結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷PPT課件.ppt

結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室涂片鏡檢技術(shù),1,.,結(jié)核病基本情況： （1）,結(jié)核病是一個(gè)古老的疾病，至今仍然嚴(yán)重威脅著人類健康。 近十幾年來，由于結(jié)核菌的耐藥性、 HIV/TB雙重感染 移民（流動(dòng)人口）問題 使全球結(jié)核病控制工作面臨嚴(yán)重挑戰(zhàn)。,2,全球結(jié)核病告急,據(jù)世界衛(wèi)生組織估計(jì)目前全球約有： 1/3人口（20億）感染結(jié)核菌； 2000萬結(jié)核病人； 每年有800萬-1000萬新發(fā)病例； 每年300萬人死于結(jié)核?。?3,我國結(jié)核病現(xiàn)狀,我國的結(jié)核病疫情依然十分嚴(yán)重，是世界上結(jié)核病患病率最高的22個(gè)國家之一。 是耐藥結(jié)核病最多的全球27個(gè)國家之一。 每年新登記的結(jié)核病患者約130萬。,4,我國結(jié)核病現(xiàn)狀,2000年全國結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào) 查初步結(jié)果顯示： 全國受結(jié)核菌感染人口超過5.6億； 全國現(xiàn)有傳染性肺結(jié)核病人200萬，傳染性肺結(jié)核患病率為157.8/10萬。 結(jié)核病死亡率為9.8/10萬，在各種死亡原因中占第11位。 結(jié)核菌耐藥率：27.8%，初始耐藥率18.6%，獲得性耐藥率：46.5%。INH:17.6%，SM：17.3%，RFP：16.6%，EMB：1.5%，MDR：10.7%。 非結(jié)核分枝桿菌感染：11%,5,我國結(jié)核病現(xiàn)狀 我國歷次流調(diào)疫情,6,結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查的重要作用,是結(jié)核病臨床診斷和治療的重要依據(jù) 是直接發(fā)現(xiàn)病原菌的診斷方法，比影象學(xué)、免疫學(xué)等檢查具有更高的特異性 是確定、調(diào)整化療方案的重要依據(jù) 是國家結(jié)核病控制規(guī)劃（NTP）的重要組成部分 是發(fā)現(xiàn)傳染源的最主要途徑和手段 是考核療效、評價(jià)防治效果的可靠指標(biāo),7,分 枝 桿 菌 生 物 學(xué) 基 礎(chǔ),8,概 述,結(jié)核分枝桿菌是1882年郭霍（Robert Koch）從肺結(jié)核病人痰標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)。是人類結(jié)核病的主要病原菌。,9,分類,結(jié)核分枝桿菌屬原核生物界、厚壁菌門、裂植菌綱、放線菌目、分枝桿菌科的分枝桿菌屬，分枝桿菌屬種類甚多，目前已命名的有200多種，一般可分為緩慢生長和快速生長兩大類。,10,概 述,分枝桿菌呈分支狀生長， 營養(yǎng)要求比普通細(xì)菌高，是一種生長緩慢的革蘭氏陽性桿菌。 經(jīng)石炭酸復(fù)紅染液著色后，不被鹽酸酒精脫色，故稱此類細(xì)菌為抗酸菌。,11,分枝桿菌分類,12,結(jié)核分枝桿菌結(jié)構(gòu),結(jié)核分枝桿菌組成： 細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、核物質(zhì),13,細(xì) 胞 壁,厚度為1035nm，較一般細(xì)菌的細(xì)胞壁厚。 含有大量脂類，具有堅(jiān)韌性和疏水性。 