資源微生物實(shí)驗(yàn)實(shí)習(xí)報(bào)告

資源與應(yīng)用微生物實(shí)習(xí)報(bào)告學(xué)院：生命科學(xué)學(xué)院專業(yè)：應(yīng)用生物科學(xué)學(xué)號(hào)：20120459020姓名： 毛 德 昌酵母耐糖度、耐酒精度、耐酸度特性的檢測(cè)酵母菌是人類歷史文明中被利用最早的微生物。酵母菌可以在缺氧的環(huán)境中生存。酵母菌是一些單細(xì)胞的真菌，在自然也廣泛存在，主要生活在偏酸的潮濕的環(huán)境含糖環(huán)境中。在釀酒業(yè)中廣泛應(yīng)用。酵母主要通過芽殖的方式繁殖后代。在不同的培養(yǎng)基濃度條件下酵母的的生長速率以及酵母的活性有所不同。利用血球計(jì)數(shù)板對(duì)發(fā)酵后的酵母進(jìn)行計(jì)數(shù)，并計(jì)算酵母存活率，出芽率。血球計(jì)數(shù)板被用來對(duì)人體內(nèi)紅、白細(xì)胞進(jìn)行顯微計(jì)數(shù)只用，也常用來對(duì)細(xì)、真菌、酵母等微生物計(jì)數(shù)，是一種常見的生物學(xué)工具。每塊計(jì)數(shù)板由H形凹槽分為2個(gè)同樣的計(jì)數(shù)池。計(jì)數(shù)池兩側(cè)各有一支持柱，將特制的專用蓋玻片覆蓋其上，形成高0.10mm的計(jì)數(shù)池。計(jì)數(shù)池畫有長、寬各3.0mm的方格，分為9個(gè)大方格，每個(gè)大格面積為1.0毫米X1.0毫米=1.0平方毫米;容積為1.0平方毫米X0.1毫米=0.1立方毫米。其中，中央大方格用雙線分成25個(gè)中方格，位于正中及四角5個(gè)中方格是紅細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)域，每個(gè)中方格用單線劃分為16個(gè)小方格。四角的4個(gè)大方格是白細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)域，每個(gè)大方格用單線劃分為16個(gè)中方格。血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)區(qū)如下圖酵母死活計(jì)數(shù)和形態(tài)的觀察可用呂氏美蘭溶液對(duì)酵母進(jìn)行染色。呂氏堿性美藍(lán)染液是一種無毒的染料，其氧化型呈藍(lán)色，還原型為無色。用美藍(lán)染液對(duì)酵母菌的細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)，活細(xì)胞內(nèi)的還原性物質(zhì)能使美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型。1、 實(shí)驗(yàn)過程選用三株酵母分別對(duì)其進(jìn)行耐糖度，耐酒精度和耐酸度的特性進(jìn)行測(cè)定。按照如下配方配制耐性發(fā)酵培養(yǎng)基表一，酵母耐糖度培養(yǎng)基名稱 1 2 3葡萄糖（g/1000ml） 100 150 200硫酸銨（g/1000ml） 5 7.5 10磷酸二氫鉀（g/1000ml） 2 3 4 表二，酵母耐酸度培養(yǎng)基名稱 1 2 3去皮土豆 （g/L） 200 200 200葡萄糖 （g/L） 20 20 20PH 2 3 4表二，酵母耐酒精度培養(yǎng)基（每瓶200ml培養(yǎng)基；注無水乙醇在接種前加入培養(yǎng)基）名稱 1 2 3去皮馬鈴薯 （g/L） 200 200 200葡萄糖 （g/L） 20 20 20水 （ml/100ml） 60 50 50無水乙醇 （ml/100ml） 40 50 601.1 接種種子液的配制以及接種配制PDA種子液培養(yǎng)基，用去皮的鮮土豆20g，用80ml蒸餾水煮20min。濾去土豆，向?yàn)V液中加入2g葡萄糖，定容至100ml。分裝于6支試管中，每支試管15ml液體。分裝好后放入滅菌鍋中美軍30min。滅好菌后在超凈工作臺(tái)上從菌種管中挑適量的酵母菌接種于種子液中。接種好后28培養(yǎng)48h。1.2發(fā)酵液的接種培養(yǎng)好后現(xiàn)在顯微鏡下利用血球計(jì)數(shù)板對(duì)酵母染色后進(jìn)行計(jì)數(shù)。記錄活細(xì)胞和死細(xì)胞，將各個(gè)菌種液的活細(xì)胞濃度調(diào)成一致，向每個(gè)耐性梯度的培養(yǎng)基中接種入1ml種子菌液。在28條件下恒溫培養(yǎng)48h后，用同樣的方法對(duì)酵母進(jìn)行計(jì)數(shù)。2、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)公式： 注：（1）死細(xì)胞；（2）酵母菌體；（3）芽體實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)如下各表表三，種子液酵母計(jì)數(shù)菌數(shù)1號(hào)酵母21號(hào)酵母22號(hào)酵母活菌數(shù)（個(gè)/ml）1.61071.941071.38107死菌數(shù)（個(gè)/ml）5.410671065.2106總菌數(shù)（個(gè)/ml）2.141072.641071.38107 表四，種子液酵母死亡率1號(hào)酵母21號(hào)酵母22號(hào)酵母死亡率（）25.2326.5237.69將三株酵母菌的活菌數(shù)調(diào)到濃度均為個(gè)菌體，然后接種于三種耐性培養(yǎng)基的個(gè)梯度中，每個(gè)梯度1ml，即每個(gè)梯度中接種個(gè)菌體。