴(kuò)增雙鏈DNA。（）答案：錯(cuò)誤四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共20分）1.簡(jiǎn)述PCR技術(shù)的基本原理。答案：PCR技術(shù)以模板DNA、引物、dNTP、Taq酶等為原料，經(jīng)過(guò)高溫變性使雙鏈DNA解開(kāi)為單鏈，低溫復(fù)性讓引物與模板結(jié)合，中溫延伸由Taq酶催化合成新的DNA鏈，通過(guò)多次循環(huán)實(shí)現(xiàn)特定DNA片段的大量擴(kuò)增。2.說(shuō)明PCR實(shí)驗(yàn)室分區(qū)的意義。答案：PCR實(shí)驗(yàn)室分區(qū)可有效防止交叉污染。各區(qū)域功能不同且獨(dú)立，試劑準(zhǔn)備區(qū)避免試劑受污染，樣本制備區(qū)防止樣本間交叉污染，擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)防止產(chǎn)物對(duì)前面環(huán)節(jié)造成污染，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性。3.簡(jiǎn)述熒光定量PCR的原理。答案：熒光定量PCR在傳統(tǒng)PCR基礎(chǔ)上，加入熒光標(biāo)記物。隨著PCR反應(yīng)進(jìn)行，熒光信號(hào)強(qiáng)度與PCR產(chǎn)物量呈正比。通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)起始模板進(jìn)行定量分析，實(shí)現(xiàn)對(duì)核酸的精確定量。4.引物設(shè)計(jì)應(yīng)注意哪些要點(diǎn)？答案：引物長(zhǎng)度一般15-30bp；GC含量40%-60%；避免引物自身互補(bǔ)形成發(fā)卡結(jié)構(gòu)和引物二聚體；上下游引物Tm值相差不超過(guò)5℃；引物3'端堿基最好為G或C；具有特異性，與模板結(jié)合準(zhǔn)確。五、討論題（每題5分，共20分）1.討論P(yáng)CR實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增的原因及解決方法。答案：原因可能是引物特異性差、退火溫度過(guò)低、模板復(fù)雜、Mg2?濃度過(guò)高。解決方法有重新設(shè)計(jì)引物，提高特異性；適當(dāng)提高退火溫度；對(duì)模板進(jìn)行純化；優(yōu)化Mg2?濃度；采用熱啟動(dòng)PCR減少非特異起始。2.若PCR產(chǎn)物電泳后無(wú)條帶，可能有哪些原因及如何解決？答案：原因有模板問(wèn)題（如含量低、降解）、引物問(wèn)題（設(shè)計(jì)不當(dāng)、濃度低）、酶活性問(wèn)題、反應(yīng)條件不合適。解決辦法為重新提取高質(zhì)量模板，優(yōu)化引物設(shè)計(jì)和濃度，確保酶活性，調(diào)整反應(yīng)溫度、時(shí)間和循環(huán)數(shù)等條件。3.談?wù)凱CR技術(shù)在臨床診斷中的應(yīng)用及局限性。答案：應(yīng)用于病原體檢測(cè)，如病毒、細(xì)菌；遺傳性疾病診斷；腫瘤診斷和監(jiān)測(cè)。局限性在于易污染致假陽(yáng)性；靈敏度高可能把微量病原體誤判為感染；對(duì)操作人員