功能： 保護(hù)細(xì)菌的固有形態(tài) 抵抗酸堿物質(zhì)及宿主細(xì)胞對細(xì)菌的破壞和 殺傷 如果細(xì)胞壁有缺陷，細(xì)菌只能在高滲環(huán)境下生存，則稱此類細(xì)菌為L型細(xì)菌。,14,細(xì) 胞 膜,細(xì)胞壁內(nèi)層圍繞于細(xì)胞質(zhì)外的富于彈性的半透膜。 主要成分是脂類（磷脂）和蛋白質(zhì)。 功能： 細(xì)菌與外界環(huán)境進(jìn)行物質(zhì)交換 在細(xì)胞內(nèi)一系列代謝活動(dòng)中起重要作用,15,菌 體 成 分,脂類 多糖 蛋白質(zhì) 核酸 鹽類,16,脂 類（1）,結(jié)核菌體脂類含量比其他細(xì)菌高，占細(xì)胞壁干重的60，是引起結(jié)核病特征性變化與表現(xiàn)的物質(zhì)基礎(chǔ)。 脂質(zhì)含量與細(xì)菌毒力相關(guān)，毒力強(qiáng)的Mtb含脂最高。 脂質(zhì)只要有磷脂、脂肪酸、蠟質(zhì)等成分，多與蛋白質(zhì)、多糖以結(jié)合形式存在。,17,脂 類（2）,磷脂：刺激機(jī)體單核細(xì)胞增生，增強(qiáng)菌體成分誘導(dǎo)機(jī)體致敏作用。 索狀因子：與Mtb毒力密切相關(guān)。 硫脂 蠟質(zhì)：占脂質(zhì)總量48，分A、B、C、D。 結(jié)核菌酸：促進(jìn)機(jī)體形成結(jié)核結(jié)節(jié)。 分支菌酸：為結(jié)核菌菌體的重要成分，與結(jié)核菌的抗酸性有關(guān)。,18,多 糖,由阿拉伯半乳聚糖、阿拉伯甘露聚糖、甘露聚糖和葡聚糖等組成。 多以脂類、蛋白質(zhì)和核酸等結(jié)合形式存在。 是免疫反應(yīng)的重要抗原物質(zhì)。,19,蛋 白 質(zhì),Mtb含多種蛋白質(zhì)組分，由不同菌體蛋白及活菌在分泌過程中分泌于細(xì)胞外的多種蛋白組成。 結(jié)核菌的主要抗原性物質(zhì)。 結(jié)核菌素、PPD為多種蛋白的復(fù)合抗原，可刺激機(jī)體免疫應(yīng)答。,20,核 酸,RNA含量比DNA高45倍。 RNA分布于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，DNA存在于細(xì)胞核物質(zhì)中。 DNA是遺傳物質(zhì)，將遺傳信息傳給子代，并指導(dǎo)RNA的合成。 RNA是蛋白質(zhì)和其他細(xì)胞成分合成必須的物質(zhì)。,21,結(jié)核分枝桿菌基因組,結(jié)核分枝桿菌DNA中約含4000個(gè)基因組。 結(jié)核分枝桿菌為2.5109道爾頓, 卡介苗株為2.8109道爾頓 結(jié)核分枝桿菌H37Rv基因組全序列共含4.4106堿基對，平均鳥嘌呤+胞嘧啶含量（GC）為65.6。,22,鹽 類,鈣、鉀、鎂、鐵、磷等，約占菌體成分的 6。,23,營養(yǎng)與發(fā)育,結(jié)核菌是需氧菌，但在含有比較低氧的環(huán)境下也能生存，比如骨結(jié)核，淋巴結(jié)核。 在少量二氧化碳的環(huán)境中生長的也很好。 結(jié)核菌生長的適宜溫度和人體相近為370C 結(jié)核菌生長所必需的元素有氧、碳、氮、氫、磷、鉀、鎂等。,24,結(jié)核分枝桿菌形態(tài),結(jié)核菌是兼性需氧菌，無鞭毛、莢膜，無運(yùn)動(dòng)能力； 形狀：0.3 - 0.61 - 4微米的細(xì)長桿狀，直或稍彎，鏡下常堆積成團(tuán)、成束、排列雜亂無章，也有呈串珠樣、鏈狀、索狀者。 革蘭氏染色陽性，萋-尼氏染色鏡下的抗酸桿菌為淡蘭色背景下的紅色或粉紅色細(xì)長桿菌。熒光染色鏡下的抗酸桿菌在暗色背景下呈黃綠色或橙色熒光。,25,抗酸性是分枝桿菌的重要特征。其化學(xué)基礎(chǔ)是分枝菌屬的細(xì)胞壁脂質(zhì)含量較高，并含有大量分枝菌酸。 