無菌環(huán)境和操作要求.ppt

無菌環(huán)境和操作要求,制程三科：何學才 2010年10月18日,董事長的經營理念,品質決定生存,品牌決定價值,通路決定成敗,人力決定發(fā)展,企圖決定版圖,什么是品質？,安全,符合顧客要求， 達到顧客滿意！,安心,風味,清潔,沒有危險物（生物、物理、化學）,清潔的進行生產（包括外包裝）,任何時候都是同樣喜愛的味道,品牌的力量,目 錄,1、無菌線灌裝流程,2、無菌系統(tǒng)的建立與維持,4、無菌線生產品質效果評估,5、附件,3、無菌線工藝關鍵控制點分析,hygienisches Umfeld 良好衛(wèi)生的生產環(huán)境,Sterile Abfll- & Verschlie- maschine 無菌灌裝與封蓋設備 (ACF-Anlage) (冷無菌灌裝設備),Kappen蓋,Luft 空氣,Flaschen 瓶,Flaschen- desinfektion 瓶殺菌,Getrnk 飲料,KZE o. Filtration 瞬時殺菌 或過濾,HEPA- Fer 高效空氣過濾器,Kappen- desinfektion 蓋殺菌,1、無 菌 線 灌 裝 流 程,2、無 菌 系 統(tǒng) 的 建 立 與 維 持,無菌的 產品液,無菌的 空瓶,無菌的 瓶蓋,無菌的 環(huán)境,無菌的 介質,無 菌 的 產 品 液,UHT滅菌,無菌罐緩存,無菌充填,無菌管路運輸,1、CIP清洗做好設備清洗，保證管路內是潔凈 （即：藥劑濃度、時間、溫度及清洗后設備水質狀況等）。 2、SIP做好設備的有效滅菌，保證設備的無菌 （即：藥劑濃度或過熱水溫度、時間等） 。 3、蒸汽障做好閥門的有效保護，保證閥切換時產品是無菌的 （即：蒸汽溫度、管路壓差等） 。,無菌的空瓶,無菌的瓶蓋,一定濃度的PAA藥劑進行空瓶滅菌，同時利用無菌水對殺菌后藥劑的清洗。 即：1、藥劑濃度、溫度、壓 力、殺菌接觸時間 2、無菌水壓力、接觸時 間、藥劑沖洗后殘留 狀況,一定濃度的PAA藥劑進行瓶蓋滅菌，同時利用無菌水和空氣對殺菌后藥劑的清洗及沖洗水吹干。 即：1、藥劑濃度、溫度、壓力、 殺菌接觸時間 2、無菌水壓力、接觸時間、 藥劑沖洗后殘留狀況 3、無菌空氣壓力,無 菌 的 環(huán) 境,SOP,COP,正壓罩風機過濾器壓差,液封系統(tǒng)或機械密封,氣囊或焊接,1、COP清洗做好設備表面清洗，保證設備表面的潔凈 （即：藥劑濃度、接觸時間、區(qū)域等）。 2、SOP做好設備的有效空間菌，保證設備的空間無菌 （即：藥劑濃度、時間、區(qū)域等） 。 3、機械密封及過濾器氣體過濾壓差，保證設備內無菌環(huán)境不會被 外界環(huán)境給污染 （即：蒸汽障溫度、區(qū)域壓差、氣囊壓力等） 。,無 菌 的 介 質,無菌水,藥 劑,無菌空氣,無菌氮氣,潔凈蒸汽,1、CIP清洗做好設備清洗，保證管路內是潔凈 （即：藥劑濃度、時間、溫度及清洗后設備水質狀況等）。 2、SIP做好設備的有效滅菌，保證設備的無菌 （即：藥劑濃度或過熱水溫度、時間等） 。 3、蒸汽障做好閥門的有效保護，保證閥切換時產品是無菌的 （即：蒸汽溫度、管路壓差等） 。,交流時間！