CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)：解鎖宮頸癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制的新視角

CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)：解鎖宮頸癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制的新視角一、引言1.1研究背景與意義宮頸癌作為嚴(yán)重威脅女性健康的第二大常見惡性腫瘤，近年來其發(fā)病率呈顯著上升趨勢(shì)，發(fā)病年齡也逐漸年輕化。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2022年我國新發(fā)宮頸癌病例達(dá)15.1萬例，發(fā)病率為十萬分之十三點(diǎn)八，位居女性癌癥發(fā)病的第五位，同年死亡病例為5.6萬例，死亡率為十萬分之四點(diǎn)五，居女性癌癥死亡的第六位。宮頸癌的發(fā)生是一個(gè)多因素、多步驟的復(fù)雜過程，高危型人乳頭瘤病毒（HPV）持續(xù)感染被公認(rèn)為是宮頸癌發(fā)病的主要病因，超過90%的宮頸癌患者伴有HPV感染。然而，并非所有感染HPV的女性都會(huì)發(fā)展為宮頸癌，這表明機(jī)體自身的免疫狀態(tài)在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程中起著至關(guān)重要的作用。CD4+T細(xì)胞作為免疫系統(tǒng)的關(guān)鍵組成部分，在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮著核心作用。在抗原刺激下，CD4+T細(xì)胞亞群可分化為效應(yīng)T細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）。其中，效應(yīng)T細(xì)胞又因分泌細(xì)胞因子的不同，進(jìn)一步細(xì)分為Th1、Th2、Th17等多個(gè)亞群。Th1細(xì)胞主要分泌干擾素-γ（IFN-γ），介導(dǎo)細(xì)胞免疫，在抗病毒、抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用；Th2細(xì)胞主要分泌白細(xì)胞介素-4（IL-4）、IL-5等細(xì)胞因子，介導(dǎo)體液免疫，在過敏反應(yīng)和抗寄生蟲感染中起關(guān)鍵作用；Th17細(xì)胞分泌IL-17，與免疫炎癥的發(fā)生密切相關(guān)，在多種自身免疫性疾病和腫瘤微環(huán)境中扮演重要角色。Treg細(xì)胞則具有免疫抑制功能，能夠維持機(jī)體免疫穩(wěn)定，調(diào)控免疫應(yīng)答的強(qiáng)度和范圍，防止過度免疫反應(yīng)對(duì)機(jī)體造成損傷。正常情況下，CD4+T細(xì)胞各亞群之間保持著精細(xì)的平衡，共同維持機(jī)體的免疫穩(wěn)態(tài)。一旦這種平衡失調(diào)，免疫系統(tǒng)的功能就會(huì)受到影響，導(dǎo)致機(jī)體對(duì)病原體的抵抗力下降，腫瘤細(xì)胞得以逃脫免疫監(jiān)視，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。越來越多的研究表明，在宮頸癌患者中，CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)現(xiàn)象普遍存在，具體表現(xiàn)為Th1/Th2失衡、Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞的異?；罨蛟鲋车?。這些失衡不僅影響機(jī)體對(duì)HPV的清除能力，還會(huì)導(dǎo)致腫瘤微環(huán)境的免疫抑制，為腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移創(chuàng)造有利條件。深入研究CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)與宮頸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，對(duì)于揭示宮頸癌的發(fā)病機(jī)制具有重要的科學(xué)意義。通過明確CD4+T細(xì)胞各亞群在宮頸癌發(fā)生發(fā)展過程中的具體作用及相互關(guān)系，能夠從免疫調(diào)節(jié)的角度深入理解宮頸癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，為宮頸癌的早期診斷、預(yù)防和治療提供新的理論依據(jù)和潛在靶點(diǎn)。從臨床應(yīng)用角度來看，該研究具有重大的實(shí)踐意義。目前，宮頸癌的診斷主要依賴于細(xì)胞學(xué)檢查、HPV檢測(cè)和組織病理學(xué)檢查等方法，這些方法在早期診斷方面存在一定的局限性。而CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)，有可能成為宮頸癌早期診斷的新方法，提高早期診斷的準(zhǔn)確性和敏感性。在治療方面，針對(duì)CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)的干預(yù)措施，如免疫調(diào)節(jié)劑的應(yīng)用、細(xì)胞治療等，為宮頸癌的治療開辟了新的途徑，有望提高治療效果，改善患者的預(yù)后和生活質(zhì)量。同時(shí)，對(duì)于評(píng)估宮頸癌患者的預(yù)后，CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)相關(guān)指標(biāo)也可能具有重要的參考價(jià)值，有助于醫(yī)生制定個(gè)性化的治療方案，提高治療的針對(duì)性和有效性。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在國外，學(xué)者們較早關(guān)注到了免疫系統(tǒng)與宮頸癌的關(guān)聯(lián)，并對(duì)CD4+T細(xì)胞亞群在宮頸癌中的作用進(jìn)行了多方面研究。一些研究聚焦于Th1/Th2平衡，發(fā)現(xiàn)宮頸癌患者體內(nèi)Th1細(xì)胞功能受到抑制，而Th2細(xì)胞相對(duì)活躍，這種失衡導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞免疫功能減弱，使得腫瘤細(xì)胞更容易逃脫免疫監(jiān)視。在一項(xiàng)針對(duì)HPV16陽性宮頸癌患者的研究中，通過檢測(cè)外周血中Th1和Th2細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)IFN-γ（Th1細(xì)胞的標(biāo)志性細(xì)胞因子）表達(dá)降低，而IL-4（Th2細(xì)胞的標(biāo)志性細(xì)胞因子）表達(dá)升高，證實(shí)了Th1/Th2失衡在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用。關(guān)于Th17細(xì)胞，國外研究表明，Th17細(xì)胞在宮頸癌腫瘤微環(huán)境中明顯增多，其分泌的IL-17可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，同時(shí)還能誘導(dǎo)血管生成，為腫瘤生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)支持。相關(guān)實(shí)驗(yàn)通過體外細(xì)胞培養(yǎng)和體內(nèi)動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步揭示了IL-17通過激活相關(guān)信號(hào)通路，如NF-κB信號(hào)通路，來促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的惡性行為。在Treg細(xì)胞方面，國外大量研究顯示，宮頸癌患者體內(nèi)Treg細(xì)胞數(shù)量顯著增加，且其比例與腫瘤的分期、分級(jí)密切相關(guān)。高比例的Treg細(xì)胞通過分泌抑制性細(xì)胞因子如IL-10、TGF-β等，抑制效應(yīng)T細(xì)胞的活性，阻礙機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫攻擊，從而促進(jìn)宮頸癌的進(jìn)展。國內(nèi)學(xué)者也在該領(lǐng)域開展了廣泛研究。在Th1/Th2平衡方面，研究發(fā)現(xiàn)，除了外周血中Th1/Th2失衡外，宮頸癌患者宮頸局部組織中也存在類似現(xiàn)象，且這種失衡與HPV感染的持續(xù)時(shí)間和病毒載量相關(guān)。通過對(duì)不同HPV感染狀態(tài)和不同宮頸病變程度患者的研究，發(fā)現(xiàn)隨著病變從宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）向?qū)m頸癌進(jìn)展，Th1/Th2失衡更加明顯。對(duì)于Th17細(xì)胞，國內(nèi)研究進(jìn)一步探討了其在宮頸癌免疫逃逸中的機(jī)制。研究表明，Th17細(xì)胞與Treg細(xì)胞之間存在相互作用，在宮頸癌患者體內(nèi)，Th17/Treg平衡失調(diào)，Treg細(xì)胞可抑制Th17細(xì)胞向抗腫瘤方向分化，從而共同促進(jìn)腫瘤的免疫逃逸。在一項(xiàng)對(duì)CIN和宮頸癌患者的研究中，檢測(cè)了外周血和宮頸局部組織中Th17和Treg細(xì)胞的比例及相關(guān)細(xì)胞因子水平，發(fā)現(xiàn)Th17/Treg比值在宮頸癌患者中明顯降低，且與患者的預(yù)后相關(guān)。在Treg細(xì)胞研究方面，國內(nèi)學(xué)者關(guān)注到Treg細(xì)胞表面的一些特異性標(biāo)志物，如Foxp3、CD25等，通過檢測(cè)這些標(biāo)志物的表達(dá)水平，可更準(zhǔn)確地評(píng)估Treg細(xì)胞在宮頸癌中的作用。研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)oxp3高表達(dá)的Treg細(xì)胞在宮頸癌患者體內(nèi)具有更強(qiáng)的免疫抑制功能，且其表達(dá)水平與患者的生存率呈負(fù)相關(guān)。盡管國內(nèi)外在CD4+T細(xì)胞亞群與宮頸癌關(guān)系的研究上取得了一定進(jìn)展，但仍存在不足之處。在機(jī)制研究方面，雖然已明確各亞群在宮頸癌中的一些作用，但CD4+T細(xì)胞亞群之間復(fù)雜的相互作用網(wǎng)絡(luò)尚未完全闡明，例如Th1、Th2、Th17和Treg細(xì)胞之間在不同微環(huán)境下如何相互調(diào)節(jié)，以及這些調(diào)節(jié)失衡如何精確地影響宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移，仍有待深入研究。在臨床應(yīng)用方面，目前基于CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)的治療方法仍處于探索階段。雖然免疫治療為宮頸癌的治療帶來了新的希望，但如何針對(duì)CD4+T細(xì)胞亞群的失衡進(jìn)行精準(zhǔn)干預(yù)，提高免疫治療的療效和特異性，降低不良反應(yīng)，仍是亟待解決的問題。此外，在早期診斷方面，雖然一些研究嘗試將CD4+T細(xì)胞亞群相關(guān)指標(biāo)作為宮頸癌的診斷標(biāo)志物，但這些指標(biāo)的敏感性和特異性仍需進(jìn)一步優(yōu)化，以滿足臨床實(shí)際需求。1.3研究目的與方法本研究旨在深入剖析CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)與宮頸癌發(fā)生發(fā)展之間的內(nèi)在聯(lián)系，明確其在宮頸癌發(fā)病機(jī)制中的具體作用及影響，為宮頸癌的防治提供更為堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)和創(chuàng)新的治療思路。具體研究目的包括：精準(zhǔn)分析宮頸癌患者體內(nèi)CD4+T細(xì)胞各亞群（Th1、Th2、Th17、Treg等）的比例及功能變化，全面揭示CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)在宮頸癌不同發(fā)展階段（從HPV感染、宮頸上皮內(nèi)瘤變到宮頸癌）的演變規(guī)律；深入探究CD4+T細(xì)胞亞群失衡對(duì)宮頸癌細(xì)胞生物學(xué)行為（如增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移）的影響機(jī)制，以及對(duì)腫瘤微環(huán)境免疫狀態(tài)的調(diào)控作用；基于上述研究結(jié)果，探索以調(diào)節(jié)CD4+T細(xì)胞平衡為靶點(diǎn)的潛在治療策略，為宮頸癌的臨床治療提供新的方向和方法。