抗酸性與細(xì)菌細(xì)胞壁的完整性關(guān)系密切，若菌體自溶（如標(biāo)本保存時(shí)間過長、溫度過高）、結(jié)核菌的異型相（如：L-型菌、干酪或膿液中的結(jié)核菌）可能失去抗酸性。,抗 酸 性,26,生 長 特 性,生長適宜溫度37C，PH6.8-7.2。營養(yǎng)要求較高。在常用的羅氏（Lowenstein-Jensen）培養(yǎng)基上生長的菌落粗糙、凸起、致密，有表面皺折，呈顆粒、結(jié)節(jié)或菜花樣，乳白色或米色，不透明。 結(jié)核菌生長緩慢，在一般培養(yǎng)基上分裂一代需要10多小時(shí)，根據(jù)接種菌量的多少，一般10-30天肉眼可見菌落生長。,27,結(jié)核病的診斷 診斷發(fā)展階段：經(jīng)驗(yàn)性、X線影像，細(xì)菌學(xué)診斷、免疫學(xué)（細(xì)胞、體液）診斷、分子生物學(xué)診斷。 控制結(jié)核病的流行，診斷是所有措施中最為關(guān)鍵的一步。,28,實(shí)驗(yàn)室檢查,結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室檢查包括細(xì)菌學(xué)檢查以及近年來在分子生物學(xué)和免疫學(xué)等領(lǐng)域建立的檢測新技術(shù)。 細(xì)菌學(xué)檢查是結(jié)核病確診和治療的主要依據(jù)。 檢測新技術(shù)為可疑結(jié)核病患者的早期診斷與合理治療帶來新的希望。,29,結(jié)核病細(xì)菌學(xué)診斷,30,結(jié)核病細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室布局原則,1、結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查要有獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)室，不得與其他實(shí)驗(yàn)室混用，最好為P3級實(shí)驗(yàn)室； 2、培養(yǎng)基制備、洗刷等相對潔凈的操作與涂片鏡檢、培養(yǎng)前處理、藥敏試驗(yàn)等污染操作要有獨(dú)立分開的場所，最好分別在專用的房間進(jìn)行； 3、基層只從事涂片鏡檢的實(shí)驗(yàn)室只擁有一間獨(dú)立房舍的情況下，相對潔凈區(qū)（鏡檢區(qū)、登記區(qū)）與污染區(qū)（涂片、染色區(qū)）要有明顯區(qū)分。,31,基層鏡實(shí)驗(yàn)室布局范例,染色池,收集標(biāo)本 用的桌子,工作臺,采 光 用 窗 戶 （固定）,實(shí)驗(yàn)室門,試 劑 柜,顯微鏡,記錄用 的桌子,可以開關(guān)的窗戶,32,廢棄標(biāo)本和污染物的處理,廢棄標(biāo)本、痰盒和污染物均須經(jīng)高壓蒸汽滅菌后方能丟棄或清洗； 如需焚燒處理，須置于焚燒爐內(nèi)徹底焚化。焚化不徹底或暴露焚燒是危險(xiǎn)的； 專業(yè)化處理 試驗(yàn)操作工作面應(yīng)以3%石炭酸或其他可靠的消毒液擦拭，再用紫外線滅菌燈照射2小時(shí),33,主要方法,1、痰涂片抗酸染色、鏡檢技術(shù) 2、分枝桿菌分離培養(yǎng)技術(shù) 3、分枝桿菌快速培養(yǎng)技術(shù) 4、藥物敏感性實(shí)驗(yàn)技術(shù) 5、分枝桿菌菌種鑒定技術(shù),34,.,痰標(biāo)本采集 (一),容器：采用WHO推薦的國際通用螺旋蓋痰瓶，或可密封塑料盒、蠟紙盒收集痰標(biāo)本（參考規(guī)格：直徑4 cm，高度2 cm）。容器上應(yīng)清晰標(biāo)注患者姓名、病例號、檢查項(xiàng)目。