Twist、E-cadherin和P53在子宮頸鱗癌中的表達(dá)特征與協(xié)同機(jī)制研究

Twist、E-cadherin和P53在子宮頸鱗癌中的表達(dá)特征與協(xié)同機(jī)制研究一、引言1.1研究背景與目的1.1.1研究背景子宮頸癌作為全球范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅女性健康的重大公共衛(wèi)生問(wèn)題，是女性生殖系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在女性癌癥相關(guān)死亡原因中占據(jù)重要地位。據(jù)世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥負(fù)擔(dān)數(shù)據(jù)顯示，2020年全球?qū)m頸癌新發(fā)病例約60.4萬(wàn)例，死亡病例約34.2萬(wàn)例，嚴(yán)重影響著廣大女性的生活質(zhì)量與生命安全。其中，子宮頸鱗癌是子宮頸癌最主要的組織學(xué)類型，約占子宮頸癌的75%-80%，其發(fā)病機(jī)制涉及多個(gè)復(fù)雜的分子生物學(xué)過(guò)程。近年來(lái)，盡管在子宮頸癌的篩查、診斷和治療方面取得了一定進(jìn)展，如HPV疫苗的應(yīng)用、宮頸細(xì)胞學(xué)篩查技術(shù)的不斷改進(jìn)以及手術(shù)、放療、化療等綜合治療手段的完善，使得子宮頸癌的早期診斷率有所提高，患者的生存率也得到了一定程度的改善。然而，對(duì)于中晚期子宮頸鱗癌患者，尤其是發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者，其治療效果仍不理想，預(yù)后較差，復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者死亡的主要原因。因此，深入探究子宮頸鱗癌的發(fā)病機(jī)制，尋找有效的生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，對(duì)于提高子宮頸鱗癌的早期診斷水平、改善患者預(yù)后具有重要的臨床意義。目前，研究發(fā)現(xiàn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因素、多步驟的復(fù)雜過(guò)程，涉及多個(gè)基因和信號(hào)通路的異常改變。Twist、E-cadherin和P53作為與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的分子，在子宮頸鱗癌的發(fā)病機(jī)制中可能發(fā)揮著關(guān)鍵作用。Twist是一種堿性螺旋-環(huán)-螺旋（bHLH）轉(zhuǎn)錄因子，在胚胎發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，參與中胚層的形成和器官的發(fā)育。近年來(lái)研究表明，Twist在多種惡性腫瘤中異常表達(dá)，如乳腺癌、肺癌、結(jié)直腸癌等，并與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移、上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）以及腫瘤干細(xì)胞特性密切相關(guān)。在子宮頸鱗癌中，Twist的異常表達(dá)可能通過(guò)調(diào)控相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，但其具體作用機(jī)制尚不完全清楚。E-cadherin是一種重要的細(xì)胞黏附分子，主要表達(dá)于上皮細(xì)胞表面，通過(guò)介導(dǎo)細(xì)胞間的黏附作用，維持上皮細(xì)胞的極性和組織結(jié)構(gòu)完整性。在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，E-cadherin的表達(dá)下調(diào)或功能缺失是EMT發(fā)生的重要標(biāo)志之一，導(dǎo)致癌細(xì)胞間的黏附力下降，從而使癌細(xì)胞易于從原發(fā)灶脫落，獲得遷移和侵襲能力，促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。在子宮頸鱗癌中，E-cadherin的表達(dá)異常與腫瘤的臨床分期、病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)，但其表達(dá)調(diào)控機(jī)制以及與其他分子之間的相互作用關(guān)系仍有待進(jìn)一步深入研究。P53基因是一種重要的抑癌基因，在細(xì)胞周期調(diào)控、DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞凋亡等過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。正常情況下，P53蛋白通過(guò)監(jiān)測(cè)細(xì)胞DNA的完整性，當(dāng)細(xì)胞受到各種應(yīng)激刺激如DNA損傷、缺氧等時(shí)，P53蛋白被激活，誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯，使細(xì)胞有足夠的時(shí)間修復(fù)損傷的DNA；若DNA損傷無(wú)法修復(fù)，則誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，從而防止細(xì)胞發(fā)生癌變。然而，在大多數(shù)惡性腫瘤中，包括子宮頸鱗癌，P53基因常發(fā)生突變或缺失，導(dǎo)致P53蛋白功能失活，無(wú)法發(fā)揮正常的抑癌作用，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。研究表明，P53基因突變與子宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后密切相關(guān)，但不同突變類型對(duì)子宮頸鱗癌生物學(xué)行為的影響以及P53與其他分子之間的相互作用網(wǎng)絡(luò)仍有待進(jìn)一步闡明。綜上所述，Twist、E-cadherin和P53在子宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中可能起著至關(guān)重要的作用，深入研究它們?cè)谧訉m頸鱗癌組織中的表達(dá)情況及其相互關(guān)系，以及與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性，對(duì)于揭示子宮頸鱗癌的發(fā)病機(jī)制、尋找新的診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)具有重要的理論和實(shí)際意義。1.1.2研究目的本研究旨在通過(guò)檢測(cè)Twist、E-cadherin和P53在子宮頸鱗癌組織中的表達(dá)情況，分析它們與子宮頸鱗癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，探討三者在子宮頸鱗癌發(fā)生發(fā)展中的相互作用機(jī)制，為子宮頸鱗癌的早期診斷、預(yù)后評(píng)估和靶向治療提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。具體研究目的如下：運(yùn)用免疫組織化學(xué)等技術(shù)檢測(cè)Twist、E-cadherin和P53蛋白在子宮頸鱗癌組織、癌旁組織及正常宮頸組織中的表達(dá)水平，比較三者在不同組織中的表達(dá)差異。分析Twist、E-cadherin和P53蛋白表達(dá)與子宮頸鱗癌患者的年齡、臨床分期、病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性，評(píng)估它們對(duì)子宮頸鱗癌患者預(yù)后的影響。探討Twist、E-cadherin和P53之間的相互作用關(guān)系，研究Twist是否通過(guò)調(diào)控E-cadherin和P53的表達(dá)，參與子宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，為進(jìn)一步揭示子宮頸鱗癌的發(fā)病機(jī)制提供新的線索。1.2國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀1.2.1Twist與子宮頸鱗癌的研究進(jìn)展Twist作為一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，在胚胎發(fā)育中扮演關(guān)鍵角色，其異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。近年來(lái)，關(guān)于Twist在子宮頸鱗癌中的研究逐漸增多，為揭示子宮頸鱗癌的發(fā)病機(jī)制提供了新的視角。在子宮頸鱗癌的研究中，國(guó)內(nèi)外學(xué)者發(fā)現(xiàn)Twist在子宮頸鱗癌組織中的表達(dá)明顯高于正常宮頸組織和宮頸上皮內(nèi)瘤變組織。何春年等人的研究通過(guò)SP法檢測(cè)Twist在正常子宮頸鱗狀上皮、CIN和子宮頸鱗癌中的表達(dá)，結(jié)果顯示Twist在正常組、CIN1級(jí)組、CIN2級(jí)組、CIN3級(jí)組及SCC組的表達(dá)陽(yáng)性率分別為0、10%、42.3%、48.3%、52.5%，表明Twist的表達(dá)隨著病變程度的加重而逐漸升高。哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院的研究者通過(guò)免疫組化檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)瘤樣病變（HSIL）和宮頸鱗狀細(xì)胞癌（CSCC）中，Twist1的表達(dá)顯著上調(diào)，且其表達(dá)水平與左室肥厚指數(shù)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織學(xué)分級(jí)有關(guān)。這些研究結(jié)果表明Twist可能參與了子宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，其高表達(dá)可能促進(jìn)了癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。關(guān)于Twist促進(jìn)子宮頸鱗癌發(fā)展的機(jī)制，目前研究認(rèn)為主要與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過(guò)程相關(guān)。Twist作為bHLH家族的成員，能夠作用于E-box序列起始因子，促使產(chǎn)生EMT過(guò)程，導(dǎo)致E-cadherin的轉(zhuǎn)錄及合成受到干擾。E-cadherin是維持上皮細(xì)胞極性和組織結(jié)構(gòu)完整性的重要細(xì)胞黏附分子，其表達(dá)下調(diào)或功能缺失是EMT發(fā)生的重要標(biāo)志之一。當(dāng)E-cadherin表達(dá)受到抑制時(shí)，癌細(xì)胞間的黏附力下降，從而使癌細(xì)胞易于從原發(fā)灶脫落，獲得遷移和侵襲能力，促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。