以DC為基礎的腫瘤疫苗策略.ppt

2010 12 31 以DC為基礎的腫瘤疫苗策略 DC腫瘤疫苗的主要影響因素 樹突狀細胞dendriticcell DC 1973美國學者Steinman小鼠的脾細胞 因其成熟時伸出許多樹突樣或偽足樣突起而得名目前所知的功能最強的抗原提呈細胞 CD34骨髓干細胞 腫瘤疫苗dendriticcellvaccineDCvaccine 1 增強腫瘤的免疫原性2 增強機體的抗腫瘤免疫應答3 打破腫瘤免疫耐受 核心問題 誘導主動性免疫刺激宿主產(chǎn)生有效的免疫應答安全 無不良反應能為預防腫瘤復發(fā)提供保護性的長期免疫記憶功能 理想腫瘤疫苗 腫瘤疫苗的研究進展 疫苗的出現(xiàn)1796EdwardJenner接種疫苗 天花 腫瘤疫苗嘗試性研究提高腫瘤自身免疫原性的方法增加機體的抗腫瘤免疫反應1 WiUiamColey丹毒患者的活的鏈球菌 注射腫瘤患者腫瘤結節(jié)內(nèi) 激發(fā)起腫瘤患者機體對腫瘤的免疫應答 2 牛痘病毒感染的腫瘤細胞 腫瘤溶解物 注射人體3 混合卡介苗或短小棒狀桿菌 經(jīng)過照射滅活的腫瘤細胞 共孵育 注射人體 理論基礎的奠定1971BurnetThomas免疫監(jiān)視學說 臨床和實驗證據(jù)1 免疫缺陷 尤其是細胞免疫缺陷 腫瘤發(fā)生率 2 幼兒期 免疫功能未發(fā)育成熟 和老年期 免疫功能衰退 腫瘤發(fā)生率比其他年齡 3 經(jīng)抗淋巴細胞血清處理或胸腺摘除的小鼠腫瘤發(fā)生率高 腫瘤疫苗研究的飛躍20世紀末90年代初以基因修飾腫瘤細胞為基礎的疫苗發(fā)展腫瘤疫苗真正成為能夠應用于臨床的腫瘤治療方法1997年美國Jefferson大學約60 的黑色素細胞瘤轉移患者注射腫瘤疫苗后存活5年以上1998年波士頓研究人員制成一種經(jīng)生物工程改造的腫瘤疫苗 它包含一種可以刺激機體免疫系統(tǒng) 使 細胞保持較長時間的攻擊力 一 全腫瘤細胞疫苗1 經(jīng)物理 化學等方法處理的疫苗2 轉基因疫苗3 感染病毒類疫苗4 細胞融合疫苗 二 腫瘤抗原及抗原類分子疫苗該類疫苗的研究最為廣泛 該類疫苗特異性高 但免疫原性低1 抗原疫苗2 多肽類疫苗3 抗獨特型抗體疫苗4 熱休克蛋白 肽類復合物疫苗 三 核酸疫苗 四 重組病毒 病菌疫苗 五 樹突狀細胞疫苗 腫瘤疫苗新熱點近10年來以樹突狀細胞為基礎的腫瘤抗原特異性疫苗 1991年Steinman首次發(fā)現(xiàn)DC這一強大的抗原遞呈功能以來 DC就被用于腫瘤的免疫治療研究 轉基因疫苗 表達的共刺激分子 細胞因子 通過激活 細胞使更多的抗原被攝取呈遞 臨床試驗效果不如動物實驗 瘤細胞獲取復雜 滅活要求高 基因導入的安全問題 直接攜帶腫瘤抗原的DC細胞作用則更為直接 可以活化靜息 細胞 激發(fā)更強抗腫瘤免疫反應 DC疫苗 VS 易獲取 操作簡便 效果和轉基因疫苗相當甚至更好 美國密執(zhí)安大學 瑞士蘇黎世大學等應用樹突狀細胞分別攜帶乳腺癌 黑色素瘤抗原制備疫苗Dukes大學則應用腫瘤細胞 轉導 細胞均已進入 期或 期臨床試驗 2005年中山大學腫瘤醫(yī)院研發(fā)出一種除了干細胞移植 化療等常規(guī)治療方法外的白血病治療方法 白血病DC疫苗已在14位患者身上獲得明顯療效 國內(nèi)尚屬首創(chuàng) 1 腫瘤的免疫原性較弱 并具有抗原調變能力 2 MHC I類分子表達下降或消失 B7 ICAM 1等共刺激分子在癌細胞上的表達異常 腫瘤細胞高水平表達包括唾液酸在內(nèi)的粘多糖或其他的凝聚系統(tǒng) 血清中的封閉因子 封閉抗體 封閉腫瘤表面抗原表位 漏逸的少量腫瘤細胞不能引起足夠的免疫應答 反而可以刺激腫瘤不斷生長 產(chǎn)生免疫刺激 存在于某些腫瘤組織內(nèi)的淋巴細胞可以為腫瘤細胞提供某些腫瘤營養(yǎng)因子并刺激腫瘤細胞生長 Sakaguchi 等在1995年發(fā)現(xiàn)鼠源性的CD4CD25雙陽性T細胞亞群 能通過細胞與細胞間接觸以及分泌細胞因子顯著抑制多種免疫細胞的功能 