,CCP1 無菌水系統(tǒng),CCP2 無菌空氣/氮氣系統(tǒng),CCP3 空瓶瓶殺菌系統(tǒng),CCP4 空瓶沖洗系統(tǒng),CCP5 蓋殺菌系統(tǒng),CCP6 蓋沖洗、吹干系統(tǒng),CCP7 UHT系統(tǒng),CCP8無菌罐系統(tǒng),CCP9 充填系統(tǒng),CCP10 封蓋系統(tǒng),CCP11 正壓罩系統(tǒng),3、無菌線工藝關鍵控制點分析,CCP1 無菌水系統(tǒng),CCP2 無菌空氣/氮氣系統(tǒng),CCP3 空瓶瓶殺菌系統(tǒng),CCP4 空瓶沖洗系統(tǒng),CCP5 蓋殺菌系統(tǒng),CCP6 蓋沖洗、吹干系統(tǒng),CCP7 UHT系統(tǒng),CCP8無菌罐系統(tǒng),CCP9 充填系統(tǒng),CCP10 封蓋系統(tǒng),CCP11 正壓罩系統(tǒng),CP1 吹瓶,CP2 噴碼,CP3 套標、包裝、碼箱,放松一下！喝杯水潤潤口！后面更精彩！,1、生產中無菌水、無菌產品液、無菌空氣、無菌 包材及成品的理化、微生物分析（略）。,2、生產過程前、中、后設備涂抹和空間落菌的微 生物分析（簡單介紹目的）。,3、大修后或設備大異常后，進行的無菌驗證確認 （重點介紹無菌驗證）。,4、無菌線生產品質效果評估,4-1無菌線涂抹的目的,1、監(jiān)控生產線微生物狀況,2、驗證生產線COP消毒效果,3、根據檢測結果指導改善消毒作業(yè),4、給產品微生物不良品的原因分析提供依據,4-2無菌線無菌驗證目的,a、為確認新安裝無菌線的殺菌能力，系統(tǒng)無菌性的維持能力，以便量產后對產品的微生物風險作更好的評估 b 、現有無菌線年度保養(yǎng)后的設備狀況進行驗證，為再生產提供保證 c 、對新瓶型、蓋型在無菌線上的適用性進行驗證，確保系統(tǒng)對新瓶型、蓋型的殺菌性,無菌線無菌驗證內容,S0 前提條件 對設備一些關鍵參數及報警聯(lián)動裝置進行確認，為后續(xù)驗證做好準備 S1 輔助系統(tǒng)測試 對系統(tǒng)的介質狀況進行初步判定，從而驗證系統(tǒng)在正常的CIP/SIP后能否制備出無菌的介質，為后續(xù)驗證做好準備 S2 煙霧測試 驗證正壓罩各區(qū)域壓力狀況，以及空間空氣流動狀況 S3 環(huán)境預測試 驗證系統(tǒng)經過正常的COP/CIP/SOP/SIP后正壓罩空間是否能達到無菌狀態(tài),S4 染色試驗 本測試為評估COP效能所用，驗證系統(tǒng)對正壓罩內設備表面的清洗效果，從而確認COP是否存在清洗死角，從而及時調整噴嘴位置，也為貼片試驗做好準備 S5 貼片試驗 本測試為評估SOP效能所用, 驗證系統(tǒng)對正壓罩內設備表面的殺菌效果，從而確認正壓罩無菌環(huán)境的建立狀況以及是否存在死角 S6 瓶內、外挑戰(zhàn)測試 本測試是為驗證瓶殺菌系統(tǒng)對瓶內殺菌的能力,S7 蓋內、外挑戰(zhàn)測試 本測試是為驗證蓋殺菌系統(tǒng)對瓶蓋內的殺菌能力 S8 灌水試驗 驗證系統(tǒng)連續(xù)生產的能力，并驗證UHT、無菌罐、充填系統(tǒng)的無菌狀況，為后續(xù)培養(yǎng)基驗證做好準備 S9 培養(yǎng)基測試 一 a、驗證設備年度保養(yǎng)后的無菌狀況，是否具備生產中性產品的能力 b、驗證新瓶型、新蓋型上機的適應性，是否具備可生產條件 c、新線UHT、無菌罐、充填系統(tǒng)的預測試,S10 培養(yǎng)基測試 二 判定新安裝無菌線是否具備可持續(xù)生產的能力 S11 培養(yǎng)基測試 三 a、驗證系統(tǒng)運行中無菌環(huán)境被破壞后，經過SOP后系統(tǒng)是否能繼續(xù)維持生產狀態(tài) b、驗證無菌罐無菌性最大維持時間 S12 成品測試 證明無菌生產線是具備商業(yè)生產的能力,無菌線各階段測試方案,Thanks for Your Kind Attention,The End,附件為無菌驗證各試驗方法詳 解，大家有興趣可以了解一下！