,35,.,痰標(biāo)本采集 (二),按采集的時(shí)間，可將標(biāo)本分為三類 即時(shí)痰：就診時(shí)深呼吸后咳出的痰液； 晨痰：患者晨起立即用清水漱口后，咳出的第2口、第3口痰液； 夜間痰：送痰前一日，患者晚間咳出的痰液；,合格的痰標(biāo)本：應(yīng)是患者深呼吸后，由肺部深處咳出的分泌物。包括干酪痰、粘液痰和血痰。,36,.,對疑似肺結(jié)核病者，臨床醫(yī)護(hù)人員應(yīng)通過解釋，使其充分了解標(biāo)本性狀、質(zhì)量對相應(yīng)檢查項(xiàng)目的重要性，示范并指導(dǎo)其掌握從肺部深處咳痰的方法；如患者識字，可提供宣教材料。,痰標(biāo)本采集 (三),37,.,如何正確留痰,查痰對于結(jié)核病的診斷是非常重要的，通過痰檢可以知道您是否痰中帶菌。如果痰中帶有結(jié)核菌說明您患有肺結(jié)核，具有傳染性，應(yīng)該及時(shí)遵醫(yī)囑治療。 送檢痰標(biāo)本的質(zhì)量直接影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。請您一定按照下列要求和方法留取合格的痰標(biāo)本。每個(gè)痰盒應(yīng)分別留取12口痰，請不要將1口痰分開放到2或3個(gè)痰盒中。 正確的咳痰方法： 1、咳嗽前應(yīng)緩慢地深吸氣，吸氣后稍屏氣片刻。 2、軀干略向前傾，兩側(cè)手臂屈曲，平放在兩側(cè)胸壁下部，內(nèi)收并稍加力。 3、咳嗽時(shí)腹肌用力快速收縮，使腹壁內(nèi)陷。一次深吸氣，可連續(xù)咳嗽三聲。 4、停止咳嗽后，收縮腹肌將剩余的氣體盡量呼盡。 5、重復(fù)緩慢吸氣動(dòng)作或平靜呼吸片刻，準(zhǔn)備再次咳嗽的動(dòng)作。 * 注意：部分人如果忽然深吸氣容易誘發(fā)咳嗽，您可以嘗試緩慢或分幾次吸氣，爭取肺泡內(nèi)充分充氣，以增加咳嗽的效率。在這一過程中，要注意動(dòng)作的連貫性，一氣呵成。同時(shí)，也可以叩擊前胸，或由家屬協(xié)助叩擊后背胸壁。這樣震動(dòng)支氣管內(nèi)的分泌物，能夠增加咳嗽排痰的力度。,38,患者留取的痰標(biāo)本，應(yīng)由檢驗(yàn)人員或經(jīng)過培訓(xùn)的專人目視檢查標(biāo)本性狀質(zhì)量(特別是用于初次診斷的痰標(biāo)本)：標(biāo)本量一般在35 ml，標(biāo)本性狀屬于干酪痰、褐色血痰或含少量新鮮血液的血痰、粘液痰者為合格的標(biāo)本；唾液為不合格標(biāo)本。 確定診斷檢查時(shí)痰標(biāo)本不合格者，醫(yī)務(wù)人員應(yīng)予以進(jìn)一步指導(dǎo)并要求其重新送檢。 進(jìn)行AFB涂片檢查時(shí)應(yīng)在登記本和檢驗(yàn)報(bào)告單上注明標(biāo)本性狀，以供分析結(jié)果時(shí)參考。,痰標(biāo)本采集 (四),39,.,痰標(biāo)本采集 (五),注意：由于當(dāng)患者咳嗽、咳痰時(shí)，易產(chǎn)生含有結(jié)核菌的氣溶膠，感染周邊人群的機(jī)率較高，故采集痰標(biāo)本時(shí)應(yīng)在遠(yuǎn)離人群的開放空間進(jìn)行，或在通風(fēng)良好的室內(nèi)進(jìn)行。,40,1、干酪痰：標(biāo)本外觀以黃色(或奶酪色)、膿樣、團(tuán)塊狀的肺部分泌物為主，粘度較粘液痰低，制片時(shí)較易涂抹；涂片染色后鏡檢，可發(fā)現(xiàn)大量膿性炎癥細(xì)胞、肺上皮脫落細(xì)胞。由于此類標(biāo)本是由肺部深處咳出，對肺結(jié)核的診斷最有價(jià)值，故AFB的檢出率較高。