觀察不同抗高血壓藥對(duì)腎血管性高血壓的降壓作用.doc

機(jī)能學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)大綱實(shí)驗(yàn)名稱：觀察不同抗高血壓藥對(duì)腎血管性高血壓的降壓作用課題來(lái)源：自選設(shè)計(jì)班級(jí)：04級(jí)臨本乙班設(shè)計(jì)人員：王仕全 廖周 唐浪 曾雷設(shè)計(jì)日期：2006.10.10指導(dǎo)老師：張曉 榮成 成都醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)技術(shù)教研室2006年制一、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的目的與意義，國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀，存在的問(wèn)題，解決問(wèn)題的思路。目的與意義: 通過(guò)本實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證聯(lián)合用藥能有效治療高血壓且副作用少，從而改變單一用藥副作用多易反彈。國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀：（1）高血壓是一種嚴(yán)重危害人體健康影響生活質(zhì)量的一種疾病，臨床表現(xiàn)有關(guān)頭痛且多發(fā)生在后腦部。還可有頭暈，頭脹，頸部扳住感，耳鳴，眼花，健忘，失眠，煩悶。乏力，四肢麻木，心悸等。也是造成肢體偏癱，心力衰竭，腦梗塞，腦出血，腎衰竭的重要原因。臨床上由高血壓發(fā)生致殘致死的病例屢見(jiàn)不鮮，故稱之為“隱形殺手”1。（2）高血壓最常見(jiàn)的疾病之一，按1991年全國(guó)高血壓抽樣調(diào)查的患病率和1990年普查城鄉(xiāng)男女所占百分比計(jì)算，我過(guò)1574歲年齡段中，城市男女患高血壓人數(shù)分別為1700和1300萬(wàn)，農(nóng)村分別為3500萬(wàn)和3000萬(wàn)。合計(jì)全國(guó)約有9500萬(wàn)名高血壓病人，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)英國(guó)，法國(guó)和德國(guó)，加拿大等西方國(guó)家的一國(guó)人口總數(shù)。1991年我國(guó)高血壓患病率比1979-1980約增加25%，并且此種患病率增加的趨勢(shì)仍在繼續(xù)。與高血壓相關(guān)的人腦血管疾病，已在我國(guó)很多地方成為超過(guò)世界腫瘤的最主要?dú)⑹?，它?duì)國(guó)民經(jīng)濟(jì)和人民生命財(cái)產(chǎn)造成的巨大損失難以計(jì)算；已成為我國(guó)治病防治工作面臨的巨大挑戰(zhàn)2。（3）美國(guó)FDA和美國(guó)NIH的全組顧問(wèn)委員會(huì)負(fù)責(zé)人認(rèn)為，絕大多數(shù)基因治療臨床實(shí)驗(yàn)沒(méi)有明顯的和不可預(yù)測(cè)的風(fēng)險(xiǎn)，基因治療的主流是好的，是具有廣闊前景的領(lǐng)域，應(yīng)該堅(jiān)持而不放棄。2000年3月，為進(jìn)一步加強(qiáng)臨床監(jiān)察力度，F(xiàn)DA和NIH公布了。兩項(xiàng)新措施：制定基因治療臨床試驗(yàn)監(jiān)察計(jì)劃和定期開(kāi)辦基因治療安全性專題研討會(huì)。相比之下，腺病毒作為載體受到廣泛關(guān)注，因?yàn)橄俨《綝NA不整合到宿主細(xì)胞基因中，對(duì)人體無(wú)遺傳毒性。自從FDA1995年批準(zhǔn)重組腺病毒用于人體實(shí)驗(yàn)至今，沒(méi)有任何使用腺病毒而引發(fā)腫瘤及其它遺傳性疾病的報(bào)道3。（4）目前有效的降壓藥物中，推薦使用CCB、ACE1或ARB及利尿劑、B-阻斷劑在高血壓藥物治療的地位逐漸下降。高血壓指南中所推薦的聯(lián)合用藥治療再一次被臨床試驗(yàn)所證實(shí)。ASCOT-BPLA研究首次證明了一種優(yōu)化組合方案在長(zhǎng)期高血壓治療中的益處。藥物干預(yù)可以預(yù)防和推遲高血壓的發(fā)生，我國(guó)近1億人處于高血壓前期，這個(gè)數(shù)據(jù)遠(yuǎn)高于美國(guó)。如果采用一種方法、預(yù)防或推遲這一人群發(fā)展高血壓，將對(duì)我們經(jīng)濟(jì)尚不發(fā)達(dá)的國(guó)家具有重要意義。鹽替代法可以對(duì)高血壓進(jìn)行敢于，CSSS研究證明，利用鹽替代法可以降血壓4。存在的問(wèn)題：目前高血壓患者漸趨增多，且市場(chǎng)上抗高血壓藥種類繁多。由于缺乏相關(guān)知識(shí)，很多高血壓患者出現(xiàn)濫用藥物的情況，為了尋找更好的藥物，我們?cè)O(shè)計(jì)此實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證是否聯(lián)合用藥優(yōu)于單一用藥。解決問(wèn)題的思路:復(fù)制腎性高血壓模型，采用注射不同的降壓藥觀察并記錄用藥前后血壓值，本實(shí)驗(yàn)采用自身對(duì)照。參考文獻(xiàn)：1.北京諾華制藥有限公司。