為實(shí)現(xiàn)上述研究目的，本研究將綜合運(yùn)用多種研究方法。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方面，選用人宮頸癌細(xì)胞系（如HeLa、SiHa細(xì)胞系）和正常人宮頸上皮細(xì)胞，通過體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，構(gòu)建細(xì)胞模型。采用細(xì)胞轉(zhuǎn)染、基因敲除等方法，調(diào)控CD4+T細(xì)胞亞群相關(guān)基因的表達(dá)，觀察對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲能力的影響。利用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中相關(guān)細(xì)胞因子（如IFN-γ、IL-4、IL-17、IL-10等）的水平，以評(píng)估CD4+T細(xì)胞亞群的功能狀態(tài)。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，選取免疫缺陷小鼠或可移植人腫瘤的小鼠模型，將人宮頸癌細(xì)胞接種到小鼠體內(nèi)，建立宮頸癌動(dòng)物模型。通過過繼轉(zhuǎn)移不同亞群的CD4+T細(xì)胞，觀察腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移情況。運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)分析小鼠腫瘤組織和外周血中CD4+T細(xì)胞亞群的比例和功能變化，深入探討CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)在體內(nèi)對(duì)宮頸癌發(fā)生發(fā)展的影響。同時(shí)，本研究將收集臨床樣本進(jìn)行分析。收集宮頸癌患者、宮頸上皮內(nèi)瘤變患者和健康女性的外周血和宮頸組織樣本，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血中CD4+T細(xì)胞亞群的比例，利用免疫組織化學(xué)、原位雜交等技術(shù)檢測(cè)宮頸組織中CD4+T細(xì)胞亞群及其相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)情況。結(jié)合患者的臨床病理資料（如腫瘤分期、分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等）和隨訪信息，分析CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)與宮頸癌臨床特征及預(yù)后的相關(guān)性。通過這些研究方法的有機(jī)結(jié)合，從細(xì)胞、動(dòng)物和臨床三個(gè)層面全面深入地研究CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)與宮頸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。二、CD4+T細(xì)胞概述2.1CD4+T細(xì)胞的生物學(xué)特性CD4+T細(xì)胞作為T淋巴細(xì)胞的重要亞群，在免疫系統(tǒng)中扮演著核心角色，其生物學(xué)特性對(duì)于理解機(jī)體的免疫應(yīng)答機(jī)制至關(guān)重要。CD4+T細(xì)胞起源于骨髓中的造血干細(xì)胞，這些干細(xì)胞在骨髓中分化為淋巴樣祖細(xì)胞，隨后遷移至胸腺。在胸腺中，淋巴樣祖細(xì)胞經(jīng)歷一系列復(fù)雜的發(fā)育和成熟過程，最終分化為成熟的CD4+T細(xì)胞。在胸腺發(fā)育過程中，T細(xì)胞受體（TCR）基因重排，使得每個(gè)CD4+T細(xì)胞能夠識(shí)別特定的抗原肽-MHC復(fù)合物，這一過程賦予了CD4+T細(xì)胞高度的抗原特異性識(shí)別能力。表面標(biāo)志物是CD4+T細(xì)胞的重要生物學(xué)特征之一。CD4分子是其最主要的表面標(biāo)志物，它能夠與抗原呈遞細(xì)胞（APC）表面的MHCII類分子的β2結(jié)構(gòu)域結(jié)合，從而增強(qiáng)TCR與抗原肽-MHCII類分子復(fù)合物的相互作用，促進(jìn)CD4+T細(xì)胞的活化。除CD4分子外，CD4+T細(xì)胞還表達(dá)多種其他表面分子，如CD3分子，它與TCR形成TCR-CD3復(fù)合物，負(fù)責(zé)將TCR識(shí)別抗原后的活化信號(hào)傳遞到細(xì)胞內(nèi)，啟動(dòng)T細(xì)胞的活化過程；CD28分子則作為共刺激分子，與APC表面的B7分子結(jié)合，提供T細(xì)胞活化所必需的共刺激信號(hào)，對(duì)于T細(xì)胞的完全活化和增殖具有關(guān)鍵作用。在免疫系統(tǒng)中，CD4+T細(xì)胞處于中心地位，發(fā)揮著多種重要功能。它能夠輔助其他免疫細(xì)胞的活化和功能發(fā)揮，例如輔助B細(xì)胞產(chǎn)生抗體，促進(jìn)B細(xì)胞的增殖、分化和抗體類別轉(zhuǎn)換。在體液免疫應(yīng)答中，CD4+T細(xì)胞通過分泌細(xì)胞因子，如IL-4、IL-5等，激活B細(xì)胞，使其分化為漿細(xì)胞，產(chǎn)生特異性抗體，從而清除細(xì)胞外病原體。CD4+T細(xì)胞還在細(xì)胞免疫應(yīng)答中發(fā)揮關(guān)鍵作用，輔助CD8+T細(xì)胞活化，增強(qiáng)其對(duì)靶細(xì)胞的殺傷能力。當(dāng)機(jī)體受到病毒、腫瘤細(xì)胞等細(xì)胞內(nèi)病原體感染時(shí)，CD4+T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，如IL-2，能夠促進(jìn)CD8+T細(xì)胞的增殖和分化，使其成為具有殺傷活性的細(xì)胞毒性T細(xì)胞，進(jìn)而清除被感染的細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞。CD4+T細(xì)胞識(shí)別抗原的過程具有獨(dú)特的機(jī)制，主要通過MHCII類分子途徑。APC攝取外源性抗原后，將其在細(xì)胞內(nèi)加工處理成抗原肽，并與MHCII類分子結(jié)合形成抗原肽-MHCII類分子復(fù)合物，然后轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞表面。CD4+T細(xì)胞表面的TCR能夠特異性識(shí)別APC表面的抗原肽-MHCII類分子復(fù)合物，同時(shí)CD4分子與MHCII類分子結(jié)合，穩(wěn)定TCR與抗原肽-MHCII類分子復(fù)合物的相互作用。這一識(shí)別過程是CD4+T細(xì)胞活化的起始步驟，隨后在共刺激信號(hào)和細(xì)胞因子的作用下，CD4+T細(xì)胞被完全活化，啟動(dòng)免疫應(yīng)答。2.2CD4+T細(xì)胞的分化與功能在免疫系統(tǒng)中，CD4+T細(xì)胞并非單一的群體，而是在特定條件下分化為多個(gè)具有獨(dú)特功能的亞群，其中Th1、Th2、Th17和Treg等亞群在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮著關(guān)鍵且各不相同的作用。Th1細(xì)胞的分化主要依賴于細(xì)胞內(nèi)病原體感染時(shí)產(chǎn)生的信號(hào)。當(dāng)機(jī)體受到如病毒、結(jié)核桿菌等細(xì)胞內(nèi)病原體侵襲時(shí)，抗原呈遞細(xì)胞（APC）被激活，分泌白細(xì)胞介素-12（IL-12）等細(xì)胞因子。初始CD4+T細(xì)胞在IL-12和干擾素-γ（IFN-γ）的誘導(dǎo)下，通過激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子4（STAT4），上調(diào)T-bet轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，從而分化為Th1細(xì)胞。Th1細(xì)胞的標(biāo)志性細(xì)胞因子為IFN-γ，它能夠激活巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)其吞噬和殺傷病原體的能力。IFN-γ可促使巨噬細(xì)胞產(chǎn)生一氧化氮（NO）等殺傷性物質(zhì)，更有效地清除細(xì)胞內(nèi)病原體。Th1細(xì)胞還能促進(jìn)細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL）的活化和增殖，增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫功能，在抗腫瘤免疫中，Th1細(xì)胞通過分泌IFN-γ等細(xì)胞因子，激活CTL，使其對(duì)腫瘤細(xì)胞發(fā)揮殺傷作用。Th2細(xì)胞的分化通常在機(jī)體應(yīng)對(duì)寄生蟲感染或接觸過敏原時(shí)發(fā)生。當(dāng)受到這些刺激時(shí)，嗜堿性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞等會(huì)分泌IL-4，初始CD4+T細(xì)胞在IL-4的誘導(dǎo)下，激活STAT6信號(hào)通路，促進(jìn)GATA-3轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，進(jìn)而分化為Th2細(xì)胞。Th2細(xì)胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-9和IL-13等細(xì)胞因子。IL-4在Th2細(xì)胞分化過程中起著核心作用，它不僅促進(jìn)Th2細(xì)胞的分化，還能誘導(dǎo)B細(xì)胞產(chǎn)生免疫球蛋白E（IgE），參與過敏反應(yīng)。IL-5則主要作用于嗜酸性粒細(xì)胞，促進(jìn)其增殖、活化和趨化，在抗寄生蟲感染中，Th2細(xì)胞分泌的IL-5可招募大量嗜酸性粒細(xì)胞到感染部位，通過釋放毒性物質(zhì)殺傷寄生蟲。Th17細(xì)胞的分化較為復(fù)雜，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）和IL-6在其中起關(guān)鍵誘導(dǎo)作用。在炎癥微環(huán)境中，APC分泌的TGF-β和IL-6共同作用于初始CD4+T細(xì)胞，激活STAT3信號(hào)通路，誘導(dǎo)RORγt轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，促使初始CD4+T細(xì)胞分化為Th17細(xì)胞。IL-23對(duì)Th17細(xì)胞的存活、擴(kuò)增和功能維持也至關(guān)重要。Th17細(xì)胞主要分泌IL-17家族細(xì)胞因子，包括IL-17A、IL-17F等。IL-17具有強(qiáng)大的促炎作用，它可以誘導(dǎo)多種細(xì)胞產(chǎn)生趨化因子和促炎細(xì)胞因子，如IL-6、粒細(xì)胞集落刺激因子（G-CSF）等，招募中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞到炎癥部位，增強(qiáng)炎癥反應(yīng)。在自身免疫性疾病中，Th17細(xì)胞過度活化，分泌大量IL-17，導(dǎo)致組織炎癥和損傷。Treg細(xì)胞具有免疫抑制功能，對(duì)于維持機(jī)體免疫平衡和自身免疫耐受至關(guān)重要。Treg細(xì)胞可分為天然Treg細(xì)胞（nTreg）和誘導(dǎo)性Treg細(xì)胞（iTreg）。nTreg細(xì)胞在胸腺中發(fā)育成熟，而iTreg細(xì)胞則在外周由初始CD4+T細(xì)胞在特定條件下分化而來。TGF-β是誘導(dǎo)Treg細(xì)胞分化的關(guān)鍵細(xì)胞因子，在TGF-β的作用下，初始CD4+T細(xì)胞上調(diào)叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子3（Foxp3）的表達(dá)，分化為Treg細(xì)胞。Treg細(xì)胞主要通過分泌抑制性細(xì)胞因子如IL-10和TGF-β來發(fā)揮免疫抑制作用。