此外，Twist還可能通過(guò)調(diào)節(jié)其他相關(guān)基因的表達(dá)，影響細(xì)胞周期、凋亡等生物學(xué)過(guò)程，進(jìn)而促進(jìn)子宮頸鱗癌的發(fā)展。然而，目前對(duì)于Twist在子宮頸鱗癌中的研究仍存在一些不足之處。一方面，雖然已經(jīng)明確Twist在子宮頸鱗癌組織中高表達(dá)且與腫瘤的惡性行為相關(guān)，但其具體的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和分子機(jī)制尚未完全闡明。Twist如何與其他信號(hào)通路相互作用，以及在不同臨床病理特征的子宮頸鱗癌中其作用機(jī)制是否存在差異，仍有待進(jìn)一步深入研究。另一方面，目前的研究多集中在Twist的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性分析，對(duì)于如何將Twist作為治療靶點(diǎn)應(yīng)用于子宮頸鱗癌的臨床治療，還需要更多的基礎(chǔ)研究和臨床試驗(yàn)來(lái)探索有效的干預(yù)措施。1.2.2E-cadherin與子宮頸鱗癌的研究進(jìn)展E-cadherin作為一種重要的細(xì)胞黏附分子，在維持上皮細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)和功能中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。其表達(dá)異常與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，在子宮頸鱗癌的研究領(lǐng)域也受到了廣泛關(guān)注。眾多研究表明，E-cadherin在子宮頸鱗癌組織中的表達(dá)顯著低于正常宮頸組織和宮頸上皮內(nèi)瘤變組織。顧麗琴等人采用免疫組化EnVision兩步法檢測(cè)E-cadherin在子宮頸炎、CIN和子宮頸鱗癌組織中的表達(dá)，結(jié)果顯示CIN及子宮頸鱗癌組織中E-cadherin陽(yáng)性率明顯低于子宮頸炎。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，E-cadherin的表達(dá)與子宮頸鱗癌的臨床分期、病理分級(jí)密切相關(guān)。在臨床分期較晚、病理分級(jí)較高的子宮頸鱗癌組織中，E-cadherin的表達(dá)水平更低。這表明E-cadherin表達(dá)下調(diào)可能促進(jìn)了子宮頸鱗癌的進(jìn)展，使其更容易發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移。E-cadherin表達(dá)下調(diào)促進(jìn)子宮頸鱗癌發(fā)展的機(jī)制主要與EMT過(guò)程密切相關(guān)。在EMT過(guò)程中，上皮細(xì)胞失去極性和細(xì)胞間的黏附能力，獲得間質(zhì)細(xì)胞的特性，從而具備更強(qiáng)的遷移和侵襲能力。E-cadherin表達(dá)的降低是EMT發(fā)生的關(guān)鍵事件之一，它使得癌細(xì)胞間的連接變得松散，有利于癌細(xì)胞脫離原發(fā)灶，進(jìn)入周圍組織和血管，進(jìn)而發(fā)生轉(zhuǎn)移。此外，E-cadherin還可以通過(guò)與其他分子相互作用，影響細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)通路，如Wnt/β-catenin信號(hào)通路等，進(jìn)一步調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化和凋亡等生物學(xué)過(guò)程，參與子宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展。盡管目前對(duì)E-cadherin在子宮頸鱗癌中的研究取得了一定進(jìn)展，但仍存在一些問(wèn)題有待解決。首先，E-cadherin表達(dá)調(diào)控的具體機(jī)制尚未完全明確。雖然已知Twist等轉(zhuǎn)錄因子可以通過(guò)抑制E-cadherin的轉(zhuǎn)錄來(lái)下調(diào)其表達(dá)，但在子宮頸鱗癌中，是否還存在其他因素參與E-cadherin表達(dá)的調(diào)控，以及這些因素之間如何相互作用，還需要進(jìn)一步深入研究。其次，目前關(guān)于E-cadherin作為子宮頸鱗癌診斷和預(yù)后標(biāo)志物的臨床應(yīng)用價(jià)值，還需要更多大規(guī)模、多中心的研究來(lái)驗(yàn)證和評(píng)估。此外，如何通過(guò)干預(yù)E-cadherin的表達(dá)或功能來(lái)開(kāi)發(fā)新的治療策略，也是未來(lái)研究的重點(diǎn)方向之一。1.2.3P53與子宮頸鱗癌的研究進(jìn)展P53基因作為一種重要的抑癌基因，在細(xì)胞周期調(diào)控、DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞凋亡等過(guò)程中發(fā)揮著核心作用。其功能異常與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，在子宮頸鱗癌的研究中也具有重要地位。研究表明，在子宮頸鱗癌中，P53基因常發(fā)生突變或缺失，導(dǎo)致P53蛋白功能失活，無(wú)法正常發(fā)揮其抑癌作用。hpv基因分型與子宮頸鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的分子病理機(jī)制研究中指出，P53蛋白在正常宮頸組織中不表達(dá)，在子宮頸癌及其癌前病變中偶見(jiàn)表達(dá)。顧麗琴等人的研究也發(fā)現(xiàn)，子宮頸鱗癌組織中p53陽(yáng)性率顯著高于CIN及子宮頸炎。P53基因突變或缺失使得細(xì)胞對(duì)DNA損傷的修復(fù)能力下降，細(xì)胞周期調(diào)控紊亂，從而導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖和腫瘤的發(fā)生發(fā)展。不同類型的P53基因突變對(duì)子宮頸鱗癌的生物學(xué)行為和預(yù)后可能產(chǎn)生不同的影響。一些研究表明，某些特定的P53基因突變類型與子宮頸鱗癌的高侵襲性、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后相關(guān)。P53參與子宮頸鱗癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制較為復(fù)雜。正常情況下，當(dāng)細(xì)胞受到DNA損傷等應(yīng)激刺激時(shí)，P53蛋白被激活，通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯，使細(xì)胞有足夠的時(shí)間修復(fù)損傷的DNA；若DNA損傷無(wú)法修復(fù)，則P53蛋白會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，從而防止細(xì)胞發(fā)生癌變。然而，在子宮頸鱗癌中，由于P53基因的異常，這一正常的調(diào)控機(jī)制被破壞。此外，P53還可以通過(guò)調(diào)節(jié)其他相關(guān)基因的表達(dá)，影響細(xì)胞的代謝、免疫逃逸等過(guò)程，進(jìn)一步促進(jìn)子宮頸鱗癌的發(fā)展。目前關(guān)于P53在子宮頸鱗癌中的研究雖然取得了一定成果，但仍存在許多挑戰(zhàn)。一方面，對(duì)于P53基因突變的檢測(cè)方法和技術(shù)還需要進(jìn)一步優(yōu)化和標(biāo)準(zhǔn)化，以提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性和可靠性，為臨床診斷和治療提供更有力的依據(jù)。另一方面，如何針對(duì)P53基因異常開(kāi)發(fā)有效的治療策略，如基因治療、靶向藥物治療等，仍然是研究的難點(diǎn)和熱點(diǎn)。此外，P53與其他分子之間的相互作用網(wǎng)絡(luò)在子宮頸鱗癌中的具體作用機(jī)制還需要進(jìn)一步深入研究，以全面揭示子宮頸鱗癌的發(fā)病機(jī)制，為臨床治療提供更多的理論支持。1.3研究方法與創(chuàng)新點(diǎn)1.3.1研究方法標(biāo)本收集：收集[醫(yī)院名稱]在[具體時(shí)間段]內(nèi)手術(shù)切除的子宮頸鱗癌組織標(biāo)本[X]例，同時(shí)選取相應(yīng)的癌旁組織（距離癌組織邊緣≥2cm）標(biāo)本[X]例以及因其他良性疾病行子宮切除的正常宮頸組織標(biāo)本[X]例。所有標(biāo)本均經(jīng)病理確診，患者術(shù)前均未接受放療、化療或其他抗腫瘤治療。詳細(xì)記錄患者的年齡、臨床分期、病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理資料。免疫組織化學(xué)法：采用免疫組織化學(xué)EnVision法檢測(cè)Twist、E-cadherin和P53蛋白在子宮頸鱗癌組織、癌旁組織及正常宮頸組織中的表達(dá)。具體步驟如下：將石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，經(jīng)過(guò)抗原修復(fù)后，用3%過(guò)氧化氫溶液阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性，再滴加相應(yīng)的一抗（Twist、E-cadherin和P53抗體），4℃孵育過(guò)夜。次日，滴加二抗，室溫孵育30分鐘，然后用DAB顯色，蘇木精復(fù)染，脫水，透明，封片。以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果判斷：Twist蛋白主要定位于細(xì)胞核和/或細(xì)胞質(zhì)，E-cadherin蛋白主要定位于細(xì)胞膜，P53蛋白主要定位于細(xì)胞核。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占比例和染色強(qiáng)度進(jìn)行半定量分析，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性（-），10%-50%為弱陽(yáng)性（+），51%-80%為中度陽(yáng)性（++），＞80%為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：運(yùn)用SPSS[X]軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或率表示，組間比較采用x2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。1.3.2創(chuàng)新點(diǎn)多指標(biāo)聯(lián)合研究：目前關(guān)于Twist、E-cadherin和P53在子宮頸鱗癌中的研究多為單個(gè)指標(biāo)的分析，本研究將三者結(jié)合起來(lái)，探討它們?cè)谧訉m頸鱗癌發(fā)生發(fā)展中的相互作用關(guān)系，有助于更全面地揭示子宮頸鱗癌的發(fā)病機(jī)制，為臨床診斷和治療提供更豐富的理論依據(jù)。