健康田地。挑戰(zhàn)高血壓2 黃峻。王海燕主編。高血壓現(xiàn)代治療。前言，江蘇科學(xué)技術(shù)出版社。20003 藥立波主編。馮作化。周春燕副主編。醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)?；蛑委?。基因治療現(xiàn)狀。人民出版社。第2版4中國(guó)醫(yī)藥雜志 2006第8卷第4期雙月刊 269 2715腎臟病與透析移植雜志 2006.4 第15卷第2期 144-1516藥理學(xué) 第6版 楊寶峰 蘇定馮 244-2547內(nèi)科學(xué) 第6版 葉任高 陸再英 260-261二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案（實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)目標(biāo),擬解決的主要問(wèn)題, 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)計(jì),實(shí)驗(yàn)專業(yè)設(shè)計(jì)，實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)設(shè)計(jì),實(shí)驗(yàn)方法設(shè)計(jì)，可行性分析,預(yù)期結(jié)果，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)工作時(shí)間安排）。（一）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)目標(biāo)，擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題 設(shè)計(jì)目標(biāo)：探討聯(lián)合抗高血壓藥和單一用抗高血壓藥對(duì)腎性高血壓的降壓情況。并進(jìn)一步了解聯(lián)合用降壓藥是否優(yōu)于單一用藥，從而為臨床治療高血壓提供依據(jù)。擬解決的主要問(wèn)題：復(fù)制腎血管性高血壓模型。對(duì)腎血管性高血壓模型進(jìn)行分組與實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。（二）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)計(jì)我們選用家兔作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，有以下幾點(diǎn)理由：（1）、家兔易得到，容易飼養(yǎng)，在科研工作中被廣泛利用。（2）、腎血管性高血壓升高明顯，持久和恒定，較易反映出藥物的降壓作用。（3）、形成高血壓所需要的時(shí)間短，工作量較少。2、實(shí)驗(yàn)專業(yè)設(shè)計(jì) 選用家兔作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，復(fù)制腎血管性高血壓模型后分別注射不同的降壓藥觀察血壓降壓情況來(lái)判斷藥物的療效，觀察并記錄結(jié)扎腎動(dòng)脈前后的血壓（mmHg）及時(shí)間(h)等實(shí)驗(yàn)指標(biāo)。 3、實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)設(shè)計(jì) 實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)設(shè)計(jì)中應(yīng)始終貫徹隨機(jī)、對(duì)照、重復(fù)三大原則。（1）隨機(jī)：選正常成年健康體重相近的家兔30只，將30只家兔按體重由小變大編號(hào)后，從隨機(jī)數(shù)字表中查取隨機(jī)數(shù)字，依次抄錄于家兔編號(hào)下。具體方法：動(dòng)物編號(hào)為130號(hào)，隨機(jī)數(shù)字從11行第一個(gè)數(shù)字開(kāi)始接著抄寫30個(gè)，按照能被3除的規(guī)律：不余到A組，余1到B組，余2到 C組 .每組10只。 （2）對(duì)照：本組實(shí)驗(yàn)采用自身對(duì)照， 在前面的專業(yè)設(shè)計(jì)里已經(jīng)提及。（3）重復(fù)：本實(shí)驗(yàn)采用的是每實(shí)驗(yàn)小組有 10只家兔，具有一定的重復(fù)性。（4）統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)收集：本實(shí)驗(yàn)搜集計(jì)量資料，初步確定對(duì)各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的比較分為組內(nèi)和組間比較，分別采用均數(shù)和方差分析。