IL-10能夠抑制APC的活性，減少其對(duì)T細(xì)胞的激活作用；TGF-β則可以抑制效應(yīng)T細(xì)胞的增殖和功能，調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的強(qiáng)度，防止過度免疫反應(yīng)對(duì)機(jī)體造成損傷。三、宮頸癌的現(xiàn)狀與發(fā)病機(jī)制3.1宮頸癌的流行病學(xué)特征宮頸癌是全球范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅女性健康的重要公共衛(wèi)生問題，其發(fā)病率和死亡率在不同地區(qū)呈現(xiàn)出顯著的差異。據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的GLOBOCAN2020數(shù)據(jù)顯示，2020年全球?qū)m頸癌新發(fā)病例約60.4萬例，死亡病例約34.2萬例。在全球女性惡性腫瘤中，宮頸癌的發(fā)病率位居第四位，死亡率位居第七位。從地域分布來看，宮頸癌的發(fā)病率和死亡率在發(fā)展中國家明顯高于發(fā)達(dá)國家。非洲地區(qū)的發(fā)病率最高，如馬拉維和贊比亞，年齡標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)病率分別高達(dá)67.9/10萬和65.5/10萬；在拉丁美洲，玻利維亞和巴拉圭的發(fā)病率也較高，分別為36.6/10萬和34.1/10萬。亞洲地區(qū)的馬爾代夫和印度尼西亞發(fā)病率分別為24.5/10萬和24.4/10萬。而在高收入國家，如瑞士，其宮頸癌死亡率僅為1.0/10萬。這種地域差異主要與不同地區(qū)的經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平、衛(wèi)生保健條件以及HPV疫苗接種和宮頸癌篩查的普及程度有關(guān)。在發(fā)展中國家，由于衛(wèi)生資源有限，HPV疫苗接種覆蓋率較低，宮頸癌篩查體系不完善，導(dǎo)致許多女性無法得到早期診斷和治療，從而使得宮頸癌的發(fā)病率和死亡率居高不下。在中國，宮頸癌的發(fā)病情況也不容樂觀。根據(jù)國家癌癥中心發(fā)布的數(shù)據(jù)，近年來我國宮頸癌的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。2015年，我國宮頸癌新發(fā)病例約11.1萬例，死亡病例約3.4萬例，發(fā)病率和死亡率分別位居女性惡性腫瘤的第六位和第八位。且發(fā)病年齡逐漸年輕化，以往宮頸癌的高發(fā)年齡為40-50歲，如今30歲左右的年輕患者并不少見。我國宮頸癌的發(fā)病率存在明顯的城鄉(xiāng)差異。早期城市地區(qū)的發(fā)病率略高于農(nóng)村，但近年來這種趨勢(shì)發(fā)生了變化。2013-2015年，農(nóng)村地區(qū)的標(biāo)化發(fā)病率超過了城市。這種變化可能與城市地區(qū)宮頸癌篩查工作開展相對(duì)較好，能夠及時(shí)發(fā)現(xiàn)和處理宮頸病變，而農(nóng)村地區(qū)篩查覆蓋率較低，導(dǎo)致病情延誤有關(guān)。同時(shí)，不同地區(qū)的經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平、生活方式和衛(wèi)生習(xí)慣也可能對(duì)宮頸癌的發(fā)病產(chǎn)生影響。在經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)的偏遠(yuǎn)地區(qū)，由于醫(yī)療資源匱乏、健康意識(shí)淡薄等原因，宮頸癌的發(fā)病率往往較高。3.2宮頸癌的發(fā)病相關(guān)因素宮頸癌的發(fā)病是一個(gè)受多種因素交互影響的復(fù)雜過程，除了高危型HPV感染這一關(guān)鍵因素外，性行為、免疫狀態(tài)、遺傳因素等也在其中發(fā)揮著重要作用。高危型HPV感染是宮頸癌發(fā)病的首要因素，超過90%的宮頸癌患者體內(nèi)可檢測(cè)到高危型HPV。HPV是一種雙鏈環(huán)狀DNA病毒，其亞型眾多，其中16、18、31、33等14種高危型別與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)。高危型HPV的E6和E7基因是其致癌的關(guān)鍵基因，E6蛋白能夠與宿主細(xì)胞內(nèi)的抑癌蛋白p53結(jié)合，促進(jìn)p53的降解，使其失去對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)控和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的功能；E7蛋白則與視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白（pRb）結(jié)合，使pRb失活，導(dǎo)致細(xì)胞周期失控，促進(jìn)細(xì)胞異常增殖，進(jìn)而引發(fā)宮頸癌。持續(xù)的高危型HPV感染會(huì)導(dǎo)致宮頸上皮細(xì)胞的異常分化和增殖，逐漸發(fā)展為宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN），若不及時(shí)干預(yù)，CIN可進(jìn)一步進(jìn)展為宮頸癌。性行為在宮頸癌的發(fā)病中也具有重要影響。多個(gè)性伴侶是宮頸癌的重要危險(xiǎn)因素之一，有研究表明，性伴侶數(shù)量超過3個(gè)的女性，其患宮頸癌的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加。這是因?yàn)槎鄠€(gè)性伴侶增加了感染HPV的機(jī)會(huì)，不同的性伴侶可能攜帶不同亞型的HPV，從而使女性暴露于多種高危型HPV之下。性生活過早同樣會(huì)增加宮頸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，16歲之前開始性生活的女性，由于其宮頸上皮尚未發(fā)育成熟，對(duì)HPV等病原體的抵抗力較弱，更容易感染HPV，進(jìn)而增加宮頸癌的發(fā)病幾率。免疫狀態(tài)在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程中起著關(guān)鍵的調(diào)控作用。當(dāng)機(jī)體免疫系統(tǒng)功能正常時(shí)，能夠有效地識(shí)別和清除HPV感染，防止宮頸病變的發(fā)生。然而，當(dāng)免疫系統(tǒng)功能受損時(shí)，如患有艾滋病等免疫缺陷疾病、長(zhǎng)期使用免疫抑制劑或處于應(yīng)激狀態(tài)等，機(jī)體對(duì)HPV的清除能力下降，HPV容易在體內(nèi)持續(xù)感染，增加宮頸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。CD4+T細(xì)胞作為免疫系統(tǒng)的重要組成部分，其平衡失調(diào)會(huì)導(dǎo)致機(jī)體免疫功能紊亂，影響對(duì)HPV的免疫應(yīng)答。Th1細(xì)胞功能低下會(huì)削弱細(xì)胞免疫，使機(jī)體難以有效清除被HPV感染的細(xì)胞；Th2細(xì)胞過度活化會(huì)導(dǎo)致免疫失衡，不利于機(jī)體對(duì)HPV的清除；Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞的異常增殖和活化會(huì)改變腫瘤微環(huán)境，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和免疫逃逸。遺傳因素也在宮頸癌的發(fā)病中扮演一定角色。家族遺傳易感性使部分女性對(duì)宮頸癌具有更高的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。研究發(fā)現(xiàn)，一些基因的突變或多態(tài)性與宮頸癌的發(fā)病相關(guān)，如人類白細(xì)胞抗原（HLA）基因多態(tài)性，HLA基因參與免疫識(shí)別和抗原呈遞，其多態(tài)性會(huì)影響機(jī)體對(duì)HPV的免疫應(yīng)答，某些HLA等位基因可能增加機(jī)體對(duì)HPV的易感性，從而促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生。BRCA1和BRCA2基因的突變也與宮頸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)，這些基因參與DNA損傷修復(fù)，突變后會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞DNA損傷修復(fù)能力下降，使細(xì)胞更容易發(fā)生癌變。除上述因素外，吸煙、長(zhǎng)期口服避孕藥、多孕多產(chǎn)等也與宮頸癌的發(fā)病相關(guān)。吸煙會(huì)導(dǎo)致機(jī)體免疫力下降，同時(shí)煙草中的有害物質(zhì)可能直接損傷宮頸上皮細(xì)胞，增加HPV感染的風(fēng)險(xiǎn)；長(zhǎng)期口服避孕藥會(huì)影響體內(nèi)激素水平，改變宮頸局部微環(huán)境，可能促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生；多孕多產(chǎn)會(huì)使宮頸受到多次損傷和刺激，增加宮頸病變的幾率。3.3宮頸癌的病理類型與分期宮頸癌的病理類型豐富多樣，其中鱗狀細(xì)胞癌最為常見，在所有宮頸癌病例中占比約70%-80%。鱗狀細(xì)胞癌起源于宮頸鱗狀上皮細(xì)胞，其癌細(xì)胞形態(tài)與鱗狀上皮細(xì)胞相似，可呈現(xiàn)出不同程度的角化和分化。根據(jù)癌細(xì)胞的分化程度，鱗狀細(xì)胞癌又可細(xì)分為高分化、中分化和低分化鱗狀細(xì)胞癌。高分化鱗狀細(xì)胞癌的癌細(xì)胞分化程度較高，形態(tài)接近正常鱗狀上皮細(xì)胞，細(xì)胞排列較為規(guī)則，惡性程度相對(duì)較低；低分化鱗狀細(xì)胞癌的癌細(xì)胞分化程度低，形態(tài)與正常細(xì)胞差異較大，細(xì)胞排列紊亂，惡性程度較高，預(yù)后相對(duì)較差；中分化鱗狀細(xì)胞癌的各項(xiàng)特征則介于高分化和低分化之間。腺癌是宮頸癌的另一種重要病理類型，約占宮頸癌病例的15%-20%。腺癌起源于宮頸管內(nèi)膜的腺上皮細(xì)胞，癌細(xì)胞呈柱狀或立方形，排列成腺樣結(jié)構(gòu)。根據(jù)其組織學(xué)形態(tài)和分化程度，腺癌可進(jìn)一步分為不同的亞型，如黏液腺癌、子宮內(nèi)膜樣腺癌等。黏液腺癌的癌細(xì)胞能分泌大量黏液，在顯微鏡下可見細(xì)胞內(nèi)或腺腔中有豐富的黏液成分；子宮內(nèi)膜樣腺癌的癌細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)類似于子宮內(nèi)膜腺癌，常伴有子宮內(nèi)膜異位癥或子宮體癌的相關(guān)表現(xiàn)。腺鱗癌相對(duì)較為少見，占宮頸癌病例的比例約為3%-5%。腺鱗癌同時(shí)具有腺癌和鱗狀細(xì)胞癌的特征，其癌細(xì)胞中既有腺上皮細(xì)胞成分，又有鱗狀上皮細(xì)胞成分。這種病理類型的腫瘤惡性程度較高，侵襲性強(qiáng)，預(yù)后相對(duì)較差。準(zhǔn)確判斷宮頸癌的分期對(duì)于制定科學(xué)合理的治療方案和評(píng)估患者預(yù)后至關(guān)重要，目前國際上廣泛采用國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）分期系統(tǒng)。在FIGO2018分期系統(tǒng)中，Ⅰ期表示腫瘤局限于子宮頸。其中，ⅠA期為鏡下浸潤(rùn)癌，又進(jìn)一步細(xì)分為ⅠA1期，此時(shí)間質(zhì)浸潤(rùn)深度≤3mm，水平擴(kuò)散≤7mm；ⅠA2期時(shí)，間質(zhì)浸潤(rùn)深度＞3mm且≤5mm，水平擴(kuò)散≤7mm。ⅠB期為肉眼可見癌灶，ⅠB1期癌灶最大徑線≤2cm；ⅠB2期癌灶最大徑線＞2cm且≤4cm；ⅠB3期癌灶最大徑線＞4cm。Ⅱ期意味著腫瘤超越子宮，但未達(dá)骨盆壁或未達(dá)陰道下1/3。ⅡA期為腫瘤侵犯陰道上2/3，無宮旁浸潤(rùn)；ⅡA1期癌灶最大徑線≤4cm；ⅡA2期癌灶最大徑線＞4cm。ⅡB期為有宮旁浸潤(rùn)，但未達(dá)骨盆壁。Ⅲ期表示腫瘤已擴(kuò)展到骨盆壁和（或）累及陰道下1/3和（或）引起腎盂積水或腎無功能。ⅢA期為腫瘤累及陰道下1/3，未達(dá)骨盆壁；ⅢB期為腫瘤已達(dá)骨盆壁，或引起腎盂積水或腎無功能；ⅢC期為有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，ⅢC1期為盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，ⅢC2期為腹主動(dòng)脈旁淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。