,痰標(biāo)本性狀 (一),41,.,痰標(biāo)本性狀 (二),2、血痰：此類標(biāo)本是因粘液痰或干酪痰標(biāo)本中混有血液而形成，顏色為褐色或深褐色、鮮紅色或伴有血絲；涂片染色后鏡檢除能夠觀察到粘液痰或干酪痰的細(xì)胞特征外，含新鮮血液的標(biāo)本中可見到被染色的血細(xì)胞。由于含血標(biāo)本易干擾AFB鏡檢的結(jié)果，故在制片時(shí)應(yīng)盡量避免挑取含血標(biāo)本。,42,3、粘液痰：標(biāo)本外觀以白色、粘稠度較高的肺部和支氣管分泌物為主，制片時(shí)需仔細(xì)涂抹；涂片染色后鏡檢時(shí)，鏡下可見支氣管內(nèi)膜纖毛柱狀上皮細(xì)胞(細(xì)胞較長且形態(tài)不規(guī)則、細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)著色均較深，細(xì)胞一端可見著色較淺的纖毛)，伴有少量肺上皮脫落細(xì)胞(多數(shù)形態(tài)不規(guī)則、細(xì)胞核較小且著色較細(xì)胞質(zhì)深，核質(zhì)比大于 1:3)、膿性炎癥細(xì)胞(卵圓形、細(xì)胞核占細(xì)胞比例較大且著色較深，核質(zhì)比低于 1:1)、口腔脫落細(xì)胞及口腔寄生菌。此類標(biāo)本的AFB檢出率較唾液高。,痰標(biāo)本性狀 (三),43,.,痰標(biāo)本性狀 (四),4、唾液：目視觀察標(biāo)本整體外觀，以透明或半透明水樣、粘度較低的口腔分泌物為主，標(biāo)本中有時(shí)伴有氣泡；涂片染色鏡檢時(shí)，鏡下可見少量口腔上皮脫落細(xì)胞(形態(tài)不規(guī)則、細(xì)胞核著色較細(xì)胞質(zhì)深，核質(zhì)比接近或大于 1:2)和口腔內(nèi)寄生菌，有時(shí)可見食物殘?jiān)?由于此類標(biāo)本進(jìn)行AFB檢查時(shí)的檢出率很低，用于對患者確定診斷時(shí)是不合格的標(biāo)本。,44,抗酸染色原理,分枝桿菌等抗酸菌菌體成分含脂類物質(zhì)較多(如：結(jié)核分枝桿菌，細(xì)菌菌體干重的60是脂類成分) ，且細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)較復(fù)雜。 分枝桿菌細(xì)胞壁中的分枝菌酸在苯酚的滲透性助染作用下，與首染染料(如復(fù)紅) 結(jié)合牢固，能夠耐受酸性酒精的脫色；因而抗酸菌可以保持首染染料的顏色。與之相反，非抗酸菌和絕大多數(shù)人體細(xì)胞由于細(xì)胞結(jié)構(gòu)和菌體成分的限制，在首染染料染色后，容易被酸性酒精脫色，經(jīng)復(fù)染后成為復(fù)染染料的顏色。,45,.,細(xì)菌學(xué)常規(guī)檢查 直接涂片法,操作流程,涂 痰 膜 自 然 干 燥,復(fù) 紅 加 熱 初 染 5 分 鐘,自 然 干 燥 鏡 檢,流 水 沖 洗,美 蘭 復(fù) 染 30秒,鹽 酸 酒 精 脫 色,流 水 沖 洗,流 水 沖 洗,46,細(xì)菌學(xué)常規(guī)檢查 直接涂片法,顯微鏡檢報(bào)告方式： 0條/300視野： 萋-尼氏抗酸桿菌陰性 1-8條/300視野：實(shí)報(bào)菌數(shù) 3-9條/100視野：萋-尼氏抗酸桿菌陽性（+） 1-9條/10視野： 萋-尼氏抗酸桿菌陽性（2+） 1-9條/1視野： 萋-尼氏抗酸桿菌陽性（3+） 10條/1視野： 萋-尼氏抗酸桿菌陽性（4+）,47,（一）為防止抗酸桿菌的交叉污染，嚴(yán)禁油鏡頭直接接觸玻片上的痰膜。 （二）仔細(xì)觀察300以上的視野。 （三）每個(gè)工作日，一名鏡檢人員的玻片閱讀量一般不應(yīng)超過25張。 （四）連續(xù)閱讀1012張玻片后，應(yīng)休息20分鐘左右。