,a. 產品UHT及無菌水UHT、無菌罐和一體機的SIP/生產 程序驗證，包括實際溫度（溫度試紙）、時間的檢測，以及最低溫度的預警程序，到達下限系統(tǒng)是否能夠自 動報警并停機 b. 瓶殺菌機噴嘴噴射壓力、洗瓶機無菌水噴射壓力自動檢測效果及壓力預警程序 c. 各蒸汽障的溫度預警程序，低于最低值系統(tǒng)是否失去無菌 d. 殺菌劑的濃度、溫度、流量預警程序，低于下限系統(tǒng)是否自動停機,S0 前提條件,S1輔助系統(tǒng)測試 （無菌水、無菌空氣及氮氣的微生物狀況）,系統(tǒng)在正常的CIP/SIP后對無菌水、無菌空氣/氮氣的總取樣口以及各使用點終端取樣口取樣進行微生物分析，各點無菌水取樣量至少1L，各點無菌空氣/氮氣取樣時間至少30min,S2煙霧測試,系統(tǒng)分別在生產、待機、清洗三種模式下 用煙霧發(fā)生器在壓力最高區(qū)域（充填區(qū)）發(fā)散煙霧，正壓罩各區(qū)壓力控制按照供應商提供說明書上壓力設定值的下限,S3正壓罩環(huán)境預測試,經過正常的COP/CIP/SOP/SIP后，對空間進行落菌、浮游菌采集、涂抹、塵埃粒子的檢測 落菌：每個區(qū)域2個點，時間30min； 浮游菌：每個區(qū)域1個點，時間30min； 涂抹：每個區(qū)域5個點，每個棉簽涂抹面積1dm2如涂抹充填頭、洗瓶頭或殺菌噴嘴每個棉簽5個噴嘴或充填/洗瓶頭； 塵埃粒子：每個區(qū)域1個點且要對每個風機進行檢漏,S4染色試驗,1、稱取0.54g羅丹明用100ml異丙醇溶解 2、稱取1.8g果膠+100g白砂糖+300ml80的熱水充分溶解 3、稱取24g橙濃縮汁+100ml水中充分溶解 4、將上述3種液體混合用噴壺噴灑在正壓罩內任意區(qū)域 5、噴灑后靜止30min左右（具體時間看溶液是否已粘附在設備表面） 6、啟動COP程序,S5貼片試驗,1、準備鋼片100片，鋼片粗糙度的選擇盡量接近設備表面的粗糙度 2、用枯草芽孢桿菌接種鋼片：105和106各50片 (接種量10l-100l) 3、鋼片正常風干后，準備進行測試，先進行低濃度后進行高濃度試驗 4、基于無菌室/潔凈室的尺寸,在其無菌區(qū)域確定至少30個對于系統(tǒng)滅菌重要的位置,即那些可能導致瓶蓋、鋁片、瓶子和產品污染的位置（可參考染色試驗的結果）,和在清潔和殺菌時絕對有必要滅菌的位置,例如:沖洗閥、灌注閥、下蓋槽和機星輪等裝置的表面.,5、在一張灌裝無菌區(qū)的圖紙上將上述位置標出并標號.并將鋼片編號和圖紙一一對應，然后進行鋼片的懸掛 6、在懸掛鋼片前在50片鋼片中隨機抽取5片鋼片進行陽性對照，其方法為：將鋼片取回后分別放入5個已滅菌好的裝有100ml無菌水的盒子里進行充分振蕩，并進行梯度稀釋，至少稀釋5個梯度，分別進行膜過濾，培養(yǎng)后計數從而得到鋼片的初始帶菌量 7、鋼片懸掛后，根據供應商所提供說明書用清洗滅菌條件的下限對無菌線設備進行一次COP和SOP 8、把所有鋼片依次放入已編號已滅菌且裝有無菌水的盒子里，到實驗室充分振蕩后進行膜過濾，培養(yǎng)后記錄每片鋼片殘留的菌量 