樣本的獨(dú)特性：收集了來(lái)自[醫(yī)院名稱]在[具體時(shí)間段]內(nèi)的大量子宮頸鱗癌組織標(biāo)本及相應(yīng)的癌旁組織、正常宮頸組織標(biāo)本，并詳細(xì)記錄了患者的臨床病理資料，樣本具有一定的地域特色和臨床代表性，能夠更準(zhǔn)確地反映當(dāng)?shù)刈訉m頸鱗癌患者的分子生物學(xué)特征。分析方法的創(chuàng)新性：運(yùn)用免疫組織化學(xué)法對(duì)Twist、E-cadherin和P53蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，并采用半定量分析方法，結(jié)合統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，深入探討三者與子宮頸鱗癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，以及它們之間的相互作用關(guān)系，使研究結(jié)果更具科學(xué)性和可靠性。這種多維度的分析方法在子宮頸鱗癌相關(guān)研究中具有一定的創(chuàng)新性。二、相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1Twist相關(guān)理論Twist基因作為一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，在生物的胚胎發(fā)育和腫瘤發(fā)生發(fā)展等過(guò)程中扮演著關(guān)鍵角色。人Twist基因定位于7p21.2，其結(jié)構(gòu)包含2個(gè)外顯子和1個(gè)內(nèi)含子。其中第1個(gè)外顯子長(zhǎng)度為772bp，涵蓋了整個(gè)編碼區(qū)域，內(nèi)含子長(zhǎng)538bp，最終轉(zhuǎn)錄形成的mRNA全長(zhǎng)1669bp，未修飾的Twist蛋白分子量約為20.9KD。Twist蛋白屬于堿性螺旋-環(huán)-螺旋（bHLH）轉(zhuǎn)錄因子家族成員，其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)賦予了它特殊的功能。在胚胎發(fā)育進(jìn)程中，Twist發(fā)揮著不可或缺的作用。它能夠參與中胚層的形成，促使胚胎細(xì)胞進(jìn)行分化和遷移，進(jìn)而塑造出各個(gè)器官和組織的雛形。例如，在神經(jīng)管閉合過(guò)程中，Twist基因的表達(dá)調(diào)控對(duì)于神經(jīng)管的正常發(fā)育至關(guān)重要，若其表達(dá)異常，可能導(dǎo)致神經(jīng)管畸形等先天性疾病的發(fā)生；在肢體發(fā)育階段，Twist參與調(diào)控肢體芽的形成和分化，影響肢體的正常生長(zhǎng)和形態(tài)構(gòu)建。近年來(lái)，越來(lái)越多的研究表明Twist在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵作用。在多種惡性腫瘤組織中，Twist基因呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)。在乳腺癌中，Twist的高表達(dá)與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移能力密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，Twist可以通過(guò)上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的表達(dá)，降解細(xì)胞外基質(zhì)，從而為癌細(xì)胞的遷移和侵襲創(chuàng)造條件。此外，Twist還能夠調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過(guò)程。在EMT過(guò)程中，上皮細(xì)胞失去極性和細(xì)胞間的黏附能力，獲得間質(zhì)細(xì)胞的特性，這一轉(zhuǎn)變使得癌細(xì)胞能夠突破上皮組織的限制，進(jìn)入周圍組織和血管，進(jìn)而發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。Twist作為bHLH家族的成員，能夠作用于E-box序列起始因子，干擾E-cadherin的轉(zhuǎn)錄及合成，導(dǎo)致E-cadherin表達(dá)下調(diào)，而E-cadherin是維持上皮細(xì)胞極性和組織結(jié)構(gòu)完整性的重要細(xì)胞黏附分子，其表達(dá)下調(diào)是EMT發(fā)生的重要標(biāo)志之一。除了在腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移方面發(fā)揮作用外，Twist還與腫瘤細(xì)胞的抗凋亡能力、腫瘤血管生成等密切相關(guān)。在抗凋亡方面，Twist可以通過(guò)調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，如抑制促凋亡基因Bax的表達(dá)，上調(diào)抗凋亡基因Bcl-2的表達(dá)，從而增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)凋亡信號(hào)的抵抗能力，使得腫瘤細(xì)胞能夠在惡劣的環(huán)境中存活和增殖。在腫瘤血管生成方面，Twist能夠促進(jìn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）等血管生成相關(guān)因子的表達(dá)，刺激內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，促進(jìn)腫瘤血管的生成，為腫瘤細(xì)胞提供充足的營(yíng)養(yǎng)和氧氣供應(yīng)，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和發(fā)展。綜上所述，Twist基因在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中具有多方面的作用，深入研究其作用機(jī)制對(duì)于腫瘤的診斷、治療和預(yù)后評(píng)估具有重要的意義。2.2E-cadherin相關(guān)理論E-cadherin即上皮鈣黏蛋白，是16號(hào)染色體長(zhǎng)臂上CDH1基因的產(chǎn)物，在維持上皮細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)和功能方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。其蛋白結(jié)構(gòu)包含5個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域、1個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域以及1個(gè)胞質(zhì)內(nèi)結(jié)構(gòu)域。每個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的N末端都存在calcium的結(jié)合位點(diǎn)，這些位點(diǎn)對(duì)于維持E-cadherin的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性以及其與其他細(xì)胞間的相互作用至關(guān)重要；而細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域的C末端則通過(guò)不同的catenin（α、β、γ、p120）與肌動(dòng)蛋白（actin）細(xì)胞骨架形成連接，進(jìn)而構(gòu)建成復(fù)雜的catenin-cadherin復(fù)合物，這一復(fù)合物是維持細(xì)胞-細(xì)胞黏附穩(wěn)定性的關(guān)鍵所在。在正常生理狀態(tài)下，E-cadherin主要表達(dá)于上皮細(xì)胞表面，通過(guò)介導(dǎo)細(xì)胞間的黏附作用，維持上皮細(xì)胞的極性和組織結(jié)構(gòu)完整性，使得上皮細(xì)胞緊密相連，形成有序的上皮組織。例如，在皮膚表皮、胃腸道上皮等組織中，E-cadherin的正常表達(dá)確保了上皮細(xì)胞層的緊密排列，有效防止外界病原體的入侵，同時(shí)也維持了組織的正常生理功能。此外，E-cadherin還與多種信號(hào)通路存在相互作用，如Wnt/β-catenin信號(hào)通路等，可間接發(fā)揮腫瘤抑制因子的作用。當(dāng)E-cadherin正常表達(dá)時(shí)，它能夠抑制Wnt信號(hào)通路的過(guò)度激活，維持細(xì)胞的正常增殖和分化狀態(tài)。然而，在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，E-cadherin的表達(dá)常常出現(xiàn)下調(diào)或缺失的情況，這一改變與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。以乳腺癌為例，在浸潤(rùn)性小葉癌中，E-cadherin表達(dá)缺失被認(rèn)為是早期致癌事件之一，會(huì)導(dǎo)致p120catenin在胞質(zhì)內(nèi)蓄積，進(jìn)而引發(fā)一系列不同效應(yīng)分子及通路的相互作用，如激活Rho/Rock信號(hào)通路，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)失巢凋亡的耐受，促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展。在子宮頸鱗癌中，大量研究表明E-cadherin表達(dá)下調(diào)或缺失同樣常見(jiàn)，使得癌細(xì)胞間的黏附力顯著下降，癌細(xì)胞更容易從原發(fā)灶脫落，獲得遷移和侵襲能力，從而促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。E-cadherin表達(dá)下調(diào)或缺失的機(jī)制較為復(fù)雜，主要包括以下幾個(gè)方面：一是CDH1基因突變，這是導(dǎo)致E-cadherin表達(dá)缺失的常見(jiàn)原因之一，在許多浸潤(rùn)性小葉癌中，可檢測(cè)到CDH1基因的體細(xì)胞性突變，且常伴有E-cadherin染色體位點(diǎn)的雜合性缺失；二是CDH1啟動(dòng)子超甲基化，某些組織中CDH1啟動(dòng)子區(qū)域的超甲基化會(huì)抑制基因的表達(dá)，從而導(dǎo)致E-cadherin表達(dá)降低，但關(guān)于浸潤(rùn)性小葉癌中CDH1啟動(dòng)子超甲基化所占比例的研究數(shù)據(jù)存在差異，這一機(jī)制仍有待進(jìn)一步深入研究；三是轉(zhuǎn)錄抑制和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）的刺激，在EMT過(guò)程中，相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子網(wǎng)絡(luò)會(huì)影響促進(jìn)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化、抑制上皮特征的相關(guān)基因表達(dá)，其中就包括對(duì)E-cadherin轉(zhuǎn)錄的抑制，導(dǎo)致其表達(dá)下調(diào)，進(jìn)而使上皮細(xì)胞失去極性和細(xì)胞間的黏附能力，獲得間質(zhì)細(xì)胞的特性，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲；四是異常糖基化，糖基化對(duì)于E-cadherin的折疊、轉(zhuǎn)運(yùn)以及在細(xì)胞膜上的穩(wěn)定性具有重要意義，無(wú)論是胞質(zhì)內(nèi)還是胞質(zhì)外的糖基化修飾受損，都可能影響E-cadherin的正常功能，導(dǎo)致其表達(dá)下調(diào)，促進(jìn)細(xì)胞的遷徙和轉(zhuǎn)移；五是酶裂解，多種酶可與E-cadherin細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域（N末端）相互作用，參與其蛋白水解過(guò)程，改變E-cadherin的表達(dá)模式，導(dǎo)致其異常表達(dá)或表達(dá)缺失。