藥物的鑒別試驗(yàn)醫(yī)學(xué).ppt

第二章 藥物的鑒別試驗(yàn),一 概述 二 鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目 三 鑒別的方法 四 鑒別的試驗(yàn)條件,一 概述,藥物的鑒別實(shí)驗(yàn)是根據(jù)分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)，采用化學(xué)、物理化學(xué)或生物學(xué)方法來判斷藥物的真?zhèn)巍?鑒別是藥品質(zhì)量檢驗(yàn)工作中的首要任務(wù)，只有在藥物鑒別無誤后，雜質(zhì)檢查、含量測定等分析才有意義。 鑒別只能證實(shí)藥物的真?zhèn)?，不能對未知物進(jìn)行定性分析。,二 鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目,（一） 性狀 1. 外觀 指物質(zhì)的凝聚狀態(tài)、晶型、色澤以及臭、味等性質(zhì) 2. 溶解度 反映了藥品的純度。描述有“極易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、極微溶解、幾乎不溶或不溶”來描述藥品的溶解性能。 3. 物理常數(shù) 藥品質(zhì)量的重要指標(biāo)，不僅具有鑒別意義，也反映藥品純雜程度。 常數(shù)包括：熔點(diǎn)、比旋度、吸光系數(shù)、相對密度、餾程、凝點(diǎn)、折光率、黏度、酸值、皂化值、羥值、碘值等。（P23）,（1）熔點(diǎn)：固體 液體的溫度 （2）比旋度：在一定波長與溫度下，偏振光透過長ldm且每1ml中含有旋光性物質(zhì)1g的溶液時(shí)測得的旋光度稱為比旋度。是反映手性藥物特性及其純度的主要指標(biāo)，用于鑒別藥品、含量測定。,（3）吸收系數(shù)：在給定的波長、溶劑和溫度等條件下，吸光物質(zhì)在單位濃度、單位液層厚度時(shí)的吸收度稱為吸收系數(shù)。 有兩種表示方式：摩爾吸收系數(shù)和百分吸收系數(shù)。后者是中國藥典收載的方法，它是指在一定波長下，溶液濃度為1（W/V)，厚度為lcm時(shí)的吸收度，用 表示。 用于考查藥品的質(zhì)量，定量分析。,（二） 一般鑒別實(shí)驗(yàn) * 概念：依據(jù)某一類藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)或理化性質(zhì)的特征，通過化學(xué)反應(yīng)來鑒別藥物的真?zhèn)巍?* 無機(jī)藥物：根據(jù)其組成的陰離子和陽離子的特殊反應(yīng) * 有機(jī)藥物：則大都采用典型的官能團(tuán)反應(yīng) * 一般鑒別試驗(yàn)只能證實(shí)是某一類藥物,而不能證實(shí)是哪一種藥物. * 僅供確認(rèn)單一的化學(xué)藥物，如為數(shù)種化學(xué)藥物的混合物或有干擾物質(zhì)存在時(shí)，除另有規(guī)定外，應(yīng)不適用。,一般鑒別試驗(yàn),例如，經(jīng)一般鑒別反應(yīng)的鈉鹽試驗(yàn)，證實(shí)某一藥物為鈉鹽，但不能辨認(rèn)是氯化鈉、苯甲酸鈉或者是其它某一種鈉鹽藥物。要想最后證實(shí)被鑒別的物質(zhì)到底是哪一種藥物，必須在一般鑒別試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，再進(jìn)行專屬鑒別試驗(yàn)，方可確認(rèn)。,一般鑒別試驗(yàn)項(xiàng)目,Ch.P附錄項(xiàng)下一般鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目： 丙二酰脲類、托烷生物堿類、芳香第一胺類、有機(jī)氟化物類、 無機(jī)金屬鹽類（鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、鈣鹽、鋇鹽、銨鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋁鹽、鋅鹽、銅鹽、銀鹽、汞鹽、鉍鹽、銻鹽、亞錫鹽）、有機(jī)酸鹽（水楊酸鹽、枸櫞酸鹽、乳酸鹽、苯甲酸鹽、酒石酸鹽）、無機(jī)酸鹽（亞硫酸鹽或亞硫酸氫鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、硼酸鹽、碳酸鹽與碳酸氫鹽、醋酸鹽、磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物）。