9、106的實驗同105一樣,驗證判定：用陽性對照檢測的含菌量和殺菌后鋼片殘留的菌量進行對照，從而判定系統(tǒng)的殺菌能力，衰減計數法 LOG(RAVE)=LOG(Rc/Nsample)LOG(Sc/ Ntest) Rc: 陽性對照樣帶菌總數 Nsample: 陽性對照樣數量 Sc : 測試樣殘留帶菌總數 Ntest :測試樣數量 LOG(RMIN)LOG(Rc/Nsample)LOG(Sc) Sc : 測試樣的殘留帶菌數最大樣品的菌落數,S6瓶內、外挑戰(zhàn)測試,瓶內挑戰(zhàn)測試： 1、準備在該線生產的空瓶480只以上（具體數量至少為瓶殺菌噴嘴數的4倍） 2、用枯草芽孢桿菌接種空瓶：105和106各240瓶以上（殺菌噴嘴數的2倍），(接種量10l-100l) 接種位置按照不同瓶型來定，盡量接種在瓶內凹陷不易殺菌的地方，在無菌線生產的所有瓶型都需做此驗證 3、空瓶正常風干后，準備進行測試，先做低濃度后做高濃度，系統(tǒng)必須先做好COP/CIP/SOP/SIP，且無菌罐中準備好無菌水,4、測試前105和106的空瓶各隨機抽取5個空瓶，到實驗室進行陽性對照，其方法：到實驗室將空瓶灌裝100ml無菌水并充分振蕩清洗，然后進行梯度稀釋，至少稀釋5個梯度，然后分別進行膜過濾，從而得出空瓶的初始帶菌量 5、將空瓶手動放入輸送帶進行殺菌（根據供應商所提供說明書用清洗滅菌條件的下限）、洗瓶、充填（充填無菌水200ml左右）、封蓋，106的空瓶重復以上步驟 6、將灌裝好的產品到實驗室充分振蕩后依次進行膜過濾，培養(yǎng)后得出空瓶殺菌后殘留菌量,瓶外挑戰(zhàn)測試： 1、準備在該線生產的空瓶100只以上 2、用枯草芽孢桿菌接種空瓶：105接種100瓶以上，接種位置按照不同瓶型來定，盡量接種在瓶外凹陷不易殺菌的地方，接種后請用記號筆作好標致，在無菌線生產的所有瓶型都需做此驗證 3、空瓶正常風干后，手動掛到輸送帶準備測試，測試前系統(tǒng)需已做COP/CIP/SOP/SIP 4、測試前隨機抽取105空瓶5個，到實驗室進行陽性對照，其方法：到實驗室將空瓶接種處剪開放入已滅菌好的100ml無菌水的盒子中充分振蕩清洗，然后進行梯度稀釋，至少稀釋5個梯度，然后分別進行膜過濾，從而得出空瓶的初始帶菌量,5、空瓶經過正常的殺菌程序后（根據供應商所提供說明書用清洗滅菌條件的下限），取出到實驗室將接種標志點剪出放入已滅菌好含有無菌水的盒子中充分振蕩清洗后膜過濾，或用已滅菌的棉簽來涂抹接種標志點，將棉簽放入放入已滅菌好含有無菌水的盒子中充分振蕩清洗后膜過濾，從而得出瓶外殺菌后菌殘留量 瓶內外的驗證判定方法和S5貼片試驗的判定方法相同,S7蓋內、外挑戰(zhàn)測試,蓋內挑戰(zhàn)測試 1、準備在該線生產的瓶蓋200只以上 2、用枯草芽孢桿菌接種瓶蓋：105和106各100個以上，(接種量10l-100l) 接種位置蓋頂部、內封、外封、螺紋四個點均分（每個位置約25個左右），并做好區(qū)分標志 3、瓶蓋正常風干后，準備進行測試，先做105后做106，系統(tǒng)必須先做好COP/CIP/SOP/SIP ，無菌罐中并存有無菌水,4、測試前105和106的瓶蓋各隨機抽取5個瓶蓋，到實驗室進行陽性對照，其方法：到實驗室將瓶蓋分別放入裝有100ml的無菌水中，進行充分振蕩清洗，然后進行梯度稀釋，至少稀釋5個梯度，然后分別進行膜過濾，從而得出瓶蓋的初始帶菌量 5、將瓶蓋手動放入蓋整列機，進行殺菌（根據供應商所提供說明書用清洗滅菌條件的下限）、沖洗、吹干、封蓋，106的瓶蓋重復以上步驟，建議接種蓋子和未接種蓋子用兩種顏色蓋子作區(qū)分 