,鏡檢讀片,48,.,痰涂片抗酸菌濃度與陽性結(jié)果機(jī)率 檢出菌數(shù) 每毫升標(biāo)本估算菌數(shù) 陽性結(jié)果機(jī)率 0/100或更多視野 1000 10 1-2/300視野 5000 - 10000 50 1-9/100視野 約30000 80 1-9/10視野 約50000 90（cv） 1-9/每視野 約100000 96.2（cv） 10或更多/每視野 約500000 99.95（cv）,49,查痰次數(shù)與陽性機(jī)率關(guān)系 為什么診斷前強(qiáng)調(diào)三涂兩培（3S 2C） 1 2 3 4 5,50,51,細(xì)菌學(xué)常規(guī)檢查 直接涂片法,注意事項(xiàng)： 選擇痰標(biāo)本中膿性、干酪樣的部分涂片陽性率較高； 一張玻片只涂一份標(biāo)本，玻片一次性使用，防止交叉污染； 打開痰盒、涂抹痰膜、燒灼接種環(huán)時(shí)容易產(chǎn)生氣溶膠，應(yīng)注意正確操作和自身防護(hù)； 石炭酸復(fù)紅初染時(shí)必須加溫。,52,細(xì)菌學(xué)常規(guī)檢查 直接涂片法,優(yōu)點(diǎn)： 是直接發(fā)現(xiàn)原菌的檢查方法，適用于痰、尿、便、體液、組織等幾乎一切標(biāo)本，有重要的臨床診斷價(jià)值。 是發(fā)現(xiàn)和確定傳染源的重要途徑，是考核和評價(jià)療效的重要指標(biāo)，有重要的流行病學(xué)意義； 操作簡便，價(jià)格低廉，適于各級實(shí)驗(yàn)室開展； 快速，數(shù)小時(shí)可報(bào)告結(jié)果。,53,細(xì)菌學(xué)常規(guī)檢查 直接涂片法,缺點(diǎn)： 敏感性低：通常每毫升含5000-10000條以上抗酸菌才可得到陽性結(jié)果； 特異性較低：只能報(bào)告“抗酸菌陽性”，不能區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分支桿菌； 鏡下只能觀察菌體形態(tài)，不能辨別死、活菌。,54,涂片鏡檢質(zhì)量保證系統(tǒng) 室內(nèi)質(zhì)控,標(biāo)本收集、染色液制備、涂片染色程序、顯微鏡鏡檢、顯微鏡的保養(yǎng)和維護(hù)、結(jié)果的報(bào)告和登記、痰片的分類保存等應(yīng)按照國家參比實(shí)驗(yàn)室的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格進(jìn)行操作。 復(fù)查方式： 自查：試驗(yàn)員當(dāng)日對已查涂片抽樣復(fù)查。 互查：由本實(shí)驗(yàn)室其他試驗(yàn)員抽查當(dāng)日10% 涂片。,55,涂片鏡檢質(zhì)量保證系統(tǒng)室間質(zhì)控,全國質(zhì)控系統(tǒng)：以參比實(shí)驗(yàn)室工作網(wǎng)為基礎(chǔ)，以 逐級督導(dǎo)為基本模式，以現(xiàn)場和非現(xiàn)場督導(dǎo)為主 要方式。 現(xiàn)場督導(dǎo)：上級實(shí)驗(yàn)室人員赴基層實(shí)驗(yàn)室就實(shí)驗(yàn)室布局、安全防護(hù)、污染物處理、涂片染色操作、顯微鏡維護(hù)狀況、日常實(shí)驗(yàn)記錄等進(jìn)行考核和指導(dǎo)，并以盲法、按比例抽取涂片復(fù)查。 非現(xiàn)場督導(dǎo)：防治人員依據(jù)盲法、按比例的原則抽取涂片交實(shí)驗(yàn)室復(fù)查。,56,一、實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)場評估,（一）目的： 實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)場評估是相應(yīng)實(shí)驗(yàn)室各項(xiàng)條件的調(diào)查總結(jié)和質(zhì)量提高的基本手段之一。 