,一般鑒別試驗(yàn)舉例,1.有機(jī)氟化物 (1)鑒別試驗(yàn) 取供試品約7mg，照氧瓶燃燒法（附錄VIIC）進(jìn)行有機(jī)破壞，用水20ml與0.01mol/L氫氧化鈉溶液6.5ml為吸收液，俟燃燒完全后，充分振搖；取吸收液2ml，加茜素氟藍(lán)試液0.5ml，再加12%醋酸鈉的稀醋酸溶液0.2ml，用水稀釋至4ml，加硝酸亞鈰試液0.5ml，即顯藍(lán)紫色；同時(shí)做空白對照試驗(yàn)。 (2)試驗(yàn)原理 有機(jī)氟化物經(jīng)氧瓶燃燒法破壞，為堿性溶液吸收成為無機(jī)氟化物后，與茜素氟藍(lán)、硝酸亞鈰形成藍(lán)紫色絡(luò)合物。,2.有機(jī)酸鹽 (1)水楊酸鹽 鑒別試驗(yàn)一: 取供試品的稀溶液，加三氯化鐵試液1滴，即顯紫色。 原理 :本品在中性或弱酸性條件下，和三氯化鐵試液生成配位化合物，在中性時(shí)呈紅色，弱酸性時(shí)呈紫色；若在強(qiáng)酸性中，配位化合物分解生成游離水楊酸。 鑒別試驗(yàn)二: 取供試品溶液，加稀鹽酸，即析出白色水楊酸沉淀；分離，沉淀在醋酸按試液中溶解。,(2)酒石酸鹽 方法 取供試品的中性溶液，置潔凈的試管中，加氨制硝酸銀試液數(shù)滴，置水浴中加熱，銀即游離并附在管的內(nèi)壁成銀鏡。 取供試品溶液，加醋酸成酸性后，加硫酸亞鐵試液1滴和過氧化氫試液1滴，俟溶液退色后，用氫氧化鈉試液堿化，溶液即顯紫色。,(3)枸櫞酸鹽 取供試品溶液2ml（約相當(dāng)于枸櫞酸10mg）,加稀硫酸數(shù)滴, 加熱至沸，加高錳酸鉀試液數(shù)滴，振搖，紫色即消失；溶液分成兩份，一份中加硫酸汞試液1滴,另一份中逐滴加入溴試液，均生成白色沉淀。 取供試品約5mg，加吡啶醋酐(31)約5ml，振搖，即生成黃色到紅色或紫紅色的溶液。,3.無機(jī)金屬鹽 (1)鈉鹽 鑒別試驗(yàn)一 取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，火焰即顯鮮黃色。 原理 鈉的火焰光譜在可見光區(qū)，有589.0nm、589.6nm主要譜線，故其燃燒火焰顯黃色。本焰色反應(yīng)極為靈敏（最低檢出限量為0.1ng鈉離子）。因此，對所用儀器和試劑要求必須很嚴(yán)格。在檢測前應(yīng)將鉑絲燒紅，趁熱浸入鹽酸中，如此反復(fù)數(shù)次，直至火焰不染黃色后，再蘸取供試品進(jìn)行測定。只有當(dāng)強(qiáng)烈的黃色火焰持續(xù)數(shù)秒鐘不退，才能確認(rèn)為鈉鹽。,一般鑒別試驗(yàn),(2)鉀鹽 鑒別試液一 焰色反應(yīng)顯紫色，但有少量鈉鹽混存時(shí)，須隔藍(lán)色鈷玻璃透視，方能辨認(rèn)。 原理 鉀的火焰光譜在可見光區(qū)有766.49nm、769.90nm與404.4nm幾條譜線，其中以766.49nm與769.90nm兩條譜線最強(qiáng)。由于人眼在此波長附近敏感度較差，故鉀鹽的燃燒火焰顯紫色。如有鈉鹽混存，因鈉焰靈敏度很高，需透過藍(lán)色鈷玻璃將鈉焰黃色濾去，此時(shí)火焰顯粉紅色。,一般鑒別試驗(yàn),(3)鈣鹽 鑒別試驗(yàn)一 焰色反應(yīng)顯磚紅色（622nm）。 鑒別試驗(yàn)二 取供試品溶液（120），加甲基紅指示液2滴，用氨試液中和，再滴加鹽酸至呈酸性，加草酸銨試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀不溶于醋酸，但可溶于鹽酸。,(4)銨鹽 鑒別試驗(yàn) 取供試品，加過量氫氧化鈉試液后，加熱，即分解，發(fā)生氨臭；遇濕潤的紅色石蕊試紙，能使之變藍(lán)，并能使硝酸亞汞試液濕潤的濾紙顯黑色。