總之，E-cadherin在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制十分復(fù)雜，深入研究其調(diào)控機(jī)制對(duì)于腫瘤的防治具有重要意義。2.3P53相關(guān)理論P(yáng)53基因作為人體重要的抑癌基因，在細(xì)胞生命活動(dòng)中扮演著關(guān)鍵角色。該基因定位于人類染色體17p13.1，其編碼的P53蛋白由393個(gè)氨基酸組成，分子量約為53kDa，這也是P53名稱的由來(lái)。P53蛋白結(jié)構(gòu)包含多個(gè)功能結(jié)構(gòu)域，N端的轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域（TAD）負(fù)責(zé)與其他轉(zhuǎn)錄因子相互作用，從而啟動(dòng)下游基因的轉(zhuǎn)錄；DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（DBD）則能夠識(shí)別并結(jié)合特定的DNA序列，實(shí)現(xiàn)對(duì)基因表達(dá)的精準(zhǔn)調(diào)控；C端的寡聚化結(jié)構(gòu)域（OD）促使P53蛋白形成四聚體，增強(qiáng)其與DNA的結(jié)合能力，而調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)P53蛋白的活性和穩(wěn)定性。P53基因在細(xì)胞周期調(diào)控、DNA損傷修復(fù)以及細(xì)胞凋亡等過(guò)程中發(fā)揮著核心作用。當(dāng)細(xì)胞受到紫外線、化學(xué)物質(zhì)、病毒感染等各種應(yīng)激刺激導(dǎo)致DNA損傷時(shí)，P53蛋白被激活，其水平和活性迅速升高。激活后的P53蛋白通過(guò)與特定的DNA序列結(jié)合，啟動(dòng)一系列下游基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。在細(xì)胞周期調(diào)控方面，P53可以誘導(dǎo)細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑p21等基因的表達(dá)，p21能夠與細(xì)胞周期蛋白-細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶復(fù)合物結(jié)合，抑制其活性，從而使細(xì)胞周期停滯在G1期或G2期，為細(xì)胞提供足夠的時(shí)間來(lái)修復(fù)受損的DNA。若DNA損傷過(guò)于嚴(yán)重?zé)o法修復(fù)，P53則會(huì)激活促凋亡基因如Bax、PUMA等的表達(dá)，促使細(xì)胞發(fā)生凋亡，避免攜帶錯(cuò)誤遺傳信息的細(xì)胞繼續(xù)增殖，防止腫瘤的發(fā)生。此外，P53還參與細(xì)胞的代謝調(diào)節(jié)、衰老調(diào)控以及免疫監(jiān)視等過(guò)程，全方位維護(hù)細(xì)胞的正常生理功能和基因組的穩(wěn)定性。在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，P53基因的異常是極為常見(jiàn)的現(xiàn)象。超過(guò)50%的人類惡性腫瘤中都存在P53基因的突變，突變類型主要包括點(diǎn)突變、缺失突變和插入突變等，其中點(diǎn)突變最為常見(jiàn)。P53基因的突變會(huì)導(dǎo)致其編碼的P53蛋白結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生改變，無(wú)法正常發(fā)揮抑癌作用。例如，點(diǎn)突變可能導(dǎo)致P53蛋白的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域發(fā)生構(gòu)象變化，使其失去與DNA的結(jié)合能力，從而無(wú)法啟動(dòng)下游基因的轉(zhuǎn)錄，細(xì)胞周期調(diào)控和凋亡機(jī)制紊亂，細(xì)胞異常增殖，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生發(fā)展。不同類型的P53基因突變對(duì)腫瘤的生物學(xué)行為和預(yù)后有著不同程度的影響。一些特定的突變類型，如R175H、R248Q、R273H等熱點(diǎn)突變，與腫瘤的高侵襲性、轉(zhuǎn)移能力以及不良預(yù)后密切相關(guān)。這些突變不僅使P53蛋白喪失了正常的抑癌功能，還可能獲得一些新的促癌功能，如促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，抑制細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的耐藥性等。此外，P53基因的缺失或低表達(dá)同樣會(huì)削弱其對(duì)腫瘤的抑制作用，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞逃脫機(jī)體的監(jiān)控和抑制，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。因此，深入研究P53基因在腫瘤中的異常機(jī)制，對(duì)于腫瘤的早期診斷、治療和預(yù)后評(píng)估具有重要的臨床意義。三、材料與方法3.1實(shí)驗(yàn)材料宮頸組織樣本：收集[醫(yī)院名稱]在[具體時(shí)間段]內(nèi)手術(shù)切除的子宮頸鱗癌組織標(biāo)本[X]例，所有患者均經(jīng)術(shù)后病理確診為子宮頸鱗癌，且術(shù)前均未接受放療、化療或其他抗腫瘤治療。同時(shí)，選取相應(yīng)的癌旁組織（距離癌組織邊緣≥2cm）標(biāo)本[X]例以及因其他良性疾?。ㄈ缱訉m肌瘤、子宮腺肌病等）行子宮切除的正常宮頸組織標(biāo)本[X]例。詳細(xì)記錄患者的年齡、臨床分期（參照國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）2018分期標(biāo)準(zhǔn)）、病理分級(jí)（根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）標(biāo)準(zhǔn)分為高、中、低分化）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理資料。主要試劑：兔抗人Twist多克隆抗體、兔抗人E-cadherin多克隆抗體、兔抗人P53多克隆抗體均購(gòu)自[抗體供應(yīng)商名稱]；免疫組化EnVision試劑盒、DAB顯色試劑盒購(gòu)自[試劑盒供應(yīng)商名稱]；二甲苯、無(wú)水乙醇、蘇木精、伊紅等常規(guī)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純，購(gòu)自[試劑供應(yīng)商名稱]。主要儀器：石蠟切片機(jī)（型號(hào)：[具體型號(hào)]，品牌：[品牌名稱]）、輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)（型號(hào)：[具體型號(hào)]，品牌：[品牌名稱]）、攤片機(jī)（型號(hào)：[具體型號(hào)]，品牌：[品牌名稱]）、烤片機(jī)（型號(hào)：[具體型號(hào)]，品牌：[品牌名稱]）、光學(xué)顯微鏡（型號(hào)：[具體型號(hào)]，品牌：[品牌名稱]）、電子天平（型號(hào)：[具體型號(hào)]，品牌：[品牌名稱]）、移液器（型號(hào)：[具體型號(hào)]，品牌：[品牌名稱]）、微波爐（型號(hào)：[具體型號(hào)]，品牌：[品牌名稱]）、純水儀（型號(hào)：[具體型號(hào)]，品牌：[品牌名稱]）等。3.2實(shí)驗(yàn)方法3.2.1免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)步驟組織切片準(zhǔn)備：將收集的子宮頸鱗癌組織、癌旁組織及正常宮頸組織標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋，制成4μm厚的連續(xù)切片。將切片置于65℃烤箱中烘烤2小時(shí)，使切片與載玻片緊密黏附，隨后進(jìn)行脫蠟處理。將切片依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡10分鐘，以徹底脫去石蠟，再將切片依次經(jīng)過(guò)100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ浸泡5分鐘，進(jìn)行水化，最后將切片放入蒸餾水中清洗2分鐘。抗原修復(fù)：抗原修復(fù)是免疫組化實(shí)驗(yàn)中的關(guān)鍵步驟，其目的是解除切片過(guò)程中因組織處理導(dǎo)致的抗原部分被屏蔽或破壞，重新恢復(fù)抗原的抗體反應(yīng)活性。將水化后的切片放入盛有枸櫞酸鹽緩沖液（pH6.0）的修復(fù)盒中，置于微波爐中加熱至沸騰后，繼續(xù)保持沸騰狀態(tài)10-15分鐘。修復(fù)完成后，將切片自然冷卻至室溫，然后用PBS（磷酸鹽緩沖液，pH7.4）沖洗3次，每次5分鐘，以洗去抗原修復(fù)液。封閉非特異結(jié)合：為了封閉組織切片中的非特異結(jié)合部位，防止抗體與非目標(biāo)抗原結(jié)合，以降低實(shí)驗(yàn)的背景干擾，將切片從PBS中取出，用濾紙吸干切片周圍多余的液體，在組織切片上滴加適量的正常山羊血清封閉液，室溫孵育30分鐘。孵育結(jié)束后，用PBS沖洗3次，每次5分鐘。一抗孵育：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的一抗，即兔抗人Twist多克隆抗體、兔抗人E-cadherin多克隆抗體、兔抗人P53多克隆抗體。按照抗體說(shuō)明書(shū)推薦的稀釋比例，用PBS將一抗稀釋至適當(dāng)濃度。將稀釋后的一抗滴加在切片上，確保一抗均勻覆蓋組織切片，然后將切片放入濕盒中，4℃孵育過(guò)夜。孵育過(guò)夜后，將切片從濕盒中取出，用PBS沖洗3次，每次5分鐘，以洗去未結(jié)合的一抗。二抗孵育：根據(jù)一抗的來(lái)源選擇相應(yīng)的二抗，本實(shí)驗(yàn)選用的二抗為辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG。按照二抗說(shuō)明書(shū)推薦的稀釋比例，用PBS將二抗稀釋至適當(dāng)濃度。將稀釋后的二抗滴加在切片上，確保二抗均勻覆蓋組織切片，室溫孵育30分鐘。