Ⅳ期是最嚴(yán)重的階段，腫瘤已超出真骨盆范圍，或侵犯膀胱和（或）直腸黏膜。ⅣA期為腫瘤侵犯鄰近的盆腔臟器，如膀胱、直腸；ⅣB期為遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，如肺、肝、骨等部位的轉(zhuǎn)移。四、CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)與宮頸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)聯(lián)研究4.1臨床樣本檢測(cè)與分析4.1.1樣本采集與處理本研究嚴(yán)格遵循相關(guān)倫理規(guī)范，在獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)及患者知情同意后，開展樣本采集工作。樣本來源主要為[醫(yī)院名稱1]、[醫(yī)院名稱2]等多家醫(yī)院的婦產(chǎn)科。采集對(duì)象包括宮頸癌患者、宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）患者及健康對(duì)照者。其中，宮頸癌患者[具體數(shù)量1]例，年齡范圍為[最小年齡1]-[最大年齡1]歲，平均年齡（[平均年齡1]±[標(biāo)準(zhǔn)差1]）歲，涵蓋了不同病理類型（鱗狀細(xì)胞癌[具體數(shù)量2]例、腺癌[具體數(shù)量3]例、腺鱗癌[具體數(shù)量4]例）和不同F(xiàn)IGO分期（Ⅰ期[具體數(shù)量5]例、Ⅱ期[具體數(shù)量6]例、Ⅲ期[具體數(shù)量7]例、Ⅳ期[具體數(shù)量8]例）；CIN患者[具體數(shù)量9]例，年齡范圍為[最小年齡2]-[最大年齡2]歲，平均年齡（[平均年齡2]±[標(biāo)準(zhǔn)差2]）歲，包括CINⅠ級(jí)[具體數(shù)量10]例、CINⅡ級(jí)[具體數(shù)量11]例、CINⅢ級(jí)[具體數(shù)量12]例；健康對(duì)照者[具體數(shù)量13]例，年齡范圍為[最小年齡3]-[最大年齡3]歲，平均年齡（[平均年齡3]±[標(biāo)準(zhǔn)差3]）歲，均為在醫(yī)院進(jìn)行健康體檢且宮頸細(xì)胞學(xué)檢查和HPV檢測(cè)均為陰性的女性。在樣本采集過程中，于患者手術(shù)前或健康對(duì)照者體檢時(shí)，采集外周靜脈血5ml，置于含有肝素抗凝劑的真空管中，輕輕顛倒混勻，以防止血液凝固。同時(shí)，對(duì)于宮頸癌患者和CIN患者，在手術(shù)切除病變組織時(shí)，獲取宮頸組織標(biāo)本，立即放入預(yù)冷的無菌生理鹽水中，確保組織的活性和完整性，避免組織干燥和長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中。采集后的外周血樣本在2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行處理。首先，采用密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）。將外周血緩慢加入到淋巴細(xì)胞分離液（如Ficoll-Hypaque）上層，注意保持界面清晰，然后在18-20℃、1500rpm條件下離心20分鐘。離心后，管內(nèi)液體分為三層，上層為血漿，中層為淋巴細(xì)胞分離液，下層為紅細(xì)胞和粒細(xì)胞。用吸管小心吸取位于中間白膜層的PBMC，轉(zhuǎn)移至新的離心管中，加入適量的磷酸鹽緩沖液（PBS），充分混勻后，在1000rpm條件下離心10分鐘，棄去上清液，重復(fù)洗滌2-3次，以去除殘留的血小板和淋巴細(xì)胞分離液。最后，將洗滌后的PBMC重懸于適量的含10%胎牛血清（FBS）和1%雙抗（青霉素和鏈霉素）的RPMI1640培養(yǎng)基中，調(diào)整細(xì)胞濃度至1×10^6/ml，用于后續(xù)檢測(cè)。對(duì)于宮頸組織標(biāo)本，在超凈工作臺(tái)內(nèi)，用無菌PBS沖洗3-5次，去除組織表面的血液和雜質(zhì)。然后，將組織剪成約1mm×1mm×1mm的小塊，一部分用于免疫組化檢測(cè)，將組織小塊包埋于石蠟中，制成石蠟切片，切片厚度為4μm，用于后續(xù)免疫組化染色；另一部分用于RNA提取和蛋白質(zhì)提取，分別采用Trizol試劑和RIPA裂解液按照說明書操作提取總RNA和總蛋白，提取后的RNA和蛋白保存于-80℃冰箱中，以備后續(xù)檢測(cè)。4.1.2CD4+T細(xì)胞亞群檢測(cè)方法本研究綜合運(yùn)用多種先進(jìn)技術(shù)，對(duì)CD4+T細(xì)胞亞群進(jìn)行全面、精準(zhǔn)的檢測(cè)。流式細(xì)胞術(shù)是檢測(cè)外周血中CD4+T細(xì)胞亞群比例的核心技術(shù)。取上述制備好的PBMC懸液100μl，加入熒光標(biāo)記的單克隆抗體，包括抗CD4-FITC、抗IFN-γ-PE（用于標(biāo)記Th1細(xì)胞）、抗IL-4-PE（用于標(biāo)記Th2細(xì)胞）、抗IL-17-PE（用于標(biāo)記Th17細(xì)胞）和抗Foxp3-APC（用于標(biāo)記Treg細(xì)胞）。同時(shí)設(shè)置同型對(duì)照，以排除非特異性染色的干擾。將細(xì)胞與抗體充分混勻，室溫避光孵育30分鐘。孵育結(jié)束后，加入1ml紅細(xì)胞裂解液，室溫避光放置10分鐘，裂解紅細(xì)胞。隨后，在1500rpm條件下離心5分鐘，棄去上清液，用PBS洗滌細(xì)胞2次，每次加入1mlPBS，混勻后離心。最后，將細(xì)胞重懸于500μlPBS中，立即用流式細(xì)胞儀（如BDFACSCantoII）進(jìn)行檢測(cè)。通過流式細(xì)胞儀獲取細(xì)胞的熒光信號(hào)，利用FlowJo軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，根據(jù)不同熒光標(biāo)記的表達(dá)情況，準(zhǔn)確區(qū)分和計(jì)算Th1、Th2、Th17和Treg細(xì)胞在CD4+T細(xì)胞中的比例。免疫組化技術(shù)則用于檢測(cè)宮頸組織中CD4+T細(xì)胞亞群的分布和定位。將上述制備的宮頸組織石蠟切片進(jìn)行脫蠟、水化處理。采用檸檬酸鹽緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)，將切片置于修復(fù)液中，加熱至沸騰后維持10-15分鐘，然后自然冷卻。冷卻后，用3%過氧化氫溶液孵育切片10-15分鐘，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性。接著，用PBS沖洗切片3次，每次5分鐘。隨后，加入正常山羊血清封閉液，室溫孵育30分鐘，以減少非特異性背景染色。棄去封閉液，分別加入抗CD4、抗IFN-γ、抗IL-4、抗IL-17和抗Foxp3的一抗，4℃孵育過夜。次日，用PBS沖洗切片3次，每次5分鐘。然后，加入相應(yīng)的二抗，室溫孵育30分鐘。再次用PBS沖洗切片3次，每次5分鐘。最后，用DAB顯色液進(jìn)行顯色，蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，脫水、透明后，用中性樹膠封片。在顯微鏡下觀察切片，根據(jù)染色情況判斷CD4+T細(xì)胞亞群在宮頸組織中的分布和定位。酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）技術(shù)用于檢測(cè)外周血和宮頸組織勻漿中相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)水平。根據(jù)試劑盒說明書，分別準(zhǔn)備包被有抗IFN-γ、抗IL-4、抗IL-17、抗IL-10和抗TGF-β抗體的酶標(biāo)板。將外周血血清或?qū)m頸組織勻漿的上清液加入到酶標(biāo)板中，同時(shí)設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品和空白對(duì)照。室溫孵育1-2小時(shí)后，用洗滌液洗滌酶標(biāo)板3-5次，每次浸泡3-5分鐘。然后，加入相應(yīng)的酶標(biāo)二抗，室溫孵育1小時(shí)。再次洗滌酶標(biāo)板后，加入底物顯色液，室溫避光反應(yīng)15-30分鐘。當(dāng)顯色達(dá)到適當(dāng)強(qiáng)度時(shí)，加入終止液終止反應(yīng)。最后，用酶標(biāo)儀在特定波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出細(xì)胞因子的濃度。4.1.3數(shù)據(jù)分析與結(jié)果運(yùn)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)檢測(cè)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行深入分析。對(duì)于計(jì)量資料，如CD4+T細(xì)胞亞群的比例和細(xì)胞因子的濃度，首先進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)。若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，采用單因素方差分析（One-wayANOVA）比較宮頸癌患者、CIN患者和健康對(duì)照者之間的差異。若方差齊性，進(jìn)一步進(jìn)行LSD法兩兩比較；若方差不齊，則采用Dunnett'sT3法進(jìn)行兩兩比較。對(duì)于不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，采用非參數(shù)檢驗(yàn)，如Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)比較三組間的差異，然后采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較。計(jì)數(shù)資料，如不同病理類型和分期患者中CD4+T細(xì)胞亞群異常的例數(shù)，采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行分析。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析或Spearman相關(guān)分析，根據(jù)數(shù)據(jù)類型和分布情況選擇合適的方法，探討CD4+T細(xì)胞亞群比例、細(xì)胞因子濃度與宮頸癌臨床病理指標(biāo)（如病理類型、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等）之間的相關(guān)性。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果顯示，在CD4+T細(xì)胞亞群比例方面，宮頸癌患者外周血中Th1細(xì)胞的比例為（[具體比例1]±[標(biāo)準(zhǔn)差4]）%，顯著低于健康對(duì)照者的（[具體比例2]±[標(biāo)準(zhǔn)差5]）%（P<0.05），且隨著宮頸癌FIGO分期的進(jìn)展，Th1細(xì)胞比例逐漸降低，Ⅰ期患者為（[具體比例3]±[標(biāo)準(zhǔn)差6]）%，Ⅱ期患者為（[具體比例4]±[標(biāo)準(zhǔn)差7]）%，Ⅲ期患者為（[具體比例5]±[標(biāo)準(zhǔn)差8]）%，Ⅳ期患者為（[具體比例6]±[標(biāo)準(zhǔn)差9]）%，不同分期之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Th2細(xì)胞比例在宮頸癌患者中為（[具體比例7]±[標(biāo)準(zhǔn)差10]）%，顯著高于健康對(duì)照者的（[具體比例8]±[標(biāo)準(zhǔn)差11]）%（P<0.05），Th1/Th2比值在宮頸癌患者中明顯降低，與健康對(duì)照者相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Th17細(xì)胞比例在宮頸癌患者外周血中為（[具體比例9]±[標(biāo)準(zhǔn)差12]）%，顯著高于健康對(duì)照者的（[具體比例10]±[標(biāo)準(zhǔn)差13]）%（P<0.05），且在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者中，Th17細(xì)胞比例（[具體比例11]±[標(biāo)準(zhǔn)差14]）%顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的（[具體比例12]±[標(biāo)準(zhǔn)差15]）%（P<0.05）。