,（三）專屬鑒別試驗(yàn),（三）專屬鑒別試驗(yàn) （specific identification test） 根據(jù)每一種藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異及其所引起的物理化學(xué)特性的不同，選用某些特有的靈敏的定性反應(yīng)，來鑒別藥物真?zhèn)蔚蔫b別試驗(yàn)。是證實(shí)某一種藥物的依據(jù)。,綜上所述,一般鑒別試驗(yàn)是以某些類別藥物的共同化學(xué)結(jié)構(gòu)為依據(jù)，根據(jù)其相同的物理化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行藥物真?zhèn)蔚蔫b別，以區(qū)別不同類別的藥物。 而專屬鑒別試驗(yàn)，則是在一般鑒別試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，利用各種藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)差異，來鑒別藥物，以區(qū)別同類藥物或具有相同化學(xué)結(jié)構(gòu)部分的各個(gè)藥物單體，達(dá)到最終確證藥物真?zhèn)蔚哪康摹?三.鑒別的方法,（一）化學(xué)鑒別法 （二）光譜鑒別法 （三）色譜鑒別法 （四）x射線粉末衍射法 （五）生物學(xué)法,（一）化學(xué)鑒別法,(1）呈色反應(yīng)鑒別法：系指供試品溶液中加入適當(dāng)?shù)脑噭┤芤?，在一定條件下進(jìn)行反應(yīng)，生成易于觀測的有色產(chǎn)物。在鑒別試驗(yàn)中最為常用的反應(yīng)類型有： 1）三氯化鐵呈色反應(yīng)-酚羥基的三氯化鐵呈色反應(yīng)； 2）異羥肟酸鐵反應(yīng)-多為芳酸及其酯類、酰胺類； 3）茚三酮呈色反應(yīng)-脂肪氨基； 4）重氮化-偶合顯色反應(yīng)-芳伯氨基或能產(chǎn)生芳伯氨基； 5）氧化還原顯色反應(yīng)及其它顏色反應(yīng)。,（一）化學(xué)鑒別法,（2）沉淀生成反應(yīng)鑒別法：常用的這類反應(yīng)有： 1）與重金屬離子的沉淀反應(yīng) 在一定條件下，藥物和重金屬離子反應(yīng)，生成不同形式的沉淀； 2）與硫氰化鉻銨（雷氏鹽）的沉淀反應(yīng) 多為生物堿及其鹽，具有芳香環(huán)的有機(jī)堿及其鹽； 3）其它沉淀反應(yīng)。,（一）化學(xué)鑒別法,（3）熒光反應(yīng)鑒別法：常用的熒光發(fā)射形式有以下類型： 1）藥物本身可在可見光下發(fā)射熒光：麥角新堿、潘生丁等； 2）藥物溶液加硫酸使呈酸性后，在可見光下發(fā)射熒光(奎寧、安定等)； 3）藥物和溴反應(yīng)后，于可見光下發(fā)射熒光； 4）藥物和間苯二酚反應(yīng)后，發(fā)射出熒光及藥物經(jīng)其它反應(yīng)后，發(fā)射熒光。,（一）化學(xué)鑒別法,(4）氣體生成反應(yīng)鑒別法： 1）大多數(shù)的胺（銨）類藥物、酰脲類藥物以及某些酰胺類藥物，可經(jīng)強(qiáng)堿處理后，加熱，產(chǎn)生氨（胺）氣； 2）化學(xué)結(jié)構(gòu)中含硫的藥物，可經(jīng)強(qiáng)酸處理后，加熱，發(fā)生硫化氫氣體； 3）含碘有機(jī)藥物經(jīng)直火加熱，可生成紫色碘蒸氣；含醋酸酯和乙酰胺類藥物，經(jīng)硫酸水解后，加乙醇可產(chǎn)生乙酸乙酯的香味。,（5）使試劑退色的法： （6）測定生成物的熔點(diǎn)：,1紫外光譜鑒別法,原理：多數(shù)有機(jī)藥物分子中含有能吸收紫外可見光的集團(tuán)而顯示特征吸收光譜，可作為鑒別的依據(jù)。 優(yōu)缺點(diǎn)：光譜較為簡單，曲線形狀變化不大,專屬性較紅外光譜差，宜采用在指定溶劑中測定2-3個(gè)特定波長處的吸光度比值，以提高專屬性。,（二）光譜鑒別法,紫外光譜鑒別法,常用的方法有： 1）測定最大吸收波長，或同時(shí)測定最小吸收波長； 2）規(guī)定一定濃度的供試液在最大吸收波長處的吸收度； 3）規(guī)定吸收波長和吸收系數(shù)法； 4）規(guī)定吸收波長和吸收度比值法； 5）經(jīng)化學(xué)處理后，測定其反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特性。