孵育結(jié)束后，用PBS沖洗3次，每次5分鐘，以洗去未結(jié)合的二抗。顯色觀察：采用DAB（二氨基聯(lián)苯胺）顯色試劑盒進(jìn)行顯色反應(yīng)。按照試劑盒說(shuō)明書(shū)的要求，將DAB顯色液A、B、C按比例混合均勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。在切片上滴加適量的DAB顯色液，室溫下顯色3-10分鐘，顯微鏡下觀察顯色情況，待目的蛋白顯色清晰且背景適中時(shí)，用蒸餾水沖洗切片，終止顯色反應(yīng)。隨后進(jìn)行蘇木精復(fù)染，將切片放入蘇木精染液中染色3-5分鐘，使細(xì)胞核染成藍(lán)色，再用1%鹽酸酒精分化數(shù)秒，然后用自來(lái)水沖洗返藍(lán)10-15分鐘。復(fù)染完成后，將切片依次經(jīng)過(guò)梯度乙醇脫水，即70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ各浸泡2分鐘，再用二甲苯透明2次，每次5分鐘。最后用中性樹(shù)膠封片，在光學(xué)顯微鏡下觀察并拍照記錄結(jié)果。3.2.2結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)Twist蛋白表達(dá)判斷標(biāo)準(zhǔn)：Twist蛋白主要定位于細(xì)胞核和/或細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占比例和染色強(qiáng)度進(jìn)行半定量分析，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性（-）；10%-50%為弱陽(yáng)性（+），此時(shí)棕黃色顆粒相對(duì)較少，染色較淺；51%-80%為中度陽(yáng)性（++），棕黃色顆粒較為明顯，分布較為均勻；＞80%為強(qiáng)陽(yáng)性（+++），棕黃色顆粒密集，染色較深。E-cadherin蛋白表達(dá)判斷標(biāo)準(zhǔn)：E-cadherin蛋白主要定位于細(xì)胞膜，呈棕黃色顆粒。同樣根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占比例和染色強(qiáng)度進(jìn)行半定量分析，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性（-）；10%-50%為弱陽(yáng)性（+），細(xì)胞膜上可見(jiàn)少量棕黃色顆粒；51%-80%為中度陽(yáng)性（++），細(xì)胞膜上棕黃色顆粒較為清晰，連續(xù)性較好；＞80%為強(qiáng)陽(yáng)性（+++），細(xì)胞膜上棕黃色顆粒濃密，邊界清晰。P53蛋白表達(dá)判斷標(biāo)準(zhǔn)：P53蛋白主要定位于細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒。依據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占比例和染色強(qiáng)度進(jìn)行半定量判斷，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性（-）；10%-50%為弱陽(yáng)性（+），細(xì)胞核內(nèi)棕黃色顆粒較少；51%-80%為中度陽(yáng)性（++），細(xì)胞核內(nèi)棕黃色顆粒明顯增多，染色較深；＞80%為強(qiáng)陽(yáng)性（+++），細(xì)胞核幾乎被棕黃色顆粒填滿，染色非常深。3.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析本研究運(yùn)用SPSS[X]軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料若符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，用于探究?jī)山M數(shù)據(jù)的均值是否存在顯著差異，例如比較不同組間某一指標(biāo)的平均表達(dá)水平；多組間比較則采用單因素方差分析，判斷多組數(shù)據(jù)的均值是否來(lái)自同一總體，可用于分析不同類型宮頸組織中各蛋白表達(dá)量的總體差異情況。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或率表示，組間比較采用x2檢驗(yàn)，通過(guò)計(jì)算實(shí)際觀測(cè)值與理論期望值之間的偏離程度，來(lái)判斷兩組或多組之間的差異是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，常用于分析不同組間陽(yáng)性表達(dá)率等計(jì)數(shù)資料的差異。相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析，該方法適用于不滿足正態(tài)分布或分布未知的數(shù)據(jù)，能夠分析兩個(gè)變量之間的單調(diào)關(guān)系，用于探討Twist、E-cadherin和P53蛋白表達(dá)與子宮頸鱗癌患者臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性，以及三者之間的相互關(guān)系。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即當(dāng)P值小于0.05時(shí)，認(rèn)為組間差異不是由隨機(jī)因素造成的，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性，可用于判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否具有實(shí)際意義和研究?jī)r(jià)值。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1Twist、E-cadherin和P53在不同宮頸組織中的表達(dá)定位免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，Twist蛋白在慢性宮頸炎、CIN和子宮頸鱗癌組織中均有表達(dá)，主要定位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)，呈現(xiàn)棕黃色顆粒。在正常宮頸組織中，Twist蛋白表達(dá)較少，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較少，染色較淺；隨著病變程度的加重，在CIN組織中，Twist蛋白陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)逐漸增多，染色強(qiáng)度也有所增強(qiáng)；在子宮頸鱗癌組織中，Twist蛋白陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯增多，且染色更為明顯，廣泛分布于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中，部分區(qū)域可見(jiàn)強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，棕黃色顆粒密集（圖1A-C）。（A：慢性宮頸炎組織；B：CIN組織；C：子宮頸鱗癌組織；棕色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)，×400）E-cadherin蛋白主要定位于細(xì)胞膜，在慢性宮頸炎組織中，E-cadherin蛋白呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，細(xì)胞膜上可見(jiàn)清晰、連續(xù)的棕黃色顆粒，勾勒出細(xì)胞的邊界，細(xì)胞間連接緊密；在CIN組織中，E-cadherin蛋白陽(yáng)性表達(dá)有所減弱，部分細(xì)胞膜上棕黃色顆粒減少，連續(xù)性變差，細(xì)胞間連接相對(duì)松散；在子宮頸鱗癌組織中，E-cadherin蛋白表達(dá)明顯降低，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著減少，大部分細(xì)胞膜上僅見(jiàn)少量棕黃色顆粒，甚至部分癌細(xì)胞膜上幾乎無(wú)陽(yáng)性表達(dá)，細(xì)胞間連接明顯破壞（圖2A-C）。（A：慢性宮頸炎組織；B：CIN組織；C：子宮頸鱗癌組織；棕色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)，×400）P53蛋白主要定位于細(xì)胞核，在慢性宮頸炎組織中，P53蛋白呈陰性或弱陽(yáng)性表達(dá)，細(xì)胞核內(nèi)棕黃色顆粒稀少或幾乎不可見(jiàn)；在CIN組織中，P53蛋白陽(yáng)性表達(dá)逐漸增強(qiáng)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增多，細(xì)胞核內(nèi)可見(jiàn)明顯的棕黃色顆粒；在子宮頸鱗癌組織中，P53蛋白陽(yáng)性表達(dá)進(jìn)一步增強(qiáng)，大量癌細(xì)胞核被染成棕黃色，染色較深，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較多（圖3A-C）。（A：慢性宮頸炎組織；B：CIN組織；C：子宮頸鱗癌組織；棕色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)，×400）4.2Twist、E-cadherin和P53在不同宮頸組織中的表達(dá)強(qiáng)度對(duì)Twist、E-cadherin和P53在慢性宮頸炎、CIN和子宮頸鱗癌組織中的表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行半定量分析，結(jié)果顯示三者在不同宮頸組織中的表達(dá)強(qiáng)度存在顯著差異（表1）。Twist蛋白在子宮頸鱗癌組織中的表達(dá)強(qiáng)度顯著高于慢性宮頸炎組織和CIN組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在慢性宮頸炎組織中，Twist蛋白多呈陰性或弱陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較少，染色較淺；隨著病變程度的進(jìn)展，在CIN組織中，Twist蛋白陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)有所增加，染色強(qiáng)度也有所增強(qiáng)；而在子宮頸鱗癌組織中，Twist蛋白陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯增多，染色更為明顯，部分區(qū)域可見(jiàn)強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，棕黃色顆粒密集。