6、將封蓋后的產品（200ml無菌水）到實驗室充分振蕩后進行膜過濾，旋開的瓶蓋（指蓋螺紋處接種的蓋子）也放入濾杯中清洗，培養(yǎng)后得出瓶蓋殺菌后殘留菌量,蓋外挑戰(zhàn)測試 1、準備在該線生產的蓋子100只以上 2、用枯草芽孢桿菌接種瓶蓋：105接種100個以上，接種位置蓋外部不易殺菌點，接種后請用記號筆作好標致 3、瓶蓋正常風干后，手工放入蓋準備測試（接種蓋和未接種蓋顏色需做區(qū)分），測試前系統(tǒng)需已做COP/CIP/SOP/SIP,4、測試前隨機抽取105瓶蓋5個，到實驗室進行陽性對照，其方法：到實驗室將直接放入已滅菌好的100ml無菌水的盒子中充分振蕩清洗，然后進行梯度稀釋，至少稀釋5個梯度，然后分別進行膜過濾，從而得出空瓶的初始帶菌量 5、瓶蓋經過正常的殺菌程序（根據供應商所提供說明書用清洗滅菌條件的下限）后到實驗室將瓶蓋旋開直接放入已滅菌好含有無菌水的盒子中充分振蕩清洗后膜過濾，或用已滅菌的棉簽來涂抹接種標志點，將棉簽放入放入已滅菌好含有無菌水的盒子中充分振蕩清洗后膜過濾，從而得出蓋外殺菌后菌殘留量 蓋內外的驗證判定方法和S5貼片試驗的判定方法相同,S8灌水測試,模擬正常生產，在正常的COP/CIP/SOP/SIP后，UHT生產無菌水，進行正常的無菌水灌裝，至少灌裝10000瓶以上，各時段分別取灌裝好的無菌水樣，生產前、中、后各50瓶，到實驗室進行膜過濾；生產過程中要進行無菌水、無菌氣的取樣；生產結束后進行涂抹、落菌、浮游菌以及塵埃粒子的檢測（其無菌水/氣、涂抹、落菌塵埃等方法和S1 S3一樣）,S9 LG培養(yǎng)基測試 一,1、參考LG培養(yǎng)基配制標準調配LG培養(yǎng)基，根據需要調配相應的噸數，經過UHT 138*32s殺菌后存放于無菌灌中 2、新線、舊生產線年度保養(yǎng)后（每年一次）、新瓶型/蓋型的投產需進行此實驗，系統(tǒng)在正常的COP/CIP/SOP/SIP后準備進行培養(yǎng)基灌裝 3、若是新瓶型則連續(xù)灌裝10000瓶（5000瓶滿瓶、5000瓶半瓶） 4、若是新線、舊生產線的年度保養(yǎng)，開機灌裝5000瓶（滿瓶），24h后再灌裝5000瓶（半瓶） 5、培養(yǎng)基灌裝后放入30-35的環(huán)境中保溫，3天后將全部產品倒置，7天后進行全檢，若沒問題14天再進行全檢,S10 LG培養(yǎng)基測試 二,1、參考LG培養(yǎng)基配制標準配置LG培養(yǎng)基20噸，經過UHT 138*32s殺菌后存放于無菌灌中 2、系統(tǒng)在進行正常的COP/CIP/SOP/SIP后準備進行灌裝 3、開機灌裝5000瓶（半瓶）；第24h灌裝5000瓶（半瓶）；第48h灌裝10000瓶（5000瓶滿瓶、5000瓶半瓶）；第72h灌裝10000瓶（5000瓶滿瓶、5000瓶半瓶） 4、72h灌裝結束后設備保持無菌狀態(tài)待培養(yǎng)基測試三使用 5、培養(yǎng)基灌裝后放入30-35的環(huán)境中保溫，3天后將全部產品倒置，7天后進行全檢，若沒問題14天再進行全檢,S11 LG培養(yǎng)基測試 三,1、在培養(yǎng)基測試 二后繼續(xù)進行，依次打開洗瓶、充填、封蓋這三個區(qū)域的窗戶一分鐘，每次只能打開某區(qū)域的一扇窗戶，然后進行正常的SOP后進行LG培養(yǎng)基灌裝，灌裝5000瓶（3000瓶半瓶、2000瓶滿瓶）S11 