局部微環(huán)境的腫瘤抗原可顯著誘導特異Treg細胞生成 稱為腫瘤特異Treg細胞 很多資料顯示Treg細胞在腫瘤微環(huán)境及患者外周血中富集存在 腫瘤免疫抑制因子可以使腫瘤細胞躲避局部免疫效應細胞的攻擊 還能進入外周血循環(huán) 抑制宿主全身抗腫瘤免疫功能 Lyon小組應用 微量樣本多指標流式蛋白定量技術 CytometricBeadArray CBA 對35例確診乳癌患者及24例疑似患者的樣本進行了檢測對比 得出在所測的IL 1B IL 2 IL4 IL 5 IL 6 IL 7 IL 8 IL 10 IL 12 p70 IL 13 IL 17 G CSF GM CSF IFN MCP 1 MIP 1B和TNF 細胞因子中 除了GM CSF INF 外 其他因子都有顯著的增高 Ishigami等的研究顯示 胃癌組織中DC數(shù)量與胃癌的淋巴結轉移 臨床分期和周圍浸潤呈負相關 1 未成熟DC與腫瘤細胞的直接接觸影響了DC的成熟 2 腫瘤細胞釋放的可溶性免疫抑制因子影響著全身的DC的成熟和功能 包括VEGF TNF TGF M CSF GM CSF IL 6和IL 10等 腫瘤局部DC浸潤數(shù)量可作為判斷腫瘤預后的獨立指標 以DC為基礎的腫瘤疫苗策略 以DC為基礎的腫瘤疫苗策略 以DC為基礎的腫瘤疫苗策略 1 腫瘤細胞 腫瘤細胞提取物沖擊DC 1 腫瘤細胞 腫瘤細胞提取物沖擊DC 1 腫瘤細胞 腫瘤細胞提取物沖擊DC Yasuda 1 腫瘤細胞 腫瘤細胞提取物沖擊DC 2 蛋白質沖擊DC 對于抗原表位尚不了解的腫瘤 可以可溶性蛋白作為抗原裝載DC在腫瘤動物模型和腫瘤患者中 以腫瘤抗原蛋白轉染的DC在體外和體內(nèi)均可誘導出針對腫瘤的抗原特異性CTL反應 3 腫瘤抗原肽沖擊DC 以腫瘤特異性抗原或腫瘤相關抗原肽裝載DC的腫瘤疫苗 4 腫瘤抗原DNA RNA沖擊DC 載體 4 腫瘤抗原DNA RNA沖擊DC DNA RNA疫苗可在體外合成而大量獲得 并可包含多個抗原表位 還可經(jīng)修飾使其功效加強 RNA疫苗只在宿主細胞的胞質中表達 DNA疫苗需進入細胞核后轉錄 癌變的潛在危險DNA疫苗穩(wěn)定性好 功效長久 5 腫瘤抗原在體內(nèi)沖擊DC 腫瘤抗原 GM CSF IL 4 脂質體 DC裝載抗原策略 免疫佐劑的使用 DC的體外擴增 免疫途徑 臨床病人的選擇 DC腫瘤疫苗的主要影響因素 DC的來源 DC的分離純化 DC的培養(yǎng)基 DC培養(yǎng)使用的細胞因子 DC細胞的鑒定 DC的培養(yǎng)技術 DC的來源 骨髓 取材有限 HSC含量極少 大約為1 105單個核細胞 BM為侵入性操作 患者不容易接受 其增殖及多向分化能力隨供者年齡增加體質衰弱而減弱 在體外培養(yǎng)過程中有自發(fā)分化和衰老的現(xiàn)象 且BM有病毒污染的可能 DC的來源 外周血 其端粒及端粒酶活性均長于和高于BM及PBHSC HPC 并且低表達或不表達細胞凋亡配基CD95 Fas 故體外生存期更長 DC的來源 臍帶血 臍帶血 優(yōu)點 缺點 產(chǎn)量大 純度高等母嬰無不良影響 不涉及社會 倫理及法律等方面的爭論 受胎盤屏障保護 被污染概率低 CB量較少 通常只有50 150ml CBHSC對理化變化較敏感 洗滌 分離或運用傳統(tǒng)方法去除紅細胞的方法均會導致HSC的嚴重丟失 分離純化 聯(lián)合 DC的培養(yǎng)基 細胞因子 GM CSF IL 4 IL 4通過抑制單核細胞向巨噬細胞方向的分化而誘導其向DC方向分化 IL 4可以增加并穩(wěn)固GM CSF誘導的CD1a的表達 IL 4與極低濃度GM CSF協(xié)同刺激iDC后 促進DC成熟 上調MHC 和共刺激分子表達 IL 4還能促進IL 12分泌 TNF DC的鑒定 形態(tài)學鑒定表面特異性標記物的鑒定 CD1a CD83 功能學鑒定 混合淋巴細胞反應促T細胞增殖作用DC分泌IL 12的檢測 DC的鑒定 形態(tài)學鑒定表面特異性標記物的鑒定 CD1a CD83 功能學鑒定 混合淋巴細胞反應促T細胞增殖作用DC分泌