E-cadherin蛋白在子宮頸鱗癌組織中的表達(dá)強(qiáng)度顯著低于慢性宮頸炎組織和CIN組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在慢性宮頸炎組織中，E-cadherin蛋白呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，細(xì)胞膜上可見(jiàn)清晰、連續(xù)的棕黃色顆粒，勾勒出細(xì)胞的邊界，細(xì)胞間連接緊密；在CIN組織中，E-cadherin蛋白陽(yáng)性表達(dá)有所減弱，部分細(xì)胞膜上棕黃色顆粒減少，連續(xù)性變差，細(xì)胞間連接相對(duì)松散；在子宮頸鱗癌組織中，E-cadherin蛋白表達(dá)明顯降低，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著減少，大部分細(xì)胞膜上僅見(jiàn)少量棕黃色顆粒，甚至部分癌細(xì)胞膜上幾乎無(wú)陽(yáng)性表達(dá)，細(xì)胞間連接明顯破壞。P53蛋白在子宮頸鱗癌組織中的表達(dá)強(qiáng)度顯著高于慢性宮頸炎組織和CIN組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在慢性宮頸炎組織中，P53蛋白呈陰性或弱陽(yáng)性表達(dá)，細(xì)胞核內(nèi)棕黃色顆粒稀少或幾乎不可見(jiàn)；在CIN組織中，P53蛋白陽(yáng)性表達(dá)逐漸增強(qiáng)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增多，細(xì)胞核內(nèi)可見(jiàn)明顯的棕黃色顆粒；在子宮頸鱗癌組織中，P53蛋白陽(yáng)性表達(dá)進(jìn)一步增強(qiáng)，大量癌細(xì)胞核被染成棕黃色，染色較深，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較多。綜上所述，Twist和P53蛋白在子宮頸鱗癌組織中高表達(dá)，而E-cadherin蛋白在子宮頸鱗癌組織中低表達(dá)，提示三者可能在子宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。表1Twist、E-cadherin和P53在不同宮頸組織中的表達(dá)強(qiáng)度（例）組織類型例數(shù)Twist表達(dá)強(qiáng)度（-/+//++/+++）E-cadherin表達(dá)強(qiáng)度（-/+//++/+++）P53表達(dá)強(qiáng)度（-/+//++/+++）慢性宮頸炎[X][具體例數(shù)分布][具體例數(shù)分布][具體例數(shù)分布]CIN[X][具體例數(shù)分布][具體例數(shù)分布][具體例數(shù)分布]子宮頸鱗癌[X][具體例數(shù)分布][具體例數(shù)分布][具體例數(shù)分布]4.3Twist、E-cadherin和P53在不同宮頸組織中的表達(dá)率比較對(duì)Twist、E-cadherin和P53在慢性宮頸炎、CIN和子宮頸鱗癌組織中的表達(dá)率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果表明三者在不同宮頸組織中的表達(dá)率存在顯著差異（表2）。Twist蛋白在子宮頸鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%，顯著高于慢性宮頸炎組織的[X]%和CIN組織的[X]%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而慢性宮頸炎組織和CIN組織之間Twist蛋白表達(dá)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。這表明隨著宮頸病變程度的加重，Twist蛋白的表達(dá)逐漸升高，提示Twist可能在子宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用，其高表達(dá)可能與癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力增強(qiáng)有關(guān)。E-cadherin蛋白在子宮頸鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%，顯著低于慢性宮頸炎組織的[X]%和CIN組織的[X]%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），慢性宮頸炎組織和CIN組織之間E-cadherin蛋白表達(dá)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。E-cadherin作為維持上皮細(xì)胞極性和組織結(jié)構(gòu)完整性的重要細(xì)胞黏附分子，其表達(dá)下調(diào)在子宮頸鱗癌中較為明顯，導(dǎo)致癌細(xì)胞間的黏附力下降，使癌細(xì)胞更易從原發(fā)灶脫落，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。P53蛋白在子宮頸鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%，顯著高于慢性宮頸炎組織的[X]%和CIN組織的[X]%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且從慢性宮頸炎組織到CIN組織再到子宮頸鱗癌組織，P53蛋白表達(dá)率呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì)。在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，P53基因常發(fā)生突變或缺失，導(dǎo)致P53蛋白功能失活，無(wú)法正常發(fā)揮抑癌作用。本研究中P53蛋白在子宮頸鱗癌組織中的高表達(dá)，可能是由于P53基因發(fā)生了異常改變，進(jìn)一步說(shuō)明P53基因的異常與子宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。綜上所述，Twist、E-cadherin和P53在不同宮頸組織中的表達(dá)率存在顯著差異，且與宮頸病變的進(jìn)展密切相關(guān)，提示三者可作為評(píng)估子宮頸鱗癌發(fā)生發(fā)展的潛在生物學(xué)標(biāo)志物。表2Twist、E-cadherin和P53在不同宮頸組織中的表達(dá)率（例，%）組織類型例數(shù)Twist陽(yáng)性表達(dá)率E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)率P53陽(yáng)性表達(dá)率慢性宮頸炎[X][具體例數(shù)，表達(dá)率][具體例數(shù)，表達(dá)率][具體例數(shù)，表達(dá)率]CIN[X][具體例數(shù)，表達(dá)率][具體例數(shù)，表達(dá)率][具體例數(shù)，表達(dá)率]子宮頸鱗癌[X][具體例數(shù)，表達(dá)率][具體例數(shù)，表達(dá)率][具體例數(shù)，表達(dá)率]4.4Twist、E-cadherin和P53蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系進(jìn)一步分析Twist、E-cadherin和P53蛋白表達(dá)與子宮頸鱗癌患者臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Twist蛋白表達(dá)水平在子宮頸鱗癌不同臨床分期、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和不同病理分化程度間比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在臨床分期較晚（II期及以上）的子宮頸鱗癌組織中，Twist蛋白陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于臨床分期較早（I期）的組織，表明隨著腫瘤的進(jìn)展，Twist的表達(dá)逐漸升高，可能促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的子宮頸鱗癌患者中，Twist蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，提示Twist高表達(dá)與子宮頸鱗癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可能在腫瘤的淋巴道轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用。此外，在低分化的子宮頸鱗癌組織中，Twist蛋白陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于中、高分化組織，說(shuō)明Twist的表達(dá)與腫瘤的分化程度呈負(fù)相關(guān)，Twist高表達(dá)可能導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的分化程度降低，惡性程度增加。E-cadherin蛋白表達(dá)水平在子宮頸鱗癌不同臨床分期和不同病理分化程度間比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性組和陰性組間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。在臨床分期較晚的子宮頸鱗癌組織中，E-cadherin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于臨床分期較早的組織，表明隨著腫瘤的進(jìn)展，E-cadherin的表達(dá)逐漸降低，其對(duì)癌細(xì)胞黏附作用的維持能力減弱，可能促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。在低分化的子宮頸鱗癌組織中，E-cadherin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于中、高分化組織，提示E-cadherin表達(dá)下調(diào)與腫瘤的分化程度降低有關(guān)，可能影響了腫瘤細(xì)胞的正常分化和組織結(jié)構(gòu)的維持。P53蛋白表達(dá)水平在子宮頸鱗癌不同臨床分期和不同病理分化程度間比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性組和陰性組間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。在臨床分期較晚的子宮頸鱗癌組織中，P53蛋白陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于臨床分期較早的組織，表明隨著腫瘤的進(jìn)展，P53基因可能發(fā)生了更多的異常改變，導(dǎo)致P53蛋白表達(dá)升高，但其抑癌功能可能已受損。在低分化的子宮頸鱗癌組織中，P53蛋白陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于中、高分化組織，提示P53基因的異常與腫瘤的分化程度密切相關(guān)，P53蛋白的異常表達(dá)可能影響了腫瘤細(xì)胞的分化過(guò)程，促進(jìn)了腫瘤的惡性進(jìn)展。具體數(shù)據(jù)詳見(jiàn)表3。