LG培養(yǎng)基測試 三 2、所有測試結束后，無菌罐剩余培養(yǎng)基不要排放，繼續(xù)維持無菌狀態(tài)，存放120h后排放，排放口取樣觀察培養(yǎng)基是否變質 3、培養(yǎng)基灌裝后放入30-35的環(huán)境中保溫，3天后將全部產品倒置，7天后進行全檢，若沒問題14天再進行全檢,S12成品測試,1、生產線經過正常的COP/CIP/SOP/SIP后準備生產，產品（中性）正常生產前、中、后隨機取樣共100000瓶 2、產品放入30-35的環(huán)境中保溫，14天后全檢 3、成品微檢、保溫、常溫取樣30min/次；生產中無菌水、無菌空氣/氮氣需取樣；生產結束涂抹、落菌、浮游菌檢測（具體方法同S1、S3）,S0前提條件驗收標準： 所需檢測點的預報警及其聯(lián)動裝置正常S1輔助系統(tǒng) S1輔助系統(tǒng)驗收標準： 無菌水1cfu/1000ml 無菌空氣1cfu/30min 無菌氮氣1cfu/30min,S0-S12驗收標準,S2煙霧測試標準： 充填區(qū)向封蓋區(qū)流； 充填區(qū)向洗瓶區(qū)流； 洗瓶區(qū)向殺菌區(qū)流動 S3環(huán)境預測試標準 落菌：1cfu/皿/30min； 浮游菌：1cfu/皿/30min； 涂抹：1cfu/棉簽； 塵埃粒子：充填、封蓋、洗瓶達到100級 殺菌區(qū)達到1000級，風機檢漏為0,S4染色試驗驗收標準： COP后干凈、無可見的殘留 S5貼片測試驗收標準： SOP殺菌能力RAVE5log 且 R MIN3.0log且3.0logR MIN4.0log的樣品數量占比需2%的測試樣品數量 S6瓶內外挑戰(zhàn)測試驗收標準： 瓶內殺菌能力RAVE5log且 RMIN3.0 log且3.0logRMIN4.0log的樣品數量占比需2%的測試樣品數量； 瓶外殺菌能力RAVE4log且 RMIN2.0log且2.0logR MIN3.0log的樣品數量占比需2%的測試樣品數量,S7蓋內外挑戰(zhàn)測試標準： 蓋內殺菌能力RAVE5log且 RMIN3.0log且3.0logRMIN4.0log的樣品數量占比需2%的測試樣品數量； 蓋外殺菌能力RAVE4log且 RMIN2.0log且2.0logR MIN3.0log的樣品數量占比需2%的測試樣品數量 S8灌水測試標準： 灌裝的無菌水產品膜過濾不得有菌檢出; 無菌水、無菌空氣、涂抹、落菌、浮游菌都不得有菌檢出；空間潔凈度：充填、洗瓶、封蓋區(qū)為100級，殺菌區(qū)為1000級,S9培養(yǎng)基測試一驗收標準： 變質品1瓶 S10培養(yǎng)基測試二驗收標準： 變質品3瓶，且第72h灌裝的10000瓶中變質品1瓶 S11培養(yǎng)基測試三驗收標準： a、變質品1瓶b、120h后無菌罐中的培養(yǎng)基排放取樣觀察無變質 S12成品測試驗收標準： a、100000瓶產品放入30-35的環(huán)境中保溫，14天后全檢，變質品1瓶 b、成品微檢、無菌水/氣、涂抹、落菌全部不得有菌檢出 c、塵埃粒子：充填、封蓋、洗瓶達到100級 殺菌區(qū)達到1000級,注意事項,1、枯草芽孢桿菌的購入需有第三方檢驗報告，購回的菌種菌液濃度確定，詳見附件一； 鋼片、空瓶、蓋的挑戰(zhàn)測試中所接種菌量105、106都是指風干后鋼片、瓶、蓋上的帶菌量，所以接種時需注意考慮到風干的損失（一般接種至風干枯草芽孢菌量損