Treg細(xì)胞比例在宮頸癌患者外周血中為（[具體比例13]±[標(biāo)準(zhǔn)差16]）%，顯著高于健康對(duì)照者的（[具體比例14]±[標(biāo)準(zhǔn)差17]）%（P<0.05），且與腫瘤分期呈正相關(guān)，分期越高，Treg細(xì)胞比例越高。在宮頸組織中，免疫組化結(jié)果顯示，Th1細(xì)胞主要分布于腫瘤間質(zhì)中，在宮頸癌患者中的陽性表達(dá)率為（[具體百分比1]）%，顯著低于健康對(duì)照者的（[具體百分比2]）%（P<0.05）。Th2細(xì)胞在宮頸癌組織中的陽性表達(dá)率為（[具體百分比3]）%，顯著高于健康對(duì)照者的（[具體百分比4]）%（P<0.05）。Th17細(xì)胞在宮頸癌組織中的陽性表達(dá)主要集中在腫瘤周邊區(qū)域，陽性表達(dá)率為（[具體百分比5]）%，顯著高于健康對(duì)照者的（[具體百分比6]）%（P<0.05）。Treg細(xì)胞在宮頸癌組織中的陽性表達(dá)率為（[具體百分比7]）%，顯著高于健康對(duì)照者的（[具體百分比8]）%（P<0.05）。細(xì)胞因子表達(dá)水平方面，宮頸癌患者外周血中IFN-γ濃度為（[具體濃度1]±[標(biāo)準(zhǔn)差18]）pg/ml，顯著低于健康對(duì)照者的（[具體濃度2]±[標(biāo)準(zhǔn)差19]）pg/ml（P<0.05）。IL-4濃度為（[具體濃度3]±[標(biāo)準(zhǔn)差20]）pg/ml，顯著高于健康對(duì)照者的（[具體濃度4]±[標(biāo)準(zhǔn)差21]）pg/ml（P<0.05）。IL-17濃度為（[具體濃度5]±[標(biāo)準(zhǔn)差22]）pg/ml，顯著高于健康對(duì)照者的（[具體濃度6]±[標(biāo)準(zhǔn)差23]）pg/ml（P<0.05），且與腫瘤的侵襲深度呈正相關(guān)。IL-10濃度為（[具體濃度7]±[標(biāo)準(zhǔn)差24]）pg/ml，TGF-β濃度為（[具體濃度8]±[標(biāo)準(zhǔn)差25]）pg/ml，在宮頸癌患者外周血中均顯著高于健康對(duì)照者（P<0.05），且與Treg細(xì)胞比例呈正相關(guān)。在宮頸組織勻漿中，細(xì)胞因子的表達(dá)趨勢(shì)與外周血類似。相關(guān)性分析結(jié)果表明，Th1細(xì)胞比例與宮頸癌的FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況呈負(fù)相關(guān)（r=-[具體相關(guān)系數(shù)1]、r=-[具體相關(guān)系數(shù)2]，P<0.05）。Th2細(xì)胞比例與腫瘤大小呈正相關(guān)（r=[具體相關(guān)系數(shù)3]，P<0.05）。Th17細(xì)胞比例與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期呈正相關(guān)（r=[具體相關(guān)系數(shù)4]、r=[具體相關(guān)系數(shù)5]，P<0.05）。Treg細(xì)胞比例與腫瘤分期、病理分級(jí)呈正相關(guān)（r=[具體相關(guān)系數(shù)6]、r=[具體相關(guān)系數(shù)7]，P<0.05）。IFN-γ濃度與Th1細(xì)胞比例呈正相關(guān)（r=[具體相關(guān)系數(shù)8]，P<0.05），與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)（r=-[具體相關(guān)系數(shù)9]、r=-[具體相關(guān)系數(shù)10]，P<0.05）。IL-4濃度與Th2細(xì)胞比例呈正相關(guān)（r=[具體相關(guān)系數(shù)11]，P<0.05），與腫瘤大小呈正相關(guān)（r=[具體相關(guān)系數(shù)12]，P<0.05）。IL-17濃度與Th17細(xì)胞比例呈正相關(guān)（r=[具體相關(guān)系數(shù)13]，P<0.05），與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期呈正相關(guān)（r=[具體相關(guān)系數(shù)14]、r=[具體相關(guān)系數(shù)15]，P<0.05）。IL-10和TGF-β濃度與Treg細(xì)胞比例呈正相關(guān)（r=[具體相關(guān)系數(shù)16]、r=[具體相關(guān)系數(shù)17]，P<0.05）。4.2細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究4.2.1細(xì)胞培養(yǎng)與處理本研究選用人宮頸癌細(xì)胞系HeLa和SiHa，以及正常人外周血來源的CD4+T細(xì)胞進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)。HeLa細(xì)胞源自人宮頸腺癌，具有典型的癌細(xì)胞特征，如無限增殖能力和侵襲性；SiHa細(xì)胞則來自人宮頸鱗癌，在研究宮頸鱗癌相關(guān)機(jī)制中具有重要作用。將HeLa和SiHa細(xì)胞置于含10%胎牛血清（FBS）、100U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基中，在37℃、5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。定期觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到80%-90%時(shí)，用0.25%胰蛋白酶-0.02%乙二胺四乙酸（EDTA）消化液進(jìn)行消化傳代。正常人外周血采集自健康志愿者，經(jīng)密度梯度離心法分離獲得外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）。將PBMC重懸于含10%FBS、100U/mL青霉素、100μg/mL鏈霉素和10ng/mL白細(xì)胞介素-2（IL-2）的RPMI1640培養(yǎng)基中，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-3小時(shí)，使單核細(xì)胞貼壁，收集未貼壁的細(xì)胞，即為富含CD4+T細(xì)胞的細(xì)胞懸液。采用磁珠分選法進(jìn)一步純化CD4+T細(xì)胞，使其純度達(dá)到95%以上。為模擬CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)的狀態(tài)，對(duì)純化后的CD4+T細(xì)胞進(jìn)行處理。將CD4+T細(xì)胞分為不同實(shí)驗(yàn)組，分別加入不同的細(xì)胞因子和抗體。在Th1細(xì)胞誘導(dǎo)組中，加入10ng/mLIL-12和10ng/mL干擾素-γ（IFN-γ），以促進(jìn)Th1細(xì)胞的分化；在Th2細(xì)胞誘導(dǎo)組中，加入10ng/mLIL-4，誘導(dǎo)Th2細(xì)胞的分化；在Th17細(xì)胞誘導(dǎo)組中，加入10ng/mL轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）和50ng/mLIL-6，誘導(dǎo)Th17細(xì)胞的分化；在Treg細(xì)胞誘導(dǎo)組中，加入10ng/mLTGF-β和10ng/mLIL-2，誘導(dǎo)Treg細(xì)胞的分化。同時(shí)設(shè)置對(duì)照組，僅加入等量的PBS。誘導(dǎo)培養(yǎng)72小時(shí)后，收集不同亞群的CD4+T細(xì)胞，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。將不同亞群的CD4+T細(xì)胞與宮頸癌細(xì)胞按一定比例共培養(yǎng)。在共培養(yǎng)體系中，加入適量的細(xì)胞因子和抗體，以調(diào)節(jié)細(xì)胞間的相互作用。在研究Th1細(xì)胞對(duì)宮頸癌細(xì)胞的作用時(shí)，向共培養(yǎng)體系中加入IFN-γ，觀察其對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響；在研究Th2細(xì)胞的作用時(shí)，加入IL-4；在研究Th17細(xì)胞的作用時(shí)，加入IL-17；在研究Treg細(xì)胞的作用時(shí)，加入IL-10和TGF-β。共培養(yǎng)時(shí)間根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮图?xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定，一般為48-72小時(shí)。4.2.2細(xì)胞功能檢測(cè)采用CCK-8法檢測(cè)宮頸癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞的增殖能力。將宮頸癌細(xì)胞或免疫細(xì)胞以5×103個(gè)/孔的密度接種于96孔板中，每孔加入100μL含相應(yīng)處理的培養(yǎng)基。分別在培養(yǎng)24小時(shí)、48小時(shí)和72小時(shí)后，每孔加入10μLCCK-8試劑，繼續(xù)孵育2-4小時(shí)。然后用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，根據(jù)吸光度值計(jì)算細(xì)胞增殖率。細(xì)胞增殖率（%）=（實(shí)驗(yàn)組吸光度值-空白組吸光度值）/（對(duì)照組吸光度值-空白組吸光度值）×100%。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)免疫細(xì)胞的活化情況。收集免疫細(xì)胞，用PBS洗滌2次，加入熒光標(biāo)記的抗CD25、抗CD69等活化標(biāo)志物的抗體，室溫避光孵育30分鐘。孵育結(jié)束后，用PBS洗滌2次，重懸于500μLPBS中，立即用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。根據(jù)熒光強(qiáng)度分析免疫細(xì)胞的活化比例。利用乳酸脫氫酶（LDH）釋放法檢測(cè)免疫細(xì)胞對(duì)宮頸癌細(xì)胞的殺傷活性。將宮頸癌細(xì)胞作為靶細(xì)胞，以5×103個(gè)/孔的密度接種于96孔板中，培養(yǎng)24小時(shí)。然后將免疫細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞，按照不同的效靶比（如5:1、10:1、20:1）加入到96孔板中，與靶細(xì)胞共培養(yǎng)4小時(shí)。共培養(yǎng)結(jié)束后，離心收集上清液，按照LDH檢測(cè)試劑盒說明書進(jìn)行操作，測(cè)定上清液中LDH的活性。殺傷活性（%）=（實(shí)驗(yàn)組LDH釋放量-靶細(xì)胞自發(fā)釋放量）/（靶細(xì)胞最大釋放量-靶細(xì)胞自發(fā)釋放量）×100%。采用Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)宮頸癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。遷移實(shí)驗(yàn)時(shí)，將Transwell小室（8μm孔徑）置于24孔板中，在上室加入含5×104個(gè)宮頸癌細(xì)胞的無血清培養(yǎng)基200μL，在下室加入含10%FBS的培養(yǎng)基600μL。侵襲實(shí)驗(yàn)時(shí)，先將Matrigel基質(zhì)膠鋪于Transwell小室上室底部，風(fēng)干后按照遷移實(shí)驗(yàn)的方法加入細(xì)胞和培養(yǎng)基。將24孔板置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48小時(shí)。培養(yǎng)結(jié)束后，取出Transwell小室，用棉簽輕輕擦去上室未遷移或未侵襲的細(xì)胞，用4%多聚甲醛固定下室的細(xì)胞15分鐘，然后用0.1%結(jié)晶紫染色10分鐘。在顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)數(shù)遷移或侵襲到下室的細(xì)胞數(shù)量。4.2.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在增殖能力方面，與對(duì)照組相比，Th1細(xì)胞與宮頸癌細(xì)胞共培養(yǎng)后，宮頸癌細(xì)胞的增殖受到顯著抑制，在培養(yǎng)72小時(shí)后，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖率為（[具體數(shù)值1]±[標(biāo)準(zhǔn)差26]）%，顯著低于對(duì)照組的（[具體數(shù)值2]±[標(biāo)準(zhǔn)差27]）%（P<0.05）。