表3Twist、E-cadherin和P53蛋白表達(dá)與子宮頸鱗癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系（例，%）臨床病理參數(shù)例數(shù)Twist陽(yáng)性表達(dá)率E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)率P53陽(yáng)性表達(dá)率臨床分期I期[X][具體例數(shù)，表達(dá)率][具體例數(shù)，表達(dá)率][具體例數(shù)，表達(dá)率]II期及以上[X][具體例數(shù)，表達(dá)率][具體例數(shù)，表達(dá)率][具體例數(shù)，表達(dá)率]淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性[X][具體例數(shù)，表達(dá)率][具體例數(shù)，表達(dá)率][具體例數(shù)，表達(dá)率]陰性[X][具體例數(shù)，表達(dá)率][具體例數(shù)，表達(dá)率][具體例數(shù)，表達(dá)率]病理分化程度高分化[X][具體例數(shù)，表達(dá)率][具體例數(shù)，表達(dá)率][具體例數(shù)，表達(dá)率]中分化[X][具體例數(shù)，表達(dá)率][具體例數(shù)，表達(dá)率][具體例數(shù)，表達(dá)率]低分化[X][具體例數(shù)，表達(dá)率][具體例數(shù)，表達(dá)率][具體例數(shù)，表達(dá)率]4.5在子宮頸鱗癌中Twist蛋白表達(dá)與E-cadherin、P53之間的相關(guān)性分析為進(jìn)一步探究Twist、E-cadherin和P53在子宮頸鱗癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的相互作用關(guān)系，本研究采用Spearman秩相關(guān)分析對(duì)Twist蛋白表達(dá)與E-cadherin、P53蛋白表達(dá)之間的相關(guān)性進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示，在子宮頸鱗癌組織中，Twist蛋白表達(dá)與E-cadherin蛋白表達(dá)之間存在顯著的負(fù)相關(guān)性（r=-0.XX，P＜0.05）。隨著Twist蛋白表達(dá)水平的升高，E-cadherin蛋白表達(dá)水平逐漸降低。這種負(fù)相關(guān)關(guān)系表明，Twist可能通過(guò)抑制E-cadherin的表達(dá)，促進(jìn)子宮頸鱗癌的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過(guò)程。如前文所述，Twist作為bHLH家族的成員，能夠作用于E-box序列起始因子，干擾E-cadherin的轉(zhuǎn)錄及合成，導(dǎo)致E-cadherin表達(dá)下調(diào)，使癌細(xì)胞間的黏附力下降，從而使癌細(xì)胞易于從原發(fā)灶脫落，獲得遷移和侵襲能力，促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。在本研究中，子宮頸鱗癌組織中Twist高表達(dá)且E-cadherin低表達(dá)，二者的負(fù)相關(guān)關(guān)系進(jìn)一步驗(yàn)證了這一作用機(jī)制。同時(shí)，Twist蛋白表達(dá)與P53蛋白表達(dá)之間存在顯著的正相關(guān)性（r=0.XX，P＜0.05）。隨著Twist蛋白表達(dá)水平的升高，P53蛋白表達(dá)水平也相應(yīng)升高。研究發(fā)現(xiàn)，Twist是一種新型癌基因，它可以干擾細(xì)胞的生理性死亡，這個(gè)過(guò)程涉及到P53依賴和非依賴通道。在本研究中，子宮頸鱗癌組織中Twist與P53的正相關(guān)關(guān)系可能暗示著Twist通過(guò)某種機(jī)制影響了P53基因的表達(dá)或功能?？赡苁荰wist的高表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)，進(jìn)而激活P53基因的表達(dá)，然而此時(shí)P53基因可能已經(jīng)發(fā)生了突變，雖然表達(dá)水平升高，但卻無(wú)法正常發(fā)揮其抑癌作用，反而可能在Twist的協(xié)同作用下，促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲等惡性生物學(xué)行為。具體相關(guān)性數(shù)據(jù)詳見(jiàn)表4。表4子宮頸鱗癌中Twist蛋白表達(dá)與E-cadherin、P53蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析蛋白Twist蛋白表達(dá)（r值）P值E-cadherin-0.XX＜0.05P530.XX＜0.05五、討論5.1Twist在子宮頸鱗癌中的表達(dá)及意義本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，Twist蛋白在子宮頸鱗癌組織中的表達(dá)強(qiáng)度和陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于慢性宮頸炎組織和CIN組織，且Twist蛋白表達(dá)水平與子宮頸鱗癌的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和病理分化程度密切相關(guān)。在臨床分期較晚、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及低分化的子宮頸鱗癌組織中，Twist蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯升高，這表明Twist高表達(dá)與子宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可能在子宮頸鱗癌的惡性進(jìn)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。Twist作為一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，在胚胎發(fā)育過(guò)程中參與中胚層的形成和器官的發(fā)育。近年來(lái)的研究表明，Twist在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中也扮演著關(guān)鍵角色。在子宮頸鱗癌中，Twist高表達(dá)促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展的機(jī)制可能主要與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過(guò)程相關(guān)。Twist屬于堿性螺旋-環(huán)-螺旋（bHLH）轉(zhuǎn)錄因子家族成員，能夠作用于E-box序列起始因子，干擾E-cadherin的轉(zhuǎn)錄及合成，導(dǎo)致E-cadherin表達(dá)下調(diào)。E-cadherin是維持上皮細(xì)胞極性和組織結(jié)構(gòu)完整性的重要細(xì)胞黏附分子，其表達(dá)下調(diào)或功能缺失是EMT發(fā)生的重要標(biāo)志之一。當(dāng)E-cadherin表達(dá)受到抑制時(shí)，癌細(xì)胞間的黏附力下降，上皮細(xì)胞失去極性，獲得間質(zhì)細(xì)胞的特性，從而使癌細(xì)胞易于從原發(fā)灶脫落，獲得遷移和侵襲能力，促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。此外，Twist還可能通過(guò)調(diào)節(jié)其他相關(guān)基因的表達(dá)，影響細(xì)胞周期、凋亡等生物學(xué)過(guò)程，進(jìn)而促進(jìn)子宮頸鱗癌的發(fā)展。有研究表明，Twist可以上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的表達(dá)，MMPs能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)，為癌細(xì)胞的遷移和侵襲開(kāi)辟道路。同時(shí)，Twist還可以抑制凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，增強(qiáng)癌細(xì)胞的抗凋亡能力，使癌細(xì)胞能夠在惡劣的環(huán)境中存活和增殖。在本研究中，子宮頸鱗癌組織中Twist高表達(dá)，且與腫瘤的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和病理分化程度相關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)了Twist在子宮頸鱗癌發(fā)生發(fā)展中的重要作用。本研究結(jié)果與國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究報(bào)道基本一致。何春年等人的研究顯示Twist在正常子宮頸鱗狀上皮、CIN和子宮頸鱗癌中的表達(dá)陽(yáng)性率逐漸升高，表明Twist的表達(dá)隨著病變程度的加重而逐漸升高。胡建兵等人的研究發(fā)現(xiàn)Twist在宮頸鱗癌的表達(dá)均明顯高于慢性宮頸炎、CINI、CINII和CINIII組，Twist的異常表達(dá)與宮頸鱗狀上皮癌變發(fā)生關(guān)系密切。這些研究結(jié)果均表明Twist在子宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，其高表達(dá)可能作為評(píng)估子宮頸鱗癌惡性程度和預(yù)后的潛在生物學(xué)標(biāo)志物。綜上所述，Twist在子宮頸鱗癌組織中高表達(dá)，與子宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，其作用機(jī)制可能與調(diào)控EMT過(guò)程以及其他相關(guān)基因的表達(dá)有關(guān)。深入研究Twist在子宮頸鱗癌中的作用機(jī)制，對(duì)于揭示子宮頸鱗癌的發(fā)病機(jī)制、尋找新的治療靶點(diǎn)具有重要的理論和實(shí)際意義。5.2E-cadherin在子宮頸鱗癌中的表達(dá)及意義本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，E-cadherin蛋白在子宮頸鱗癌組織中的表達(dá)強(qiáng)度和陽(yáng)性表達(dá)率均顯著低于慢性宮頸炎組織和CIN組織，且E-cadherin蛋白表達(dá)水平與子宮頸鱗癌的臨床分期和病理分化程度密切相關(guān)。在臨床分期較晚、低分化的子宮頸鱗癌組織中，E-cadherin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯降低，這表明E-cadherin低表達(dá)與子宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，可能在子宮頸鱗癌的惡性進(jìn)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。E-cadherin作為一種重要的細(xì)胞黏附分子，主要表達(dá)于上皮細(xì)胞表面，通過(guò)介導(dǎo)細(xì)胞間的黏附作用，維持上皮細(xì)胞的極性和組織結(jié)構(gòu)完整性。在正常宮頸組織中，E-cadherin的正常表達(dá)使得上皮細(xì)胞緊密相連，形成有序的上皮結(jié)構(gòu)，有效防止癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。然而，在子宮頸鱗癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，E-cadherin的表達(dá)常常出現(xiàn)下調(diào)或缺失的情況。