,紫外光譜鑒別法,國外藥典采用的紫外法的特點(diǎn)： USP（29）采用對照品法； BP（2005）采用一定波長范圍內(nèi)僅有一個(gè)最大吸收或一個(gè)最小吸收。 JP（15）同Ch.P.相似,2紅外光譜鑒別法,特點(diǎn)： （1）紅外光譜法是一種專屬性很強(qiáng)、應(yīng)用較廣（固體、液體、氣體樣品）的鑒別方法。 （2）主要用于組分單一、結(jié)構(gòu)明確的原料藥，特別適合于其他方法不易區(qū)分的同類藥物，如磺胺類、甾體激素類等.,紅外光譜鑒別法,方法： Ch.P與BP（2005）均采用標(biāo)準(zhǔn)圖譜對照法。如Ch.P對XX藥物的鑒別試驗(yàn)：“本品的紅外吸收圖譜應(yīng)與對造的圖譜（光譜集XX圖）一致”。 USP（29）采用對照品法； JP（15）采用規(guī)定條件下測定一定波數(shù)處的特征吸收峰。,（三）色譜鑒別法,原理： 利用不同物質(zhì)在不同色譜條件下，產(chǎn)生各自的特征色譜行為（Rf值或保留時(shí)間）進(jìn)行鑒別試驗(yàn)。（與對照品或已經(jīng)確證的已知藥品的色譜行為比較一致） 1.薄層色譜鑒別法 2.HPLC與GC鑒別法 3.質(zhì)譜鑒別法,四.鑒別試驗(yàn)的條件,鑒別試驗(yàn)是以所采用的化學(xué)反應(yīng)或物理特性產(chǎn)生的明顯的易于覺察的特征變化為依據(jù)。因此，能影響鑒別試驗(yàn)判定結(jié)果的特征變化的因素都是應(yīng)當(dāng)精心選擇和嚴(yán)格控制的。 也就是說，鑒別試驗(yàn)應(yīng)該是在規(guī)定條件下完成的，否則鑒別試驗(yàn)的結(jié)果是不可信的。,（一）溶液的濃度 主要指被鑒別藥物的濃度，及所用試劑的濃度。 由于鑒別試驗(yàn)多采用觀測沉淀、顏色或各種光學(xué)參數(shù)的變化，來判定結(jié)果，而藥物和有關(guān)試劑的濃度會(huì)直接影響上述的各種變化，必須嚴(yán)格規(guī)定溶液的濃度。,（二）溶液的溫度 溫度對化學(xué)反應(yīng)的影響很大，一般溫度每升高10，可使反應(yīng)速度增加2-4倍。 （三）溶液的酸堿度 許多鑒別反應(yīng)都需要在一定酸堿度的條件下才能進(jìn)行。溶液酸堿度的作用，在于能使各反應(yīng)物有足夠的濃度處于反應(yīng)活化狀態(tài)，使反應(yīng)生成物處于穩(wěn)定和易于觀測的狀態(tài)。,（四）干擾成分的存在 在鑒別試驗(yàn)中，如藥物結(jié)構(gòu)中的其它部分或藥物制劑中的其它組分也可參加鑒別反應(yīng)，產(chǎn)生干擾，應(yīng)選擇專屬性更高的鑒別反應(yīng)將其消除或?qū)⑵浞蛛x。,（五）試驗(yàn)時(shí)間 有機(jī)化合物的化學(xué)反應(yīng)和無機(jī)化合物不同，一般反應(yīng)速度較慢，達(dá)到預(yù)期試驗(yàn)結(jié)果需要較長的時(shí)間。 因?yàn)橛袡C(jī)化合物是以共價(jià)鍵相結(jié)合，化學(xué)反應(yīng)能否進(jìn)行，依賴于共價(jià)鍵的斷裂和新價(jià)鍵形成的難易，這些價(jià)鍵的更替需要一定的反應(yīng)時(shí)間和條件。同時(shí)在化學(xué)反應(yīng)過程中，有時(shí)存在著許多中間階段，甚至需加入催化劑才能啟動(dòng)反應(yīng)。因此，使鑒別反應(yīng)完成，需要一定時(shí)間。,1.中國藥典中既對藥品具有鑒別意義，又能反映藥品純雜程度的項(xiàng)目是( )。 A.外觀性狀 B. 檢查 C.鑒別 D.物理常數(shù) E.含量測定 2.藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的鑒別試驗(yàn)是判斷( ) A.藥品的純度 B.未知藥品的真?zhèn)?C. 已知藥品的真?zhèn)?D.藥品的療效 E.藥品的穩(wěn)定性 3 比旋度是指（ ）。 A.在一定條件下，偏振光透過長1dm，且含1g/mL旋光物質(zhì)的溶液時(shí)的旋光度