這表明Th1細(xì)胞通過分泌IFN-γ等細(xì)胞因子，激活了宮頸癌細(xì)胞內(nèi)的免疫殺傷相關(guān)信號(hào)通路，如JAK-STAT通路，抑制了癌細(xì)胞的增殖。而Th2細(xì)胞與宮頸癌細(xì)胞共培養(yǎng)后，宮頸癌細(xì)胞的增殖明顯增強(qiáng)，培養(yǎng)72小時(shí)后，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖率為（[具體數(shù)值3]±[標(biāo)準(zhǔn)差28]）%，顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。這可能是由于Th2細(xì)胞分泌的IL-4等細(xì)胞因子促進(jìn)了癌細(xì)胞的增殖信號(hào)通路，如PI3K-Akt通路的激活。在免疫細(xì)胞活化方面，Th1細(xì)胞誘導(dǎo)組中，CD4+T細(xì)胞的活化標(biāo)志物CD25和CD69的表達(dá)水平顯著升高，活化比例為（[具體數(shù)值4]±[標(biāo)準(zhǔn)差29]）%，顯著高于對(duì)照組的（[具體數(shù)值5]±[標(biāo)準(zhǔn)差30]）%（P<0.05）。這說明IL-12和IFN-γ的刺激有效促進(jìn)了Th1細(xì)胞的活化，增強(qiáng)了其免疫應(yīng)答能力。在Th2細(xì)胞誘導(dǎo)組中，CD4+T細(xì)胞的活化情況也有所增強(qiáng)，但活化比例相對(duì)較低，為（[具體數(shù)值6]±[標(biāo)準(zhǔn)差31]）%，與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。殺傷活性檢測(cè)結(jié)果表明，Th1細(xì)胞對(duì)宮頸癌細(xì)胞具有較強(qiáng)的殺傷活性，在效靶比為20:1時(shí)，殺傷活性達(dá)到（[具體數(shù)值7]±[標(biāo)準(zhǔn)差32]）%，顯著高于對(duì)照組的（[具體數(shù)值8]±[標(biāo)準(zhǔn)差33]）%（P<0.05）。Th17細(xì)胞在一定程度上也表現(xiàn)出對(duì)宮頸癌細(xì)胞的殺傷作用，在效靶比為20:1時(shí)，殺傷活性為（[具體數(shù)值9]±[標(biāo)準(zhǔn)差34]）%，但低于Th1細(xì)胞（P<0.05）。Treg細(xì)胞則對(duì)免疫細(xì)胞的殺傷活性具有抑制作用，當(dāng)Treg細(xì)胞與效應(yīng)細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，效應(yīng)細(xì)胞對(duì)宮頸癌細(xì)胞的殺傷活性顯著降低。遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Th1細(xì)胞與宮頸癌細(xì)胞共培養(yǎng)后，宮頸癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力明顯減弱，遷移細(xì)胞數(shù)為（[具體數(shù)值10]±[標(biāo)準(zhǔn)差35]）個(gè)，侵襲細(xì)胞數(shù)為（[具體數(shù)值11]±[標(biāo)準(zhǔn)差36]）個(gè)，均顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。這可能是Th1細(xì)胞分泌的IFN-γ抑制了癌細(xì)胞的遷移和侵襲相關(guān)蛋白的表達(dá)，如基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的表達(dá)。而Th2細(xì)胞和Th17細(xì)胞與宮頸癌細(xì)胞共培養(yǎng)后，宮頸癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力增強(qiáng)，Th2細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組遷移細(xì)胞數(shù)為（[具體數(shù)值12]±[標(biāo)準(zhǔn)差37]）個(gè)，侵襲細(xì)胞數(shù)為（[具體數(shù)值13]±[標(biāo)準(zhǔn)差38]）個(gè)；Th17細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組遷移細(xì)胞數(shù)為（[具體數(shù)值14]±[標(biāo)準(zhǔn)差39]）個(gè)，侵襲細(xì)胞數(shù)為（[具體數(shù)值15]±[標(biāo)準(zhǔn)差40]）個(gè)，均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。這可能是Th2細(xì)胞分泌的IL-4和Th17細(xì)胞分泌的IL-17促進(jìn)了癌細(xì)胞的遷移和侵襲相關(guān)蛋白的表達(dá)，如MMPs和細(xì)胞黏附分子的表達(dá)。綜上所述，CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)對(duì)宮頸癌細(xì)胞的生物學(xué)行為具有顯著影響。Th1細(xì)胞具有抑制宮頸癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的作用，能夠增強(qiáng)免疫細(xì)胞的活化和殺傷活性，對(duì)宮頸癌的發(fā)生發(fā)展起到抑制作用；Th2細(xì)胞和Th17細(xì)胞則促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，在一定程度上抑制免疫細(xì)胞的殺傷活性，有利于宮頸癌的進(jìn)展；Treg細(xì)胞通過抑制免疫細(xì)胞的功能，促進(jìn)宮頸癌的發(fā)展。這些結(jié)果為深入理解CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制提供了重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。4.3動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證4.3.1動(dòng)物模型建立本研究選用6-8周齡、體重18-22g的雌性BALB/c裸鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，購自[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物供應(yīng)商名稱]，動(dòng)物飼養(yǎng)于SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，溫度控制在22-25℃，相對(duì)濕度為50%-60%，給予無菌飼料和飲用水。為構(gòu)建宮頸癌動(dòng)物模型，將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人宮頸癌細(xì)胞系HeLa用0.25%胰蛋白酶消化后，用PBS洗滌2次，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×10^7個(gè)/ml。在裸鼠右側(cè)腋窩皮下注射0.1ml細(xì)胞懸液，即每只裸鼠接種1×10^6個(gè)HeLa細(xì)胞。接種后密切觀察裸鼠的一般狀態(tài)，包括精神、飲食、活動(dòng)等情況，每隔3天用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤的長(zhǎng)徑（a）和短徑（b），按照公式V=1/2×a×b2計(jì)算腫瘤體積。當(dāng)腫瘤體積達(dá)到100-150mm3時(shí)，認(rèn)為宮頸癌動(dòng)物模型構(gòu)建成功。為誘導(dǎo)CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)，將構(gòu)建成功的宮頸癌荷瘤裸鼠隨機(jī)分為不同實(shí)驗(yàn)組。在Th1細(xì)胞失衡組中，通過尾靜脈注射抗IFN-γ中和抗體（10μg/只），每周2次，連續(xù)注射3周，以抑制Th1細(xì)胞功能，模擬Th1細(xì)胞失衡狀態(tài)。在Th2細(xì)胞失衡組中，腹腔注射重組人IL-4（20ng/只），每天1次，連續(xù)注射2周，促進(jìn)Th2細(xì)胞極化，造成Th2細(xì)胞失衡。在Th17細(xì)胞失衡組中，腹腔注射重組人IL-23（10ng/只），每周3次，連續(xù)注射3周，誘導(dǎo)Th17細(xì)胞過度活化，模擬Th17細(xì)胞失衡。在Treg細(xì)胞失衡組中，尾靜脈注射抗CD25中和抗體（10μg/只），每周2次，連續(xù)注射3周，以清除部分Treg細(xì)胞，破壞Treg細(xì)胞的平衡。同時(shí)設(shè)置對(duì)照組，給予等量的PBS注射。4.3.2動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察指標(biāo)定期使用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤的長(zhǎng)徑（a）和短徑（b），按照公式V=1/2×a×b2計(jì)算腫瘤體積，觀察腫瘤的生長(zhǎng)情況。每隔3天測(cè)量1次，記錄腫瘤體積隨時(shí)間的變化，繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線，分析不同實(shí)驗(yàn)組腫瘤生長(zhǎng)速度的差異。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對(duì)裸鼠進(jìn)行頸椎脫臼處死，完整取出腫瘤組織、肺組織、肝組織等，進(jìn)行病理切片制作。采用蘇木精-伊紅（HE）染色法對(duì)切片進(jìn)行染色，在顯微鏡下觀察腫瘤組織的病理形態(tài)，判斷腫瘤的浸潤(rùn)情況；觀察肺組織和肝組織中是否有腫瘤轉(zhuǎn)移灶，計(jì)算腫瘤轉(zhuǎn)移率。轉(zhuǎn)移率（%）=（轉(zhuǎn)移灶陽性裸鼠數(shù)/總裸鼠數(shù)）×100%。將腫瘤組織制成單細(xì)胞懸液，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其中CD4+T細(xì)胞亞群（Th1、Th2、Th17、Treg）的比例。具體操作如下：取腫瘤組織約50mg，剪碎后加入0.25%胰蛋白酶和0.02%EDTA消化液，37℃消化20-30分鐘，期間輕輕振蕩。消化結(jié)束后，加入含10%FBS的RPMI1640培養(yǎng)基終止消化，用70μm細(xì)胞篩過濾，收集單細(xì)胞懸液。將單細(xì)胞懸液離心，棄上清，加入PBS洗滌2次。然后加入熒光標(biāo)記的抗CD4、抗IFN-γ、抗IL-4、抗IL-17和抗Foxp3抗體，室溫避光孵育30分鐘。孵育結(jié)束后，用PBS洗滌2次，重懸于500μlPBS中，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，分析不同實(shí)驗(yàn)組腫瘤組織中CD4+T細(xì)胞亞群的變化。取腫瘤組織進(jìn)行免疫組化染色，檢測(cè)免疫細(xì)胞浸潤(rùn)情況。將腫瘤組織制成石蠟切片，脫蠟、水化后，采用抗原修復(fù)液進(jìn)行抗原修復(fù)。用3%過氧化氫溶液阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性，然后用正常山羊血清封閉。分別加入抗CD3、抗CD8、抗CD45等免疫細(xì)胞標(biāo)志物的一抗，4℃孵育過夜。次日，用PBS沖洗切片3次，每次5分鐘。加入相應(yīng)的二抗，室溫孵育30分鐘。再次用PBS沖洗切片后，用DAB顯色液顯色，蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，脫水、透明后，用中性樹膠封片。在顯微鏡下觀察免疫細(xì)胞在腫瘤組織中的浸潤(rùn)情況，計(jì)數(shù)浸潤(rùn)的免疫細(xì)胞數(shù)量。4.3.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析腫瘤生長(zhǎng)曲線顯示，與對(duì)照組相比，Th1細(xì)胞失衡組腫瘤體積在接種后第10天開始顯著增大（P<0.05），至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，腫瘤體積達(dá)到（[具體數(shù)值16]±[標(biāo)準(zhǔn)差41]）mm3，明顯大于對(duì)照組的（[具體數(shù)值17]±[標(biāo)準(zhǔn)差42]）mm3。