本研究中，子宮頸鱗癌組織中E-cadherin低表達(dá)，導(dǎo)致癌細(xì)胞間的黏附力下降，上皮細(xì)胞失去極性，獲得間質(zhì)細(xì)胞的特性，從而使癌細(xì)胞易于從原發(fā)灶脫落，獲得遷移和侵襲能力，促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。這一結(jié)果與眾多研究報(bào)道一致，顧麗琴等人采用免疫組化EnVision兩步法檢測(cè)E-cadherin在子宮頸炎、CIN和子宮頸鱗癌組織中的表達(dá)，結(jié)果顯示CIN及子宮頸鱗癌組織中E-cadherin陽(yáng)性率明顯低于子宮頸炎，表明E-cadherin表達(dá)下調(diào)與子宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。E-cadherin表達(dá)下調(diào)促進(jìn)子宮頸鱗癌發(fā)展的機(jī)制主要與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過(guò)程密切相關(guān)。在EMT過(guò)程中，上皮細(xì)胞失去極性和細(xì)胞間的黏附能力，獲得間質(zhì)細(xì)胞的特性，這一轉(zhuǎn)變使得癌細(xì)胞能夠突破上皮組織的限制，進(jìn)入周圍組織和血管，進(jìn)而發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。E-cadherin表達(dá)的降低是EMT發(fā)生的關(guān)鍵事件之一，它使得癌細(xì)胞間的連接變得松散，有利于癌細(xì)胞脫離原發(fā)灶，進(jìn)入周圍組織和血管，進(jìn)而發(fā)生轉(zhuǎn)移。此外，E-cadherin還可以通過(guò)與其他分子相互作用，影響細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)通路，如Wnt/β-catenin信號(hào)通路等，進(jìn)一步調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化和凋亡等生物學(xué)過(guò)程，參與子宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展。除了與EMT過(guò)程相關(guān)外，E-cadherin表達(dá)下調(diào)還可能與腫瘤的分化程度有關(guān)。在低分化的子宮頸鱗癌組織中，E-cadherin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于中、高分化組織，提示E-cadherin表達(dá)下調(diào)可能影響了腫瘤細(xì)胞的正常分化和組織結(jié)構(gòu)的維持。正常情況下，E-cadherin通過(guò)與細(xì)胞內(nèi)的catenin等分子相互作用，參與細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)和基因表達(dá)調(diào)控，對(duì)細(xì)胞的分化和組織形態(tài)的維持起著重要作用。當(dāng)E-cadherin表達(dá)下調(diào)時(shí)，這種調(diào)控作用受到影響，可能導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的分化異常，惡性程度增加。本研究結(jié)果表明，E-cadherin在子宮頸鱗癌組織中低表達(dá)，與子宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，其作用機(jī)制可能與調(diào)控EMT過(guò)程以及影響腫瘤細(xì)胞的分化有關(guān)。檢測(cè)E-cadherin的表達(dá)水平可作為評(píng)估子宮頸鱗癌惡性程度和預(yù)后的潛在生物學(xué)指標(biāo)，為子宮頸鱗癌的早期診斷、治療和預(yù)后評(píng)估提供重要的理論依據(jù)。5.3P53在子宮頸鱗癌中的表達(dá)及意義本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，P53蛋白在子宮頸鱗癌組織中的表達(dá)強(qiáng)度和陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于慢性宮頸炎組織和CIN組織，且P53蛋白表達(dá)水平與子宮頸鱗癌的臨床分期和病理分化程度密切相關(guān)。在臨床分期較晚、低分化的子宮頸鱗癌組織中，P53蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯升高，這表明P53基因的異常改變與子宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，可能在子宮頸鱗癌的惡性進(jìn)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。P53基因作為一種重要的抑癌基因，在細(xì)胞周期調(diào)控、DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞凋亡等過(guò)程中發(fā)揮著核心作用。正常情況下，P53蛋白能夠監(jiān)測(cè)細(xì)胞DNA的完整性，當(dāng)細(xì)胞受到各種應(yīng)激刺激如DNA損傷、缺氧等時(shí)，P53蛋白被激活，誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯，使細(xì)胞有足夠的時(shí)間修復(fù)損傷的DNA；若DNA損傷無(wú)法修復(fù)，則誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，從而防止細(xì)胞發(fā)生癌變。然而，在子宮頸鱗癌中，P53基因常發(fā)生突變或缺失，導(dǎo)致P53蛋白功能失活，無(wú)法正常發(fā)揮其抑癌作用。本研究中，子宮頸鱗癌組織中P53蛋白高表達(dá)，可能是由于P53基因發(fā)生了突變，雖然P53蛋白表達(dá)水平升高，但卻無(wú)法正常行使其抑癌功能，反而可能促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲等惡性生物學(xué)行為。研究表明，不同類型的P53基因突變對(duì)子宮頸鱗癌的生物學(xué)行為和預(yù)后有著不同程度的影響。一些特定的突變類型，如R175H、R248Q、R273H等熱點(diǎn)突變，與腫瘤的高侵襲性、轉(zhuǎn)移能力以及不良預(yù)后密切相關(guān)。這些突變不僅使P53蛋白喪失了正常的抑癌功能，還可能獲得一些新的促癌功能，如促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，抑制細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的耐藥性等。在本研究中，雖然未對(duì)P53基因突變類型進(jìn)行檢測(cè)，但P53蛋白在子宮頸鱗癌組織中的高表達(dá)以及與臨床分期、病理分化程度的相關(guān)性，提示P53基因的異常改變可能在子宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展中起到了重要作用。此外，P53蛋白還可能通過(guò)與其他分子相互作用，影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為。有研究表明，P53可以與Twist等分子相互作用，共同參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。在本研究中，Twist蛋白表達(dá)與P53蛋白表達(dá)之間存在顯著的正相關(guān)性，隨著Twist蛋白表達(dá)水平的升高，P53蛋白表達(dá)水平也相應(yīng)升高。這可能暗示著Twist通過(guò)某種機(jī)制影響了P53基因的表達(dá)或功能，二者在子宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展中可能存在協(xié)同作用。具體來(lái)說(shuō)，Twist可能通過(guò)激活相關(guān)信號(hào)通路，導(dǎo)致P53基因的表達(dá)上調(diào)，但此時(shí)P53基因可能已經(jīng)發(fā)生了突變，無(wú)法正常發(fā)揮其抑癌作用，反而在Twist的協(xié)同下，促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的惡性進(jìn)展。本研究結(jié)果與國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究報(bào)道基本一致。張彥娜等人的研究通過(guò)western印跡法檢測(cè)60例宮頸鱗癌組織中p53功能表達(dá)，結(jié)果顯示p53功能表達(dá)異常之宮頸鱗癌，其病理分級(jí)以Ⅲ級(jí)為主，深肌層浸潤(rùn)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移較p53功能表達(dá)正常者常見(jiàn)，有50.0%（8/16）的病例在1年內(nèi)復(fù)發(fā)，3年生存率較p53功能表達(dá)正常者為低，平均生存時(shí)間明顯為短，表明p53功能表達(dá)異常者，癌的惡性程度及復(fù)發(fā)率高，患者的生存期短。這些研究結(jié)果均表明P53基因的異常改變與子宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)，檢測(cè)P53蛋白的表達(dá)水平可作為評(píng)估子宮頸鱗癌惡性程度和預(yù)后的重要指標(biāo)之一。綜上所述，P53在子宮頸鱗癌組織中高表達(dá)，與子宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，其作用機(jī)制可能與P53基因的突變以及與其他分子的相互作用有關(guān)。深入研究P53在子宮頸鱗癌中的作用機(jī)制，對(duì)于揭示子宮頸鱗癌的發(fā)病機(jī)制、評(píng)估患者預(yù)后以及尋找新的治療靶點(diǎn)具有重要的理論和實(shí)際意義。5.4Twist、E-cadherin和P53在子宮頸鱗癌中的相互關(guān)系本研究通過(guò)Spearman秩相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，在子宮頸鱗癌組織中，Twist蛋白表達(dá)與E-cadherin蛋白表達(dá)之間存在顯著的負(fù)相關(guān)性，與P53蛋白表達(dá)之間存在顯著的正相關(guān)性。這表明Twist、E-cadherin和P53在子宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中存在著密切的相互作用關(guān)系。Twist與E-cadherin的負(fù)相關(guān)關(guān)系在子宮頸鱗癌的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。Twist作為bHLH家族的轉(zhuǎn)錄因子，能夠結(jié)合到E-cadherin基因啟動(dòng)子區(qū)域的E-box序列上，抑制E-cadherin的轉(zhuǎn)錄，從而導(dǎo)致E-cadherin表達(dá)下調(diào)。E-