建立相關(guān)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)檔案：由被督導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室填寫結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室基本情況登記表，每次現(xiàn)場評價(jià)時(shí)需重新核實(shí)登記內(nèi)容。 調(diào)查相關(guān)實(shí)驗(yàn)室QA措施的制度和執(zhí)行情況； 調(diào)查相關(guān)實(shí)驗(yàn)室設(shè)備狀態(tài)及安全防護(hù)情況； 調(diào)查操作人員對相關(guān)檢查程序的認(rèn)知和掌握程度； 調(diào)查相關(guān)實(shí)驗(yàn)室影響AFB檢查質(zhì)量的因素并提出相應(yīng)質(zhì)量提高措施、督導(dǎo)改正。,57,結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室基本情況登記表,單 位 名稱： 實(shí)驗(yàn)室名稱： 主 任 姓名： 電話： 手機(jī)： 單 位 地址： 郵 編： 傳真： E-mail： 1.結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員登記,2.上一年實(shí)驗(yàn)室工作量統(tǒng)計(jì)：,58,現(xiàn)場評估調(diào)查程序 1.試劑,如有填寫“否”的項(xiàng)目，請簡要說明原因：,59,2. 耗材保障,60,3、實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù),如有填寫“否”的項(xiàng)目，請簡要說明原因：所有痰檢室僅一間，且做其它檢驗(yàn)項(xiàng)目；操作時(shí)未戴防護(hù)手套；蔡甸區(qū)無上下水,61,4、顯微鏡,如有填寫“否”的項(xiàng)目，請簡要說明原因：,62,5、用于EQA的玻片保存情況,63,6、玻片、染色和鏡檢,64,7、現(xiàn)場復(fù)檢 A. 現(xiàn)場評價(jià)時(shí)督導(dǎo)員至少要隨機(jī)抽查3張陽性玻片,65,AFB()玻片質(zhì)量評估圖例(1),涂抹較厚 (AFB),66,復(fù)紅染色不充分鏡下表現(xiàn),AFB菌體著色淺； AFB菌體異染顆粒不明顯； 較規(guī)范染色菌體細(xì)；,AFB()玻片質(zhì)量評估圖例(2),67,脫色不充分鏡下表現(xiàn)(1),AFB菌體異染顆粒不明顯 復(fù)染背景無法展現(xiàn) 背景細(xì)胞復(fù)染后顯色較深(呈棕/黑色),AFB()玻片質(zhì)量評估圖例(3),68,脫色不充分鏡下表現(xiàn)(2),菌體顏色不同； 易造成非抗酸菌的“抗酸性”；,AFB()玻片質(zhì)量評估圖例(3),69,脫色不充分鏡下表現(xiàn)(3),血痰中白細(xì)胞核出現(xiàn)“抗酸性”； 為避免假陽性結(jié)果，建議血痰標(biāo)本必須進(jìn)行重復(fù)脫色！,AFB()玻片質(zhì)量評估圖例(4),70,脫色時(shí)間過長鏡下表現(xiàn),AFB顏色呈桔黃色 AFB菌體/細(xì)胞與背景界線不明顯 復(fù)染著色度下降,AFB()玻片質(zhì)量評估圖例(5),71,復(fù)染時(shí)間過長鏡下表現(xiàn),背景著色較深 AFB菌體顏色被遮蓋,AFB()玻片質(zhì)量評估圖例(6),72,復(fù)檢樣本量計(jì)算表,73,復(fù)檢樣本量計(jì)算表說明：,a、玻片陽性率：指所有檢