PCR崗前培訓(xùn)結(jié)業(yè)考試題及答案

PCR崗前培訓(xùn)結(jié)業(yè)考試題及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR的中文名稱是（）A.聚合酶鏈反應(yīng)B.基因克隆技術(shù)C.核酸雜交技術(shù)D.基因測(cè)序技術(shù)答案：A2.在PCR反應(yīng)中，起催化DNA合成作用的是（）A.RNA聚合酶B.逆轉(zhuǎn)錄酶C.Taq酶D.DNA連接酶答案：C3.PCR反應(yīng)的三個(gè)基本步驟是（）A.變性、退火、延伸B.變性、延伸、退火C.退火、變性、延伸D.延伸、退火、變性答案：A4.以下哪種物質(zhì)不是PCR反應(yīng)體系必需的（）A.模板DNAB.dNTPsC.引物D.蛋白酶答案：D5.PCR反應(yīng)中，退火溫度主要取決于（）A.模板的長(zhǎng)度B.引物的長(zhǎng)度和序列C.Taq酶的活性D.dNTPs的濃度答案：B6.下列哪種情況可能導(dǎo)致PCR假陽(yáng)性結(jié)果（）A.反應(yīng)體系被污染B.模板量過(guò)少C.退火溫度過(guò)高D.延伸時(shí)間過(guò)短答案：A7.PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳時(shí)，通常用哪種染料染色（）A.溴化乙錠B.考馬斯亮藍(lán)C.結(jié)晶紫D.番紅答案：A8.一般情況下，PCR的循環(huán)次數(shù)為（）A.10-20次B.20-30次C.30-40次D.40-50次答案：B9.在設(shè)計(jì)PCR引物時(shí)，引物的長(zhǎng)度一般為（）A.10-15bpB.15-20bpC.20-30bpD.30-40bp答案：C10.PCR技術(shù)可用于（）A.基因診斷B.基因克隆C.核酸序列分析D.以上都是答案：D二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)體系包括以下哪些成分（）A.模板DNAB.引物C.Taq酶D.dNTPsE.緩沖液答案：ABCDE2.影響PCR特異性的因素有（）A.引物特異性B.退火溫度C.模板純度D.Taq酶的質(zhì)量E.延伸時(shí)間答案：ABC3.以下哪些措施可以提高PCR的靈敏度（）A.增加模板量B.優(yōu)化引物設(shè)計(jì)C.提高Taq酶的濃度D.增加循環(huán)次數(shù)E.降低退火溫度答案：ABD4.PCR技術(shù)在以下哪些領(lǐng)域有應(yīng)用（）A.醫(yī)學(xué)診斷B.法醫(yī)鑒定C.農(nóng)業(yè)科學(xué)D.考古學(xué)E.環(huán)境監(jiān)測(cè)答案：ABCDE5.下列關(guān)于PCR引物的描述，正確的是（）A.引物的3'端必須與模板嚴(yán)格互補(bǔ)B.引物的5'端可以進(jìn)行修飾C.引物內(nèi)部不能形成二級(jí)結(jié)構(gòu)D.上下游引物之間不能互補(bǔ)E.引物長(zhǎng)度應(yīng)在15-30bp之間答案：ABCDE6.以下哪些是PCR常見(jiàn)的問(wèn)題（）A.假陽(yáng)性B.假陰性C.非特異性擴(kuò)增D.引物二聚體E.擴(kuò)增效率低答案：ABCDE7.在進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要注意以下哪些方面的污染控制（）A.試劑污染B.樣本間交叉污染C.環(huán)境中的核酸污染D.儀器設(shè)備污染E.操作人員污染答案：ABCDE8.以下哪些因素會(huì)影響PCR的退火溫度（）A.引物的GC含量B.引物的長(zhǎng)度C.