培養(yǎng)48小時(shí)后計(jì)數(shù)結(jié)果如以下各表。 表五，酵母耐酸實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù) PH梯度菌株編號(hào)2.03.04.01活菌數(shù)（個(gè)/ml）2.81068.61061.62107死菌數(shù)（個(gè)/ml）51054.91061.0106總菌數(shù)（個(gè)/ml）3.31061.351071.72107死亡率（）15.1536.305.821活菌數(shù)（個(gè)/ml）2.251067.71061.4107死菌數(shù)（個(gè)/ml）3.51054.01062.1106總菌數(shù)（個(gè)/ml）2.61061.171071.61107死亡率（）13.534.1913.0422活菌數(shù)（個(gè)/ml）2.351068.251061.18107死菌數(shù)（個(gè)/ml）3.51053.61061.2106總菌數(shù)（個(gè)/ml）2.71061.1851071.3107死亡率（）12.9630.389.23表六，酵母耐糖實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù) 培養(yǎng)基糖含量 （g/L） 菌株編號(hào)1001502001活菌數(shù)（個(gè)/ml）7.21063.61065.4106死菌數(shù)（個(gè)/ml）4.01051.61062.4106總菌數(shù)（個(gè)/ml）7.61065.11067.8106死亡率（）5.2631.3730.7721活菌數(shù)（個(gè)/ml）1.61061.41061.6106死菌數(shù)（個(gè)/ml）8.010501.2106總菌數(shù)（個(gè)/ml）2.41061.41062.8106死亡率（）33.33042.8622活菌數(shù)（個(gè)/ml）4.61064.21064.0106死菌數(shù)（個(gè)/ml）1.351061.61061.0106總菌數(shù)（個(gè)/ml）5.951065.81065.0106死亡率（）22.6927.5920.00第 4 頁 共 5 頁表七，酵母耐酒精實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù) 酒精含量（）菌株編號(hào)4050601活菌數(shù)（個(gè)/ml）7.01063.41063.0106死菌數(shù)（個(gè)/ml）4.61062.81063.2106總菌數(shù)（個(gè)/ml）1.161076.21066.2106死亡率（）39.6645.1651.6121活菌數(shù)（個(gè)/ml）3.21065.41064.0105死菌數(shù)（個(gè)/ml）2.21062.01064.0105總菌數(shù)（個(gè)/ml）5.41067.41068.0105死亡率（）40.7427.0350.0022活菌數(shù)（個(gè)/ml）4.81063.61062.2106死菌數(shù)（個(gè)/ml）2.01062.01064.4106總菌數(shù)（個(gè)/ml）6.81065.61066.6106死亡率（）29.4135.7166.67三株菌的耐糖、耐酒精、耐酸度的高低的比較。（1） 隨著PH值的升高，三株菌株的存貨菌體數(shù)增加，三株菌中1號(hào)菌耐受力要強(qiáng)于21號(hào)、22號(hào)兩株菌的耐受力。（2） 隨著含糖量的增加菌體存活數(shù)越來越少，相比之下21號(hào)菌的耐糖度的能力要明顯低于1號(hào)菌和22號(hào)菌；在三株菌中22號(hào)菌的耐受力最強(qiáng)，在培養(yǎng)基的含糖量達(dá)到200g/L的時(shí)候每毫升的菌體存活數(shù)仍達(dá)到4.0106個(gè)菌體。（3） 隨著培養(yǎng)基中的酒精含量增加三株菌總體上呈現(xiàn)出活菌體數(shù)量減少的趨勢(shì)，即酒精度越低存活數(shù)量越多。但是似乎21號(hào)菌呈現(xiàn)出一個(gè)先上升后下降的趨勢(shì)，21號(hào)菌在培養(yǎng)基中酒精含量達(dá)到50%時(shí)，菌體在每毫升培養(yǎng)基中含量達(dá)到5.4106之多，似乎這濃度時(shí)其適合濃度。在三株菌中1號(hào)菌的耐酒精度的能力最強(qiáng)，當(dāng)培養(yǎng)基中的酒精度達(dá)到60%是存活菌體數(shù)達(dá)到3.0106個(gè)/ml，在三株菌中是存活數(shù)最多的。3、 討論酵母菌在