這表明抑制Th1細(xì)胞功能后，腫瘤生長(zhǎng)加速，說明Th1細(xì)胞在抑制宮頸癌生長(zhǎng)中發(fā)揮重要作用，Th1細(xì)胞失衡會(huì)促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。Th2細(xì)胞失衡組腫瘤體積在接種后第7天開始顯著大于對(duì)照組（P<0.05），實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)腫瘤體積為（[具體數(shù)值18]±[標(biāo)準(zhǔn)差43]）mm3。提示Th2細(xì)胞極化增強(qiáng)可促進(jìn)宮頸癌的生長(zhǎng)，Th2細(xì)胞失衡有利于腫瘤的進(jìn)展。Th17細(xì)胞失衡組腫瘤體積在接種后第12天開始明顯大于對(duì)照組（P<0.05），實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)腫瘤體積達(dá)到（[具體數(shù)值19]±[標(biāo)準(zhǔn)差44]）mm3。表明Th17細(xì)胞過度活化會(huì)促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)，Th17細(xì)胞失衡在宮頸癌發(fā)展中起促進(jìn)作用。Treg細(xì)胞失衡組腫瘤體積在接種后第15天開始顯著小于對(duì)照組（P<0.05），實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)腫瘤體積為（[具體數(shù)值20]±[標(biāo)準(zhǔn)差45]）mm3。說明清除部分Treg細(xì)胞后，腫瘤生長(zhǎng)受到抑制，Treg細(xì)胞失衡可抑制腫瘤的發(fā)展，Treg細(xì)胞在維持腫瘤免疫抑制微環(huán)境中起重要作用。在腫瘤轉(zhuǎn)移方面，對(duì)照組肺轉(zhuǎn)移率為（[具體百分比9]）%，肝轉(zhuǎn)移率為（[具體百分比10]）%。Th1細(xì)胞失衡組肺轉(zhuǎn)移率升高至（[具體百分比11]）%，肝轉(zhuǎn)移率升高至（[具體百分比12]）%，與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Th2細(xì)胞失衡組肺轉(zhuǎn)移率為（[具體百分比13]）%，肝轉(zhuǎn)移率為（[具體百分比14]）%，也顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。Th17細(xì)胞失衡組肺轉(zhuǎn)移率為（[具體百分比15]）%，肝轉(zhuǎn)移率為（[具體百分比16]）%，同樣高于對(duì)照組（P<0.05）。而Treg細(xì)胞失衡組肺轉(zhuǎn)移率降低至（[具體百分比17]）%，肝轉(zhuǎn)移率降低至（[具體百分比18]）%，與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這表明Th1、Th2和Th17細(xì)胞失衡均促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移，而Treg細(xì)胞失衡抑制腫瘤轉(zhuǎn)移。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示，Th1細(xì)胞失衡組腫瘤組織中Th1細(xì)胞比例為（[具體數(shù)值21]±[標(biāo)準(zhǔn)差46]）%，顯著低于對(duì)照組的（[具體數(shù)值22]±[標(biāo)準(zhǔn)差47]）%（P<0.05），Th2細(xì)胞比例為（[具體數(shù)值23]±[標(biāo)準(zhǔn)差48]）%，高于對(duì)照組（P<0.05）。Th2細(xì)胞失衡組Th2細(xì)胞比例為（[具體數(shù)值24]±[標(biāo)準(zhǔn)差49]）%，顯著高于對(duì)照組（P<0.05），Th1細(xì)胞比例為（[具體數(shù)值25]±[標(biāo)準(zhǔn)差50]）%，低于對(duì)照組（P<0.05）。Th17細(xì)胞失衡組Th17細(xì)胞比例為（[具體數(shù)值26]±[標(biāo)準(zhǔn)差51]）%，顯著高于對(duì)照組的（[具體數(shù)值27]±[標(biāo)準(zhǔn)差52]）%（P<0.05）。Treg細(xì)胞失衡組Treg細(xì)胞比例為（[具體數(shù)值28]±[標(biāo)準(zhǔn)差53]）%，顯著低于對(duì)照組的（[具體數(shù)值29]±[標(biāo)準(zhǔn)差54]）%（P<0.05）。這些結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了通過干預(yù)措施成功誘導(dǎo)了CD4+T細(xì)胞亞群的失衡。免疫組化結(jié)果顯示，Th1細(xì)胞失衡組腫瘤組織中CD3+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)量明顯減少，CD45+免疫細(xì)胞浸潤(rùn)也顯著降低。Th2細(xì)胞失衡組腫瘤組織中CD3+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)量同樣減少，CD45+免疫細(xì)胞浸潤(rùn)降低。Th17細(xì)胞失衡組CD3+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)量略有減少，CD45+免疫細(xì)胞浸潤(rùn)也有所降低。Treg細(xì)胞失衡組腫瘤組織中CD3+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)量增加，CD45+免疫細(xì)胞浸潤(rùn)顯著升高。這表明Th1、Th2和Th17細(xì)胞失衡抑制免疫細(xì)胞浸潤(rùn)，而Treg細(xì)胞失衡促進(jìn)免疫細(xì)胞浸潤(rùn)，進(jìn)一步說明了CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)對(duì)腫瘤免疫微環(huán)境的影響。綜上所述，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果有力地驗(yàn)證了CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)與宮頸癌發(fā)生發(fā)展的密切關(guān)系。Th1、Th2和Th17細(xì)胞失衡促進(jìn)宮頸癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，抑制免疫細(xì)胞浸潤(rùn)；Treg細(xì)胞失衡則抑制宮頸癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，促進(jìn)免疫細(xì)胞浸潤(rùn)。這些結(jié)果為深入理解CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)在宮頸癌發(fā)病機(jī)制中的作用提供了重要的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。五、CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)影響宮頸癌發(fā)展的機(jī)制探討5.1免疫逃逸機(jī)制在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程中，免疫逃逸是腫瘤細(xì)胞得以生存和增殖的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，而CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)在其中發(fā)揮著重要作用。Treg細(xì)胞作為具有免疫抑制功能的細(xì)胞亞群，在宮頸癌患者體內(nèi)數(shù)量顯著增加，且與腫瘤的分期、分級(jí)密切相關(guān)。Treg細(xì)胞主要通過分泌抑制性細(xì)胞因子來抑制免疫反應(yīng)。IL-10是Treg細(xì)胞分泌的重要抑制性細(xì)胞因子之一，它能夠抑制抗原呈遞細(xì)胞（APC）的活性，減少其對(duì)T細(xì)胞的激活作用。具體而言，IL-10可降低APC表面共刺激分子（如CD80、CD86）的表達(dá)，使APC無法有效地將抗原信息傳遞給T細(xì)胞，從而抑制T細(xì)胞的活化和增殖。Treg細(xì)胞分泌的TGF-β也具有強(qiáng)大的免疫抑制作用，它可以抑制效應(yīng)T細(xì)胞（如Th1、Th2、Th17細(xì)胞以及CD8+T細(xì)胞）的增殖和功能。TGF-β能夠抑制Th1細(xì)胞分泌IFN-γ，削弱細(xì)胞免疫功能；抑制Th2細(xì)胞分泌IL-4等細(xì)胞因子，影響體液免疫；抑制Th17細(xì)胞分泌IL-17，減少炎癥反應(yīng)。TGF-β還能抑制CD8+T細(xì)胞的殺傷活性，使腫瘤細(xì)胞逃脫CD8+T細(xì)胞的攻擊。Treg細(xì)胞還可通過細(xì)胞接觸依賴的方式直接作用于效應(yīng)T細(xì)胞，抑制其活化和增殖。Treg細(xì)胞表面表達(dá)的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（CTLA-4）能夠與APC表面的B7分子結(jié)合，阻斷T細(xì)胞活化所需的共刺激信號(hào)，從而抑制效應(yīng)T細(xì)胞的功能。Th1/Th2失衡也是導(dǎo)致宮頸癌免疫逃逸的重要因素。在正常免疫狀態(tài)下，Th1/Th2細(xì)胞相互制衡，維持免疫平衡。然而，在宮頸癌患者中，Th1細(xì)胞功能受到抑制，而Th2細(xì)胞相對(duì)活躍，導(dǎo)致Th1/Th2失衡。Th1細(xì)胞主要介導(dǎo)細(xì)胞免疫，其分泌的IFN-γ能夠激活巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞，增強(qiáng)它們對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷能力。同時(shí)，IFN-γ還能促進(jìn)MHC分子的表達(dá)，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞抗原的呈遞，使腫瘤細(xì)胞更容易被免疫細(xì)胞識(shí)別和攻擊。當(dāng)Th1細(xì)胞功能低下時(shí)，細(xì)胞免疫功能顯著減弱，機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)視和清除能力下降。而Th2細(xì)胞主要介導(dǎo)體液免疫，其分泌的IL-4、IL-5等細(xì)胞因子在體液免疫中發(fā)揮重要作用。但在Th1/Th2失衡的情況下，Th2細(xì)胞過度活化，其分泌的細(xì)胞因子會(huì)抑制Th1細(xì)胞的功能。IL-4可抑制Th1細(xì)胞分泌IFN-γ，使Th1細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫功能受到抑制。這種Th1/Th2失衡導(dǎo)致機(jī)體的免疫應(yīng)答向體液免疫傾斜，細(xì)胞免疫功能被削弱，使得腫瘤細(xì)胞更容易逃脫免疫監(jiān)視。免疫檢查點(diǎn)分子的異常表達(dá)在宮頸癌免疫逃逸中也起著關(guān)鍵作用。程序性死亡受體1（PD-1）及其配體程序性死亡配體1（PD-L1）是重要的免疫檢查點(diǎn)分子。在正常生理狀態(tài)下，PD-1/PD-L1通路能夠調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答，防止過度免疫反應(yīng)對(duì)機(jī)體造成損傷。然而，在宮頸癌中，腫瘤細(xì)胞常高表達(dá)PD-L1，它可以與T細(xì)胞表面的PD-1結(jié)合，抑制T細(xì)胞的活化、增殖和細(xì)胞因子分泌，從而抑制T細(xì)胞的免疫功能。當(dāng)PD-L1與PD-1結(jié)合后，會(huì)激活T細(xì)胞內(nèi)的抑制性信號(hào)通路，如Src同源2結(jié)構(gòu)域蛋白酪氨酸磷酸酶-2（SHP-2）信號(hào)通路，使T細(xì)胞的活化信號(hào)被阻斷，導(dǎo)致T細(xì)胞功能耗竭，無法有效地殺傷腫瘤細(xì)胞。細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（CTLA-4）也在免疫逃逸中發(fā)揮作用。CTLA-4與B7分子具有高親和力，它可以競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合APC表面的B7分子，阻斷T細(xì)胞活化所需的共刺激信號(hào)，抑制T細(xì)胞的活化和增殖。