表1家兔腎動(dòng)脈高血壓模型復(fù)制（血壓變化值） 動(dòng)物序號(hào) 結(jié)扎前血壓值（mmHg） 結(jié)扎后血壓值（mmHg） 1 2 29 30 均數(shù) X1 X2表2用藥前后血壓及差值記錄 序號(hào) A組B組C組注射利尿劑（n=10） 注射卡托普利(n=10) 聯(lián)合注射利尿劑與卡托普利(n=10) 用藥前 用藥后 差值 用藥前 用藥后 差值 用藥前 用藥后 差值 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 均數(shù) Ua1 Ua2 A Ub1 Ub2 B Uc1 Uc2 C 方差 Sa2 Sb2 Sc2 （5）統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)分析表1兩樣本采用均數(shù)比較，再采用t檢驗(yàn)，如X1與X2兩均數(shù)的比較，其方法如下：（1） 建立檢驗(yàn)假設(shè) H0：=（兩組血壓總體均值相等） H1：、不等或不全相等，0.05。（2）計(jì)算統(tǒng)計(jì)量 X=(X1+X2+X3+Xn)/n =(Xi-X)2/(n-1) t=（x-u）/Sx ( 3 ) 查t值表，確定P值，得出結(jié)論：若且、差值為20mmHg時(shí)，說(shuō)明高血壓模型復(fù)制成功。 本實(shí)驗(yàn)采用計(jì)量資料來(lái)測(cè)定各種指標(biāo)的數(shù)值，所有數(shù)據(jù)均采用平均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差（s）表示，三組間實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)比較行完全隨機(jī)單因素方差分析，組間血壓差值兩兩比較行q檢驗(yàn)， A.B.C組內(nèi)均數(shù)兩樣本比較采用t檢驗(yàn)，均以0.05作為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄如表2。三組間實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)比較行完全隨機(jī)單因素方差分析，如各組血壓總體均值的比較，其方法如下：(1)、建立檢驗(yàn)假：H0：=（各組血壓總體均值相等）。H1：、不等或不全相等，0.05。（2）計(jì)算統(tǒng)計(jì)量 利用統(tǒng)計(jì)學(xué)專業(yè)軟件SPSS做One-way ANOVA 。(3) 查F值表，確定P值，得出結(jié)論。4、實(shí)驗(yàn)方法設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線家兔B組實(shí)驗(yàn)組C組實(shí)驗(yàn)組水A組實(shí)驗(yàn)組 聯(lián)合注射利尿劑與卡托普利注射利尿劑注射卡托普利記錄血壓值記錄血壓值記錄血壓值 統(tǒng)計(jì)并分析數(shù)據(jù) 實(shí)驗(yàn)技術(shù)方法（1）隨機(jī)抽樣：隨機(jī)30只正常的家兔，并分別編號(hào)，再隨機(jī)平分成三組，并稱重 （2）實(shí)驗(yàn)分組：如統(tǒng)計(jì)設(shè)計(jì)所述。（3）實(shí)驗(yàn)手術(shù)：取兔，稱重（嬰兒秤）后固定于兔臺(tái)上，剪去頸部長(zhǎng)毛（換藥碗裝水）。用1%普魯卡因局麻（大約三公分長(zhǎng)，不同點(diǎn)局麻），切開(kāi)頸部皮膚（輕點(diǎn)，不要損傷氣管和血管），呈鈍形分離出氣管（分離干凈），做倒T形切口，插入氣管插管并結(jié)扎固定，分離頸外靜脈，靜脈插管。（4）模型復(fù)制：a.在距脊椎1-2cm處，從右側(cè)肋骨下緣往下切開(kāi)皮膚，切口長(zhǎng)4-5cm.b.切開(kāi)皮下組織和腰背筋膜，并在內(nèi)斜肌筋膜與外斜肌筋膜連接出切開(kāi)內(nèi)斜肌筋膜，即可見(jiàn)腎周圍組織。用手摸到腎臟及腎盂部分的腎動(dòng)脈，分離出腎動(dòng)脈。c.用線將腎動(dòng)脈結(jié)扎，造成腎動(dòng)脈部分狹窄。為了便于控制狹窄程度，結(jié)扎時(shí)在血管表面放置一相當(dāng)于腎動(dòng)脈直徑1/2的鐵絲，結(jié)扎后取出鐵絲。d.當(dāng)?shù)谝淮问中g(shù)引起的血壓升高下降到正常后，進(jìn)行第二次手術(shù)（左側(cè)）方法同第一次：注射降壓藥：（按照分組情況進(jìn)行操作）；觀察實(shí)驗(yàn)兔的血壓變化情況并記錄 。（三）可行性分析:1、家兔易得到，容易侍養(yǎng)，在科研工作中被廣泛利用。2、腎血管性高血壓升高明顯，持久和恒定，較易反映出藥物的降壓作用。3、形成高血壓所需要的時(shí)間短，工作量較少。4、手術(shù)器材和設(shè)備均為實(shí)驗(yàn)室常用，手術(shù)方法我們也相對(duì)熟練。（四）預(yù)期效果:1、腎血管性高血壓升高明顯，持久和恒定。2、單一用藥有降壓作用，但作用不很理想。 3、聯(lián)合注射利尿劑與卡托普利比其它兩組降壓作用明顯且穩(wěn)定。（五）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)工作時(shí)間安排:1、共計(jì)1D 完成藥物準(zhǔn)備。2、共計(jì) 1W完成實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型制備和取材 3、共計(jì)0.5D完成統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)分析4、總共實(shí)驗(yàn)在一周多完成。三、完成實(shí)驗(yàn)的條件1、儀器設(shè)備情況：本實(shí)驗(yàn)