反應(yīng)體系中的離子濃度D.模板的復(fù)雜度E.Taq酶的活性答案：ABC9.PCR產(chǎn)物的分析方法有（）A.瓊脂糖凝膠電泳B.聚丙烯酰胺凝膠電泳C.測(cè)序D.酶切分析E.雜交分析答案：ABCDE10.對(duì)于PCR實(shí)驗(yàn)中的樣本采集，需要考慮（）A.樣本的類型B.樣本的保存條件C.樣本的采集量D.樣本的采集部位E.樣本的采集時(shí)間答案：ABCDE三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)可以在常溫下進(jìn)行。（）答案：錯(cuò)誤2.只要有模板DNA，就可以進(jìn)行成功的PCR反應(yīng)。（）答案：錯(cuò)誤3.Taq酶具有熱穩(wěn)定性。（）答案：正確4.引物在PCR反應(yīng)中只能使用一次。（）答案：錯(cuò)誤5.PCR反應(yīng)中，延伸溫度通常為72℃。（）答案：正確6.所有的DNA樣本都可以直接用于PCR反應(yīng)，不需要任何處理。（）答案：錯(cuò)誤7.瓊脂糖凝膠電泳時(shí)，DNA分子向正極移動(dòng)。（）答案：正確8.PCR產(chǎn)物的長(zhǎng)度只取決于模板DNA的長(zhǎng)度。（）答案：錯(cuò)誤9.提高退火溫度一定可以提高PCR的特異性。（）答案：錯(cuò)誤10.在PCR反應(yīng)體系中，dNTPs的濃度越高越好。（）答案：錯(cuò)誤四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共4題）1.簡(jiǎn)述PCR的基本原理。答案：PCR是一種體外擴(kuò)增特定DNA片段的技術(shù)。以DNA為模板，在Taq酶的作用下，通過(guò)高溫變性使模板DNA雙鏈解開(kāi)為單鏈，低溫退火使引物與模板鏈特異性結(jié)合，中溫延伸使引物沿模板鏈延伸合成新的DNA鏈，經(jīng)過(guò)多次循環(huán)，使目的DNA片段得到大量擴(kuò)增。2.說(shuō)明PCR假陽(yáng)性結(jié)果產(chǎn)生的可能原因及解決方法。答案：可能原因：反應(yīng)體系被污染（如試劑、環(huán)境、樣本交叉污染等）。解決方法：使用質(zhì)量可靠的試劑，嚴(yán)格區(qū)分不同樣本操作，保證實(shí)驗(yàn)環(huán)境清潔，設(shè)置陰性對(duì)照等。3.簡(jiǎn)述在PCR引物設(shè)計(jì)時(shí)的基本要求。答案：引物長(zhǎng)度15-30bp，3'端必須與模板嚴(yán)格互補(bǔ)，5'端可修飾，引物內(nèi)部不能有二級(jí)結(jié)構(gòu)，上下游引物間不能互補(bǔ)。4.請(qǐng)簡(jiǎn)要介紹PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳的目的及原理。答案：目的：檢測(cè)PCR產(chǎn)物的大小和純度等。原理：DNA分子在電場(chǎng)作用下，由于其磷酸骨架帶負(fù)電向正極移動(dòng)，不同大小的DNA在瓊脂糖凝膠中的遷移速度不同，從而分離出不同條帶。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論如何在PCR實(shí)驗(yàn)中避免樣本間交叉污染。答案：使用一次性耗材，不同樣本操作間徹底清潔消毒，規(guī)范操作流程避免樣本飛濺，樣本處理在不同的空間或時(shí)間間隔下進(jìn)行等。2.闡述PCR技術(shù)在疾病診斷中的優(yōu)勢(shì)和局限性。答案：優(yōu)勢(shì)：靈敏、快速、特異性較高，可檢測(cè)微量DNA。局限性：易受污染產(chǎn)生假陽(yáng)性，對(duì)引物設(shè)計(jì)要求高，只能檢測(cè)