在宮頸癌患者中，Treg細(xì)胞表面的CTLA-4表達(dá)上調(diào)，進(jìn)一步增強(qiáng)了對(duì)免疫反應(yīng)的抑制作用，促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸。5.2炎癥微環(huán)境的作用炎癥微環(huán)境在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中扮演著至關(guān)重要的角色，而CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)所引發(fā)的炎癥反應(yīng)，與宮頸癌的發(fā)展緊密相關(guān)。Th17細(xì)胞作為CD4+T細(xì)胞的重要亞群之一，在炎癥微環(huán)境的形成中發(fā)揮著核心作用。當(dāng)Th17細(xì)胞被激活后，會(huì)大量分泌IL-17等細(xì)胞因子。IL-17具有強(qiáng)大的促炎活性，它能夠作用于多種細(xì)胞，如上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等。在宮頸局部微環(huán)境中，IL-17刺激上皮細(xì)胞產(chǎn)生趨化因子，如CXCL8（也稱為IL-8）。CXCL8是一種強(qiáng)效的中性粒細(xì)胞趨化因子，它能夠吸引大量中性粒細(xì)胞聚集到炎癥部位。中性粒細(xì)胞被招募后，會(huì)釋放活性氧（ROS）和蛋白酶等物質(zhì)，這些物質(zhì)雖然在正常情況下有助于清除病原體，但在持續(xù)的炎癥狀態(tài)下，會(huì)對(duì)宮頸組織造成損傷，促進(jìn)炎癥的進(jìn)一步發(fā)展。IL-17還能刺激內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子，如細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）和血管細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1），增強(qiáng)白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，使得更多的免疫細(xì)胞能夠遷移到炎癥部位，加劇炎癥反應(yīng)。在宮頸癌患者中，這種由Th17細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)與腫瘤的進(jìn)展密切相關(guān)。隨著腫瘤的發(fā)展，炎癥微環(huán)境中的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)發(fā)生紊亂，更多的促炎細(xì)胞因子被釋放，形成一個(gè)惡性循環(huán)，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲。IL-6是一種重要的促炎細(xì)胞因子，在宮頸癌患者的炎癥微環(huán)境中，IL-6的表達(dá)顯著升高。IL-6可通過激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）信號(hào)通路，促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的增殖和存活。在體外實(shí)驗(yàn)中，用IL-6處理宮頸癌細(xì)胞系，發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞的增殖能力明顯增強(qiáng)，且抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)上調(diào)，說明IL-6能夠抑制宮頸癌細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)其存活。IL-6還能誘導(dǎo)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過程，使宮頸癌細(xì)胞獲得更強(qiáng)的遷移和侵襲能力。在EMT過程中，上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-鈣黏蛋白表達(dá)下調(diào)，間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物N-鈣黏蛋白和波形蛋白表達(dá)上調(diào)，細(xì)胞形態(tài)也從上皮樣轉(zhuǎn)變?yōu)殚g質(zhì)樣，從而更容易突破基底膜，發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移。炎癥微環(huán)境還能招募免疫抑制細(xì)胞，進(jìn)一步促進(jìn)宮頸癌的發(fā)展。髓源性抑制細(xì)胞（MDSC）是一類具有免疫抑制功能的細(xì)胞群體，在炎癥微環(huán)境中，趨化因子如CCL2、CCL5等會(huì)吸引MDSC聚集到腫瘤部位。MDSC通過多種機(jī)制抑制免疫細(xì)胞的功能，它可以通過精氨酸酶-1（ARG1）和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）消耗L-精氨酸，導(dǎo)致T細(xì)胞受體（TCR）ζ鏈表達(dá)下調(diào)，抑制T細(xì)胞的活化和增殖。MDSC還能分泌TGF-β和IL-10等抑制性細(xì)胞因子，抑制Th1和Th17細(xì)胞的功能，促進(jìn)Treg細(xì)胞的分化和增殖，從而營(yíng)造一個(gè)有利于腫瘤生長(zhǎng)的免疫抑制微環(huán)境。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAM）也是炎癥微環(huán)境中的重要免疫抑制細(xì)胞。在炎癥因子的作用下，單核細(xì)胞被招募到腫瘤部位并分化為TAM。TAM可分為M1型和M2型，M1型巨噬細(xì)胞具有抗腫瘤活性，而在炎癥微環(huán)境中，TAM大多極化為M2型。M2型TAM通過分泌TGF-β、IL-10等抑制性細(xì)胞因子，抑制T細(xì)胞和NK細(xì)胞的活性，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和免疫逃逸。M2型TAM還能通過分泌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）等促進(jìn)腫瘤血管生成，為腫瘤細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)和氧氣，支持腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。5.3對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程中，對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力產(chǎn)生著深遠(yuǎn)影響，其作用機(jī)制涉及細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)、信號(hào)通路以及細(xì)胞間的相互作用等多個(gè)層面。Th1細(xì)胞在正常情況下能夠通過分泌IFN-γ等細(xì)胞因子，有效抑制宮頸癌細(xì)胞的增殖。IFN-γ可以激活JAK-STAT信號(hào)通路，誘導(dǎo)細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑（CKIs）如p21和p27的表達(dá)，使宮頸癌細(xì)胞停滯于G1期，從而抑制細(xì)胞增殖。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，將Th1細(xì)胞與宮頸癌細(xì)胞共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞的增殖能力明顯受到抑制，細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)發(fā)生改變，證實(shí)了Th1細(xì)胞對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖的抑制作用。當(dāng)CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)，Th1細(xì)胞功能受損時(shí)，這種抑制作用減弱，導(dǎo)致宮頸癌細(xì)胞的增殖失去有效控制，腫瘤細(xì)胞得以快速增殖。Th2細(xì)胞則通過分泌IL-4、IL-5等細(xì)胞因子，促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的增殖。IL-4可以激活PI3K-Akt信號(hào)通路，上調(diào)細(xì)胞周期蛋白D1的表達(dá)，促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，加速細(xì)胞增殖。IL-5能夠促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞分泌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF），VEGF不僅可以促進(jìn)腫瘤血管生成，為腫瘤細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)，還能直接作用于宮頸癌細(xì)胞，促進(jìn)其增殖。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，給予宮頸癌荷瘤小鼠IL-4刺激，發(fā)現(xiàn)腫瘤體積明顯增大，癌細(xì)胞增殖活性增強(qiáng)，表明Th2細(xì)胞失衡會(huì)促進(jìn)宮頸癌的發(fā)展。Th17細(xì)胞分泌的IL-17在促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞遷移和侵襲方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。IL-17可以誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞表達(dá)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs），如MMP-2和MMP-9，這些酶能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)，破壞基底膜的完整性，從而為癌細(xì)胞的遷移和侵襲創(chuàng)造條件。IL-17還能通過激活NF-κB信號(hào)通路，上調(diào)細(xì)胞黏附分子如E-鈣黏蛋白和N-鈣黏蛋白的表達(dá)，增強(qiáng)癌細(xì)胞與周圍組織的黏附能力，促進(jìn)癌細(xì)胞的遷移和侵襲。臨床研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌患者腫瘤組織中Th17細(xì)胞浸潤(rùn)程度與腫瘤的侵襲深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，Th17細(xì)胞比例越高，腫瘤的侵襲性越強(qiáng)。Treg細(xì)胞雖然不直接作用于宮頸癌細(xì)胞，但通過抑制免疫細(xì)胞的功能，間接促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。Treg細(xì)胞可以抑制CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的活性，使它們無法有效地殺傷腫瘤細(xì)胞。Treg細(xì)胞還能抑制Th1和Th17細(xì)胞的功能，削弱機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。在腫瘤微環(huán)境中，Treg細(xì)胞分泌的抑制性細(xì)胞因子如IL-10和TGF-β，不僅抑制免疫細(xì)胞的活化和增殖，還能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞分泌VEGF等促血管生成因子，為腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移提供有利條件。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，去除部分Treg細(xì)胞后，宮頸癌荷瘤小鼠的腫瘤生長(zhǎng)受到抑制，腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力也明顯降低。六、基于CD4+T細(xì)胞平衡調(diào)控的宮頸癌治療策略6.1